天然水蛭素对大鼠超长随意型皮瓣淤血损伤的保护作用及对人微血管内皮细胞凋亡的影响研究
发布时间：2021-03-23 13:46
随意型皮瓣指在皮瓣中不含轴型血管,仅有真皮层血管网、真皮下层血管网进行血供,当其长宽比例过大（长:宽>3:1）时称为超长随意皮瓣,皮瓣远端会出现血运循环障碍,导致皮瓣坏死。由于临床中需要修复的创面不规则,使得超长随意皮瓣的需求增多。但是,由于超长随意皮瓣静脉淤血并发症引起皮瓣坏死的问题导致超长随意皮瓣在临床上的使用受到限制。活体水蛭疗法是将水蛭放置在淤血皮瓣上,通过水蛭的吸吮作用和分泌抗凝血物质使得皮瓣瘀滞的血液排出,防止血液凝固保持血流通畅。活体水蛭疗法被认为是救治皮瓣静脉淤血并发症的标准疗法,但是由于活体水蛭生活习性使得其推广受到限制,同时活体水蛭携带多种病菌使得其临床应用受到限制。天然水蛭素是活体水蛭发挥抗凝作用的物质之一,是凝血酶的特异性拮抗剂。我们前期研究发现动物皮瓣术后可出现缺血缺氧、凝血酶增多启动炎症瀑布式反应等多种因素影响皮瓣存活,而大鼠背部超长随意皮瓣术后局部注射天然水蛭素能增加动物皮瓣成活面积,其机制与天然水蛭素抗炎症反应、抗氧化作用、促血管生成作用有关,但天然水蛭素对血管内皮细胞凋亡作用的相关分子机制研究尚少。酪氨酸蛋白激酶/信号转导子和转录激活子（Janu...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
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天然水蛭素对大鼠超长随意型皮瓣淤血损伤的保护作用及对人微血管内皮细胞凋亡的影响研宄?２０１６级博士学位论文??阳性细胞的数量较天然水蛭素组多（ＰＣ０．０５，图３和表２）；皮瓣移植术后第??五天，对照组ＴＵＮＥＬ阳性细胞较术后第一天增多（Ｐ＜〇．〇５，图３－４对照??组和表２），且较天然水蛭素组ＴＵＮＥＬ阳性细胞多（ＰＣ０．０５，图４和表２）；??反观天然水蛭素组，皮瓣移植术后第一天，ＴＵＮＥＬ阳性细胞较少，皮瓣移??植术后第五天，ＴＵＮＥＬ阳性细胞有了明显上升（Ｐ＜０．０５ｖｓ．ｄａｙｌ图３－４天??然水蛭素组和表２）。由此推断，皮瓣移植术后皮瓣组织发生了细胞凋亡且??天然水蛭素局部皮下注射可减少细胞凋亡。??■?Ｉ＇?；｜?Ｈｉｒｕｄｉｎ??ＤＡＰＩ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄＵＴＰ??图３皮瓣移植术后第一天ＴＵＮＥＬ法检测各组组织细胞凋亡结果（ｘ４〇〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?３?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｒａｔ?ｆｌａｐ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐｓ?ａｔ?ｄａｙ?１?ａｆｔｅｒ?ｆｌａｐ?ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ??注：蓝色荧光为细胞核（ＤＡＰＩ显色），绿色荧光为凋亡细胞核（ＴＵＮＥＬ阳性）。细胞凋亡率＝ＴＵＮＥＬ??阳性细胞核／总细胞核ｘ?］?００％。??３２??
