人CEACAM1源性多肽抑制血小板活化的研究
发布时间：2021-03-25 04:27
[目 的]癌胚抗原相关粘附分子1（CEACAM1）表达于血小板膜上,起负性调节血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ（GPVI）的作用。CEACAM1胞内段的免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIMs）可以抑制GPVI-FcRγ链复合物中FcRγ胞内段的免疫受体酪氨酸激活基序（ITAMs）介导的血小板活化信号转导,但迄今对CEACAM1胞外段结构域在血小板功能调控中的作用仍知之甚少。前期研究提示:胶原刺激血小板释放的基质金属蛋白酶-12（MMP-12）可以酶切血小板膜蛋白CEACAM1胞外段结构域,CEACAM1被酶切后其抑制功能可能受损,导致胶原活化血小板的效应增强。但CEACAM1胞外段的可溶性酶切片段对血小板功能的影响尚不明确,其作用机制也有待进一步探讨。为此,我们研究了CEACAM1胞外段结构域及可溶性酶切片段对血小板功能的影响,并且对相关的机制进行了探索。本研究为阐明CEACAM1负性调节血小板活化的机制、研发新型抗血小板药物提供新的思路。[方 法]第一部分:本部分旨在探索CEACAM1胞外段结构域以及可溶性酶切片段对血小板功能的影响。采用血小板聚集仪观察了表达纯化的人CEACAM1胞外段结构域蛋白...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１：?ｒｈＣＥＡＣＡＭｌ－ｌ源性多肽对不Ｍ血小板激活剂诱导的血小板聚Ｉｆｃ的影响
ＡＢＣ??Ｔｈｒｏｍｂｉｎ?０．０５Ｕ／ｍＬ?ＡＤＰ?ＡＡ０．１７Ｍ??８０－ｉ?４０－ｉ?５０－．??＊?ｉＭ－ａｉ??ｎ?＾１１?ｎ??ｔ，?ｌ?，?ｉ?丨?ｉ?ＪｍｍｍＵ??，／?ｙ，?ｗ?，人＜／，??ＱＤＴＴ?ＱＤＴＴ?ＱＤＴＴ??图２－４：凝血酶、ＡＤＰ、ＡＡ刺激引起的血小板聚集被ＱＤＴＴ抑制??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４．?ＱＤＴＴ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?ｔｈｒｏｍｂｉｎ，?ＡＤＰ，?ＡＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｌａｔｅｌｅｔ?ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．??ＱＤＴＴ?（５〇ｎＭ，?２５０［ｉＭ，５００ｐＭ）在?３７°Ｃ下与洗涤血小板（２００ｘｌ０９／ｍＬ）孵育?１０?分钟??后，使用低浓度的（Ａ）凝血酶（０．０５Ｕ／ｉｉｉＬ），?（Ｂ）ＡＤＰ?（ｌＯｐＭ），?（Ｃ）ＡＡ?（０．１７Ｍ）诱导血??小板聚集。血小板聚集峰值以均数士标准误表示，ｎ＝４。与对照组（Ｖｅｈｉｃｌｅ）比较，＊ｐ＜??０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，?＊＊，＜０．００１。??４．?ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ对血小板－胶原粘附作用的影响??血管内皮因损伤而暴露内皮下基质，刺激血小板粘附、活化及聚集，引起止??血和血栓形成。调节血小板静态粘附的主要膜蛋白有两个，他们分别是ＧＰＶＩ和??ｏｔ２ｐｌ，其中ＧＰＶＩ为介导胶原诱导的血小板聚集和粘附的主要受体，而ｃｃ２ｐｉ主??要参与调节血小板的粘附。为进一步明确ＣＥＡＣＡＭ１胞外段蛋白及酶切片段对??血小板活化功能的影响，本研究观察了?ｒｈＣＥＡＣＡＭｌ，?ｒｈＣＥＡＣＡＭｌ－１，?ＱＤＴＴ，??ＱＬＳＮ对血小板静态粘附于胶原的影响。不同浓度的ｒｈＣＥＡＣＡＭＫｌＯｎＭ，?１００ｎＭ，??５ｊａＭ）
图４－１：?ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ以及Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ、Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ对胶原诱导的血小板聚集的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１．?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＱＤＴ１＼?ＱＬＳＮ?ａｎｄ?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ．?Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ?ｏｎ?ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ??ｐｌａｔｅｌｅｔ?ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．??ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ?以及?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ、Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ?在?３７°Ｃ下与洗涤血小板（２００ｘ１０９／ｍＬ）孵育?１０??分钟后，使用胶原（２ｎｇ／ｍＬ）诱导血小板聚集。血小板聚集峰值以均数土标准误表示，ｎ＝３。??ＮＳ．组间统计，／？〉０．０５。??我们已经通过血小板聚集率检测方法，确定Ｈｉｓ－标签对ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ的活??性无明显影响，因此拟采用ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ的方法将与其互作的蛋白筛选出来。５００??＿?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ及５０?＿?Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ与洗涤人血小板膜蛋白提取液孵育后与Ｎｉ?２＋??－Ａｇａｒｏｓｅ结合，洗脱物经上样缓冲液处理进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳，凝胶染色??后脱色并拍照。如图４－２所示，对照组与实验组并未犮现明显的差兄性条带。??Ａ?Ｂ??Ｍ?１?２?３?４?Ｍ?１?２?３?４??鎖：１?＇＾１??４０－??２５－鉍??３０－??Ｉ??１０－?２５－??图４－２：血小板裂解液屮１ｊ?Ｈｉｓ－?ＱＤＴＴ／ＱＬＳＮ相互作用的蛋白的筛选??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２．?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ／ＱＬＳＮ?ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｓ?ｆｒｏｍ?ｐｌａｔｃｌｅｌ?ｌｙｓａｔｅｓ．??洗涤血小板（２００ｘｌ０９／Ｌ）裂解液与Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ、Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ或ＤＭＳＯ溶剂对照于４°Ｃ下孵??育过
