miRNA-200b/AKT2在溃疡性结肠炎相关性结直肠癌的作用机制及复方苦参汤的干预作用研究

发布时间：2021-03-27 03:18

　　第一部分溃疡性结肠炎相关性结直肠癌小鼠模型的构建和mi RNA-200b的表达水平研究目的:构建溃疡性结肠炎相关性结直肠癌（ulcerative colitis related colorectal cancer,UCRCC）小鼠模型,并检测各组小鼠肠道内mi RNA-200b的表达情况,以探讨mi RNA-200b的表达水平是否与UCRCC的发生发展相关。方法:构建过表达mi RNA-200b的慢病毒载体,并设立阴性对照慢病毒（lentiviral vector-negative control,LV-NC）;取体重在18-20克左右的无特定病原体（specific pathogen free,SPF）级野生型C57 BL/6J小鼠,随机分为5组:正常对照组（Normal group）、模型组（Model group）、过表达mi RNA-200b慢病毒组（mi RNA-200b组）、阴性慢病毒对照组（negative control组,NC组）和复方苦参汤组（CSD组）,采用单次注射氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）联合3个循环自由饮用葡聚糖硫酸钠（dextran s... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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上海吉凯基因有限公司提供的慢病毒载体图谱

华中科技大学博士学位论文25图2.实验流程示意图1.2.3.4组织芯片的制备（1）目标组织的收集：根据各组小鼠结肠切片的HE染色病理诊断结果，确定石蜡组织切块上的取样靶点。（2）制备受体蜡块，根据样本数量确定打孔数目及区域，在蜡块中间设计4行×4列点组织阵列，并标记各孔。（3）植入组织蜡芯：待组织样本蜡块受热后，用取样针将各取样靶点中的目标组织芯转移到受体蜡块上已标记的相应孔中。（4）将已植入组织蜡芯的受体蜡块置于60℃烤箱中烘烤约10分钟，随后取出，室温下冷却，以促进受体蜡块和组织蜡芯紧密融合。（5）切片：将已融合完全的蜡块放入4℃冰箱中约30分钟，然后用切片机切成4微米厚度的切片，并用烤箱加热烤片，使组织贴附于载玻片上。1.2.3.5PCR检测

华中科技大学博士学位论文31图3.重组质粒载体阳性克隆测序结果比对结果如下：ACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTT


本文编号：3102777