天然水蛭素对大鼠超长随意型皮瓣淤血损伤的保护作用及对人微血管内皮细胞凋亡的影响研宂?２０１６级博士学位论文??■?■Ｉ??■?｜?ｒ?ｊ?Ｈｉｒｕｄｉｎ??ｎ??ＤＡＰＩ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄＵＴＰ??图４皮瓣移植术后第五天ＴＵＮＥＬ法检测各组组织细胞凋亡结果（ｘ４００）??Ｆｉｇｕｒｅ?４?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｒａｔ?ｆｌａｐ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐｓ?ａｔ?ｄａｙ?５?ａｆｔｅｒ?ｆｌａｐ?ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ??注：蓝色荧光为细胞核（ＤＡＰＩ显色），绿色荧光为凋亡细胞核（ＴＵＮＥＬ阳性）。细胞凋亡率＝ＴＵＮＥＬ??阳性细胞核／总细胞核ｘ?１００％。??表２?术后各组皮瓣细胞凋亡率土ｓ，?ｎ＝１２，?％）??Ｔａｂｌｅ?２?ＴＵＮＥＬ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｉｎ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ??Ｇｒｏｕｐ?ｎ?术后Ｉｄ?术后５ｄ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?１２?１６．２５?±?１．０８?３１．６７±２．１６??Ｈｉｒｕｄｉｎ?１２?１０．５０?±６．６６＊?１４．３３?±４．３２＊??注：＊Ｐ＜０．０５?ｖｓ．对照组，差别有统计学意义；组内术后５ｄ时ＴＵＮＥＬ阳性细胞数与术后Ｉｄ时相比，??差异有统计学显著性意义（Ｐ＜〇．〇５）。??３．４免疫组织化学染色??３．４．１?Ｐ－ＪＡＫ２?染色??为了解对照组和天然水蛭素组大鼠皮瓣组织中Ｐ－ＪＡＫ２的表达情况，??我们选用免疫组织化学染色进行检测。显微镜下观察，呈ＪＡＫ２阳性表达的??细胞表现为细胞浆及细胞核内出现棕色颗粒状物质。根据阳性细胞的染色??程度：无着色细胞（－），浅黄色（＋?），掠
【参考文献】：
期刊论文
[1]脑缺血再灌注损伤中自由基与锌离子的相互作用[J]. 房亚兰,尹洁,刘克建,赵咏梅. 首都医科大学学报. 2018(03)
[2]线粒体自噬在肾缺血-再灌注损伤中的作用[J]. 王天宇,周江桥. 器官移植. 2018(03)
[3]天然水蛭素联合高压氧治疗对大鼠随意皮瓣成活的影响研究[J]. 蔡洁云,林博杰,潘新元,崔佳,Pradhan Rohan,殷国前. 中国修复重建外科杂志. 2018(04)
[4]低氧条件下沉默HIF-1α与TNF-α、IL-6的相关性研究及人真皮微血管内皮细胞生物学行为的变化[J]. 罗鸿,桂福强,刘洪,张矛,赵渝. 中国细胞生物学学报. 2018(01)
[5]水蛭素调节断指再植大鼠皮瓣成活、血管生成、炎症因子表达的作用[J]. 刘涛,朱宏涛,戴黎明. 药物评价研究. 2018(01)
[6]抗血栓药物临床应用研究[J]. 王胜红. 临床医学研究与实践. 2017(10)
[7]水蛭素对大鼠缺血皮瓣血运恢复与新生血管生成的影响[J]. 韦骎兮,殷国前,潘新元,苏映军,庞进军,余奇松,彭鎏,朱江英,陈子翔,陆思锭. 中华医学美学美容杂志. 2016 (05)
[8]基于凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤的模型研究[J]. 覃弘宇,李银,李定祥,邓奕辉. 重庆医学. 2016(27)
[9]水蛭素治疗骨折后伴发下肢静脉血栓的临床疗效及可能机制[J]. 杨燕菲,吴鹏. 中国生化药物杂志. 2016(06)
[10]水蛭素治疗深静脉血栓形成后综合征的临床研究[J]. 杨光唯,来集富,卢惟钦,蒋劲松. 中药材. 2016(03)
本文编号：3095901
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１?ＳＤ大鼠背部皮瓣设计??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｄｅｓｉｇｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌａｐ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｒａｔ?ｂａｃｋ??
天然水蛭素对大鼠超长随意型皮瓣淤血损伤的保护作用及对人微血管内皮细胞凋亡的影响研宄?２０１６级博士学位论文??阳性细胞的数量较天然水蛭素组多（ＰＣ０．０５，图３和表２）；皮瓣移植术后第??五天，对照组ＴＵＮＥＬ阳性细胞较术后第一天增多（Ｐ＜〇．〇５，图３－４对照??组和表２），且较天然水蛭素组ＴＵＮＥＬ阳性细胞多（ＰＣ０．０５，图４和表２）；??反观天然水蛭素组，皮瓣移植术后第一天，ＴＵＮＥＬ阳性细胞较少，皮瓣移??植术后第五天，ＴＵＮＥＬ阳性细胞有了明显上升（Ｐ＜０．０５ｖｓ．ｄａｙｌ图３－４天??然水蛭素组和表２）。由此推断，皮瓣移植术后皮瓣组织发生了细胞凋亡且??天然水蛭素局部皮下注射可减少细胞凋亡。??■?Ｉ＇?；｜?Ｈｉｒｕｄｉｎ??ＤＡＰＩ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄＵＴＰ??图３皮瓣移植术后第一天ＴＵＮＥＬ法检测各组组织细胞凋亡结果（ｘ４〇〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?３?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｒａｔ?ｆｌａｐ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐｓ?ａｔ?ｄａｙ?１?ａｆｔｅｒ?ｆｌａｐ?ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ??注：蓝色荧光为细胞核（ＤＡＰＩ显色），绿色荧光为凋亡细胞核（ＴＵＮＥＬ阳性）。细胞凋亡率＝ＴＵＮＥＬ??阳性细胞核／总细胞核ｘ?］?００％。??３２??