本文编号：3099023
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１：?ｒｈＣＥＡＣＡＭｌ－ｌ源性多肽对不Ｍ血小板激活剂诱导的血小板聚Ｉｆｃ的影响
ＡＢＣ??Ｔｈｒｏｍｂｉｎ?０．０５Ｕ／ｍＬ?ＡＤＰ?ＡＡ０．１７Ｍ??８０－ｉ?４０－ｉ?５０－．??＊?ｉＭ－ａｉ??ｎ?＾１１?ｎ??ｔ，?ｌ?，?ｉ?丨?ｉ?ＪｍｍｍＵ??，／?ｙ，?ｗ?，人＜／，??ＱＤＴＴ?ＱＤＴＴ?ＱＤＴＴ??图２－４：凝血酶、ＡＤＰ、ＡＡ刺激引起的血小板聚集被ＱＤＴＴ抑制??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４．?ＱＤＴＴ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?ｔｈｒｏｍｂｉｎ，?ＡＤＰ，?ＡＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｌａｔｅｌｅｔ?ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．??ＱＤＴＴ?（５〇ｎＭ，?２５０［ｉＭ，５００ｐＭ）在?３７°Ｃ下与洗涤血小板（２００ｘｌ０９／ｍＬ）孵育?１０?分钟??后，使用低浓度的（Ａ）凝血酶（０．０５Ｕ／ｉｉｉＬ），?（Ｂ）ＡＤＰ?（ｌＯｐＭ），?（Ｃ）ＡＡ?（０．１７Ｍ）诱导血??小板聚集。血小板聚集峰值以均数士标准误表示，ｎ＝４。与对照组（Ｖｅｈｉｃｌｅ）比较，＊ｐ＜??０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，?＊＊，＜０．００１。??４．?ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ对血小板－胶原粘附作用的影响??血管内皮因损伤而暴露内皮下基质，刺激血小板粘附、活化及聚集，引起止??血和血栓形成。调节血小板静态粘附的主要膜蛋白有两个，他们分别是ＧＰＶＩ和??ｏｔ２ｐｌ，其中ＧＰＶＩ为介导胶原诱导的血小板聚集和粘附的主要受体，而ｃｃ２ｐｉ主??要参与调节血小板的粘附。为进一步明确ＣＥＡＣＡＭ１胞外段蛋白及酶切片段对??血小板活化功能的影响，本研究观察了?ｒｈＣＥＡＣＡＭｌ，?ｒｈＣＥＡＣＡＭｌ－１，?ＱＤＴＴ，??ＱＬＳＮ对血小板静态粘附于胶原的影响。不同浓度的ｒｈＣＥＡＣＡＭＫｌＯｎＭ，?１００ｎＭ，??５ｊａＭ）
图４－１：?ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ以及Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ、Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ对胶原诱导的血小板聚集的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１．?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＱＤＴ１＼?ＱＬＳＮ?ａｎｄ?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ．?Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ?ｏｎ?ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ??ｐｌａｔｅｌｅｔ?ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．??ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ?以及?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ、Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ?在?３７°Ｃ下与洗涤血小板（２００ｘ１０９／ｍＬ）孵育?１０??分钟后，使用胶原（２ｎｇ／ｍＬ）诱导血小板聚集。血小板聚集峰值以均数土标准误表示，ｎ＝３。??ＮＳ．组间统计，／？〉０．０５。??我们已经通过血小板聚集率检测方法，确定Ｈｉｓ－标签对ＱＤＴＴ、ＱＬＳＮ的活??性无明显影响，因此拟采用ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ的方法将与其互作的蛋白筛选出来。５００??＿?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ及５０?＿?Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ与洗涤人血小板膜蛋白提取液孵育后与Ｎｉ?２＋??－Ａｇａｒｏｓｅ结合，洗脱物经上样缓冲液处理进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳，凝胶染色??后脱色并拍照。如图４－２所示，对照组与实验组并未犮现明显的差兄性条带。??Ａ?Ｂ??Ｍ?１?２?３?４?Ｍ?１?２?３?４??鎖：１?＇＾１??４０－??２５－鉍??３０－??Ｉ??１０－?２５－??图４－２：血小板裂解液屮１ｊ?Ｈｉｓ－?ＱＤＴＴ／ＱＬＳＮ相互作用的蛋白的筛选??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２．?Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ／ＱＬＳＮ?ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｓ?ｆｒｏｍ?ｐｌａｔｃｌｅｌ?ｌｙｓａｔｅｓ．??洗涤血小板（２００ｘｌ０９／Ｌ）裂解液与Ｈｉｓ－ＱＤＴＴ、Ｈｉｓ－ＱＬＳＮ或ＤＭＳＯ溶剂对照于４°Ｃ下孵??育过
本文编号：3099023
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3099023.html
教材专著
