惊厥持续状态后海马树突与小胶质细胞表型的动态变化

发布时间：2021-03-23 13:31

　　第一部分惊厥持续状态后海马损伤与树突的变化目的:确立腹腔注射海人藻酸（kainic acid,KA）建立惊厥持续状态（Status Convulsion,SC）及癫痫模型。评估不同年龄鼠SC后第7天、14天及28天海马突触的损伤状况及海马DG、CA1及CA3区树突、树突棘（Dendritic spine,DS）的动态变化。方法:以8周龄（成年）、14天龄（幼年）C57BL/6J雄性小鼠为对象,分为正常对照组和SC模型组,SC模型组采用腹腔注射KA诱导SC,正常照组腹腔注射等剂量0.9%氯化钠溶液,观察各组诱导SC发作以及SC后自发性癫痫发作（Spontaneous recurrent seizures,SRS）情况,并对成年鼠进行同步脑电检测验证。在SC后第7天、14天及28天时间点上,使用Western blot检测成年及未成年鼠海马突触囊泡蛋白（Synaptophysin,SYP）、突触后致密蛋白-95（Postsynaptic density95,PSD-95）及生长相关蛋白-43（Growth Associated Protein 43,GAP-43）的表达情况。用Golgi-... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

动物分组Fig.1-1Animalgroups

重庆医科大学博士研究生学位论文41（2）图像分析：每只鼠选取4张含有海马背侧的脑组织切片，每张切片含有左右2个海马，每侧海马的DG区、CA1区及CA3区各随机选择2个视野，每区共4个视野，使用ImageJ，NeuronStudio及Photoshop进行图像分析。对海马CA1区、CA3区的锥体细胞，以及DG区的颗粒细胞进行树突复杂性、树突总长度、DS密度及DS种类进行观察及分析。用测量结果的均值进行比较。①树突复杂性分析方法：树突复杂性是指神经元树突的总长度及分枝情况。Shollanalysis是以神经元胞体为圆心（不包括胞体）开始按照每10μm的距离画一系列同心圆，得到随着距离从圆心到最远距离的同心圆与神经元的树突可形成数个交点，用交点个数的变化来反映树突复杂性（图1-2）[13]。本研究使用Sholl-Analysis方法分析成年及幼年鼠在SC后第7天、14天及28天海马CA1及CA3区的锥体细胞，及DG区的颗粒细胞的树突与同心圆的交点，并测量这一神经元的树突总长度。图1-2ShollAnalysis分析树突与同心圆的交点Fig.1-2ShollAnalysisfortheintersectionofdendritesandtheconcentriccircles②DS密度及类型的分析：100×油浸物镜下选择长度≥50μm的三级树突分

重庆医科大学博士研究生学位论文42析。选择符合以下所有标准的树突进行分析：I）树突全长连续不中断；II）所有树突颜色深且均匀；III）能够与附近神经元的树突区分开，可以避免干扰分析。利用100×油浸物镜在白光下进行照相，利用Z-Stack技术扫描（厚度120μm；Z-step：2μm），用反卷积技术合成三维图像。这种方法弥补了二维图像评估方法可能低估了棘突数量的缺陷。测量120μm层厚的脑组织中的树突长度，选择30μm长的树突进行分析。DS分为以下几类：1）细长型：颈部细长，头部小而圆（长＜2μm）；2）蘑菇型：颈部细而粗，头部大（宽＞0.6μm）；3）短粗型，没有可分辨的颈（长：宽=1：1）；IV）分枝型：头部分为多个分枝；V）丝状伪足：细而长，无颈部（长＞2μm）。（图1-3）图1-3DS的形态Fig.1-3ThemorphologyofDSs2数据统计实验数据以均值±标准差（x±SD）表示，采用GraphPadPrism8软件进行统计分析及制作统计图，采用单因素方差分析one-wayANOVA及t检验进行组间比较进行组间比较，P<0.05认为差异有统计学意义。


本文编号：3095881