天然水蛭素对大鼠超长随意型皮瓣淤血损伤的保护作用及对人微血管内皮细胞凋亡的影响研宂?２０１６级博士学位论文??■?■Ｉ??■?｜?ｒ?ｊ?Ｈｉｒｕｄｉｎ??ｎ??ＤＡＰＩ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄＵＴＰ??图４皮瓣移植术后第五天ＴＵＮＥＬ法检测各组组织细胞凋亡结果（ｘ４００）??Ｆｉｇｕｒｅ?４?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｒａｔ?ｆｌａｐ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐｓ?ａｔ?ｄａｙ?５?ａｆｔｅｒ?ｆｌａｐ?ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ??注：蓝色荧光为细胞核（ＤＡＰＩ显色），绿色荧光为凋亡细胞核（ＴＵＮＥＬ阳性）。细胞凋亡率＝ＴＵＮＥＬ??阳性细胞核／总细胞核ｘ?１００％。??表２?术后各组皮瓣细胞凋亡率土ｓ，?ｎ＝１２，?％）??Ｔａｂｌｅ?２?ＴＵＮＥＬ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｉｎ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ??Ｇｒｏｕｐ?ｎ?术后Ｉｄ?术后５ｄ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?１２?１６．２５?±?１．０８?３１．６７±２．１６??Ｈｉｒｕｄｉｎ?１２?１０．５０?±６．６６＊?１４．３３?±４．３２＊??注：＊Ｐ＜０．０５?ｖｓ．对照组，差别有统计学意义；组内术后５ｄ时ＴＵＮＥＬ阳性细胞数与术后Ｉｄ时相比，??差异有统计学显著性意义（Ｐ＜〇．〇５）。??３．４免疫组织化学染色??３．４．１?Ｐ－ＪＡＫ２?染色??为了解对照组和天然水蛭素组大鼠皮瓣组织中Ｐ－ＪＡＫ２的表达情况，??我们选用免疫组织化学染色进行检测。显微镜下观察，呈ＪＡＫ２阳性表达的??细胞表现为细胞浆及细胞核内出现棕色颗粒状物质。根据阳性细胞的染色??程度：无着色细胞（－），浅黄色（＋?），掠
【参考文献】：
期刊论文
[1]脑缺血再灌注损伤中自由基与锌离子的相互作用[J]. 房亚兰,尹洁,刘克建,赵咏梅. 首都医科大学学报. 2018(03)
[2]线粒体自噬在肾缺血-再灌注损伤中的作用[J]. 王天宇,周江桥. 器官移植. 2018(03)
[3]天然水蛭素联合高压氧治疗对大鼠随意皮瓣成活的影响研究[J]. 蔡洁云,林博杰,潘新元,崔佳,Pradhan Rohan,殷国前. 中国修复重建外科杂志. 2018(04)
[4]低氧条件下沉默HIF-1α与TNF-α、IL-6的相关性研究及人真皮微血管内皮细胞生物学行为的变化[J]. 罗鸿,桂福强,刘洪,张矛,赵渝. 中国细胞生物学学报. 2018(01)
[5]水蛭素调节断指再植大鼠皮瓣成活、血管生成、炎症因子表达的作用[J]. 刘涛,朱宏涛,戴黎明. 药物评价研究. 2018(01)
[6]抗血栓药物临床应用研究[J]. 王胜红. 临床医学研究与实践. 2017(10)
[7]水蛭素对大鼠缺血皮瓣血运恢复与新生血管生成的影响[J]. 韦骎兮,殷国前,潘新元,苏映军,庞进军,余奇松,彭鎏,朱江英,陈子翔,陆思锭. 中华医学美学美容杂志. 2016 (05)
[8]基于凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤的模型研究[J]. 覃弘宇,李银,李定祥,邓奕辉. 重庆医学. 2016(27)
[9]水蛭素治疗骨折后伴发下肢静脉血栓的临床疗效及可能机制[J]. 杨燕菲,吴鹏. 中国生化药物杂志. 2016(06)
[10]水蛭素治疗深静脉血栓形成后综合征的临床研究[J]. 杨光唯,来集富,卢惟钦,蒋劲松. 中药材. 2016(03)
本文编号：3095901
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