阿帕替尼对非小细胞肺癌氨基酸代谢及免疫微环境的影响及机制研究

发布时间：2021-03-22 21:37

　　第一部分:阿帕替尼对非小细胞肺癌氨基酸代谢的影响及机制探讨目的:探索阿帕替尼对非小细胞肺癌氨基酸代谢的影响及相应的调控机制。方法:将阿帕替尼作用于人源性非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞系A549及H460。使用CCK8、Ed U试剂盒及克隆形成实验检测细胞增殖;Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡;周期试剂盒检测细胞周期分布;Cyto-ID试剂盒、Western blot、GFP-LC3质粒转染及透射电镜检测细胞自噬水平;GC-FID及LC-MS检测细胞内氨基酸含量;2-NBDG摄取实验检测细胞糖摄取水平;Seahorse实验检测细胞糖酵解代谢水平;RNA-seq测序检测相关调控通路,并使用si RNA沉默关键基因ATF4（Activating transcription factor4）后进行验证;通过sh RNA沉默H460细胞中的ATF4表达后构建裸鼠移植瘤模型,根据移植瘤生长曲线检测阿帕替尼与ATF4沉默的体内协同作用。结果:（1）阿帕替尼致NSCLC细胞株增殖被显著抑制,呈剂量及时间依赖:中高浓度阿帕替尼可以诱导细胞... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

阿帕替尼对NSCLC细胞系A549及H460增殖的影响

华中科技大学博士学位论文24实验发现阿帕替尼作用后两种细胞的克隆形成能力均降低，呈剂量依赖性。图2：阿帕替尼对A549、H460细胞克隆形成能力的影响。左为克隆图片，右为克隆数目统计图。Ap：阿帕替尼；***P<0.001。2.3低浓度阿帕替尼对A549及H460细胞凋亡诱导作用不显著药物对肿瘤细胞的杀伤作用常常是通过诱导细胞凋亡来达成的。我们使用Annexin-V和PI双染，流式检测不同浓度的阿帕替尼作用于两种细胞48h后的凋亡细胞比例，发现细胞在中高浓度药物（40μM及以上）作用下才出现显著的凋亡，而在可以抑制细胞增殖的浓度（20μM）并未出现明显的凋亡，提示低浓度的阿帕替尼对肿瘤的抑制作用可能不是通过诱导凋亡导致的。图3：阿帕替尼对A549、H460细胞凋亡的影响。上为流式图，下为凋亡细胞比例统计图。Ap：阿帕替尼；NS：无显著性差异；***P<0.001。

华中科技大学博士学位论文24实验发现阿帕替尼作用后两种细胞的克隆形成能力均降低，呈剂量依赖性。图2：阿帕替尼对A549、H460细胞克隆形成能力的影响。左为克隆图片，右为克隆数目统计图。Ap：阿帕替尼；***P<0.001。2.3低浓度阿帕替尼对A549及H460细胞凋亡诱导作用不显著药物对肿瘤细胞的杀伤作用常常是通过诱导细胞凋亡来达成的。我们使用Annexin-V和PI双染，流式检测不同浓度的阿帕替尼作用于两种细胞48h后的凋亡细胞比例，发现细胞在中高浓度药物（40μM及以上）作用下才出现显著的凋亡，而在可以抑制细胞增殖的浓度（20μM）并未出现明显的凋亡，提示低浓度的阿帕替尼对肿瘤的抑制作用可能不是通过诱导凋亡导致的。图3：阿帕替尼对A549、H460细胞凋亡的影响。上为流式图，下为凋亡细胞比例统计图。Ap：阿帕替尼；NS：无显著性差异；***P<0.001。


本文编号：3094519