脱氧胆酸对C57BL/6小鼠回肠类器官生长和屏障功能的影响

发布时间：2021-03-30 04:51

　　目的:·建立小鼠小肠类器官（Enteroids）培养系统,证明脱氧胆酸影响小肠类器官生长和屏障功能,并进一步探讨其机制。方法:取C57BL/6小鼠末段回肠,EDTA法分离,收集隐窝后Matrigel基质胶包埋,于完整培养基中培养。以无水酒精和正常Enteroids为对照,予100μmol/L高浓度DCA短期干预2 d,10 μmol/L DCA长期干预10 d,并去除DCA后再长期培养10 d,光镜下观察Enteroids的生长情况,FD-4实验检测Enteroids通透性变化,透射电镜观察Enteroids上皮细胞和细胞间连接的形态学变化。应用基因芯片技术检测低浓度DCA长期干预Enteroids后其基因表达谱的变化,应用荧光定量PCR和免疫印迹等检测其中紧密连接相关的Occludin和MLCK以及ERK和Tcf4的表达变化。结果:（1）成功建立小鼠回肠类器官体外培养系统,所观察到的Enteroids形态特点与文献一致。（2）高浓度DCA短期干预Enteroids,肠道类器官Enterospheres形成率、Enteroids形成率、类器官演化率和出芽数量均明显减少（P<0.0... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１小鼠肠道类器官光镜下照片，示意图及３Ｄ重建图??注：示意图中绿色细胞表示潘氏细胞，紫色细胞表示肠道干细胞，粉色细胞为其他肠道上??

?南京医科大学博±学位论文??洗涂后再次离屯、，过程同２．３，去除上清液后，Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ沉淀物悬浮于少量ＡＤＦ??培养液中，按２．２过程铺１２孔板进行培养。??３结果??我们在实验中成功建立了?Ｃ５７ＢＬ／６小鼠回肠类器官培养系统［ｉｓ］，并在光镜??下观察整个培养过程中Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ的形态变化。??我们采用整合剂ＥＤＴＡ和物理分离相结合的方法来分离回肠粘膜的隐窝。??小鼠回肠隐窝分离时，从小肠隐窝底部到隐窝中部或者整个隐窝的所有上皮细??胞均被分离下来，而间质细胞如肌成纤维细胞、纤维母细胞或者平滑肌细胞等??则不包含在其中。刚被分离出的小肠隐窝呈现发夹状结构（图１Ａ），其中含有??２０个或者更多来自小肠隐窝底部的细胞。??

Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ形成率（６．３９％±２．９５％）和类器官演化率（１１饼％±５．０７％）与无水酒??精（７７．１６〇／〇±１．３０％和?８２．２３％±１．２６％）和正常?Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ?对照组（８０．６９％±３．７８〇／〇??和８５．２１％±１．９４％）比较明显减少ＣＰ＜０．０５）（图２?Ａ，Ｂ和Ｃ），说明高浓度短??期ＤＣＡ干预Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ明显影响了类器官Ｅｎｔｅｒｏｓｐｈｅｒｅｓ的形成和Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ的形??成。２?ｄ时的Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ出芽数量（０．２０±０．４１）也明显少于无水酒精（３．３化１．３０）??和正常?Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ对照组（３．４０±１．４７，戶＜０．０５）（图?ＩＡ，图?２Ｄ）。??高浓度ＤＣＡ干预Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ?２?ｄ后去除ＤＣＡ，传代后ｉＵ无ＤＣＡ的完全??ＡＤＦ培养液培养Ｅｎｔｅｒｏｉ化，光镜下观察ｌＯｄ时，类器官结构有所恢复，但其周??围仍有较多坏死细胞（图１Ｇ），而无水酒精和正常Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ对照沮生长良好。??去除ＤＣＡ恢复无ＤＣＡ的完全ＡＤＦ培养液培养Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ后１?ｄ时，??Ｅｎｔｅｒｏｓｐｈｅｒｅｓ?形成率（２３．９８％±０．５１％）仍明显低于无水酒精（９０．４２％±４．８５％）??和正常Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ对照组（％．９６％±２刀５％於０．０５）


本文编号：3108895