HCMV编码性smORF的鉴定及EGS抑制HCMV MCP表达与复制的研究

发布时间：2021-04-06 16:48

　　人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）属于β型疱疹病毒,HCMV感染是先天性出生缺陷的主要病毒性病因,也是导致免疫抑制或免疫缺陷的患者产生严重疾病的重要病原。HCMV基因组在人类疱疹病毒中最大,核糖体图谱技术与转录组分析推断其含有515个短的开放阅读框（Small open reading frame,sm ORF）。然而,目前为止尚未完全明确HCMV sm ORF的编码能力及其编码的多肽（sm ORF-encoded polypeptide,SEP）的生物学功能。本研究主要是为了鉴定HCMV中具有编码性的sm ORF,并探究其SEP的功能。在研究中,使用生物信息学分析并筛选出10种具有免疫原性的SEP,并制备其多克隆抗体,验证了其中2种抗体（r ORF73与ORFL297C.i ORF1多肽抗体）的特异性较强。此外,在HCMV感染宿主细胞中检测到病毒能够表达的天然内源性ORFL297C.i ORF1多肽,并通过瞬间转染ORFL297C.i ORF1基因确认其编码能力。我们首次发现ORFL297C.i ORF1多肽具有促进HCMV复制的活性;且ORFL29... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：153 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    一、背景
        1 HCMV的形态与功能及基因组
        2 HCMV感染的预防与治疗
        3 smORF及其编码的多肽
        4 外部引导序列技术
    二、本研究的思路与目的意义
        1 研究思路
        2 研究目的与意义
第一部分 HCMV编码性smORF的鉴定及其功能初探
    一、实验材料
        1 质粒、细菌株、病毒株、细胞与实验动物
        2 主要试剂及溶液配制
        3 实验仪器、耗材
    二、实验方法
        1 HCMV smORF及其SEP生物信息学分析
        2 多肽的合成、溶解、含量测定及稳定性分析
        3 多肽多克隆抗体的制备与纯化
        4 多肽多克隆抗体效价的测定与特异性的检验
        5 目的基因质粒的构建
        6 细胞培养的基础实验
        7 病毒水平的基础实验
        8 HCMV编码天然性多肽及其smORF编码能力的确认
        9 smORF的SEP的生物学功能初探
        10 统计学分析实验数据
    三、实验结果
        1 HCMV smORF的筛选与目标SEP序列的分析与功能预测
        2 合成的多肽具有较好的稳定性
        3 多肽抗体的性能分析
        4 ORFL297C.iORF1 具有编码多肽的能力
        5 ORFL297C.iORF1 多肽促进HCMV的复制
        6 ORFL297C.iORF1 多肽抑制宿主的天然免疫应答
    四、小结与讨论
第二部分 EGS抑制HCMV MCP表达与复制的研究
    一、实验材料
        1 细菌株、病毒株、细胞与质粒载体
        2 主要试剂及溶液配制
    二、实验方法
        1 细胞培养的基础实验
        2 EGS序列的设计
        3 EGS和反应底物的制备
        4 EGS引导RNase P体外剪切活性的检测
        5 稳定表达EGS细胞株的构建及鉴定
        6 EGS调控病毒复制与基因表达的检测
        7 EGS调控病毒基因组DNA复制的检测
        8 统计学分析实验数据
    三、实验结果
        1 EGS引导RNase P对 MCP mRNA序列的体外剪切
        2 细胞中稳定表达EGS及其细胞的低毒性
        3 EGS介导的HCMV MCP表达的抑制作用
        4 EGS靶向于MCP mRNA抑制HCMV的复制
        5 EGS引导RNase P剪切MCP mRNA抑制HCMV衣壳成熟
    四、小结与讨论
全文总结与展望
    一、结论
    二、创新点
    三、展望
参考文献
附录
    主要缩略词中英文对照表
    合成多肽的鉴定与纯度测定
攻读博士学位期间的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用合成多肽制备兔多克隆抗体[J]. 谭凤彪,高家林,陆晓华,章尧.  皖南医学院学报. 2016(05)
[2]中药抗人巨细胞病毒研究进展[J]. 李维薇,杨燕,汪受传.  中医药导报. 2016(05)
[3]釉成熟蛋白多肽多克隆抗体的制备和应用[J]. 张娟娟,冀洪海,柳云霞,孙岩.  细胞与分子免疫学杂志. 2015(09)
[4]中药治疗巨细胞病毒感染研究进展[J]. 廖玲,王红.  北京中医药. 2011(01)
[5]重组SARS-C oV未知功能小蛋白X5表达、纯化及抗体制备[J]. 王丽娜,孔建强,朱平,杜冠华,王伟,程克棣.  药学学报. 2008(11)



本文编号：3121773