EPCs外泌体通过miR-21-5P促进大鼠球囊损伤血管再内皮化
发布时间：2021-04-07 07:40
研究背景与目的:血管介入治疗是广泛使用的治疗脑血管疾病患者的技术,然而面临血管介入术后再狭窄的难题。介入相关的血管内皮细胞损伤是再狭窄的发生和发展的始发因素,因此促进介入后损伤的血管内皮的早期再内皮化非常关键。在我们的前期研究中,人脐血EPCs来源的外泌体能够促进球囊损伤的大鼠颈动脉的早期再内皮化,但是其分子机制仍然不清楚。本研究通过检测EPCs来源的外泌体包含的主要miRNA对内皮靶细胞的影响,探索其促进血管内皮细胞修复的机制。实验方法:采用密度梯度离心法分离、诱导人脐血来源的EPCs,用流式细胞分析技术检测细胞表面标志物表达及内皮细胞功能的检测来鉴定细胞。用超滤法结合超速离心法提取EPCs培养液中的外泌体。纳米颗粒示踪分析仪（Nanoparticle tracking analysis,NTA）、透射电镜、Western Blotting鉴定外泌体。体外实验表明观察其促进HUVECs的增殖、迁移及成管能力;伊文氏蓝染色观察EPCs外泌体对损伤血管第14天再内皮化的作用,HE染色检测外泌体对大鼠颈动脉损伤后内膜增生的影响。二代基因测序检测祖细胞外泌体microRNA表达及内皮细胞差异...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
2颈动脉蹼CTA、DSA表现
46intra-membranethickeningofCTAwasreviewed3monthsaftersurgery(f).3.2EPCs及其分泌的外泌体的鉴定3.2.1EPCs的形态学观察倒置相差显微镜下观察用密度离心法分离诱导培养人脐带血来源的EPCs形态。培养4天后，细胞培养板中可见贴壁细胞，呈圆形或梭形(图3.2.1A)；第7-10天，圆形贴壁细胞，以集落为中心，呈发芽式向外生长的典型的内皮细胞群，即细胞集落(图3.2.1B)；在2-3周左右，细胞形态呈鹅卵石状，集落生长融合(图3.2.1C)。细胞传至第6代，逐渐呈梭形，排列紧密(图3.2.1D)。图3.2.1EPCs细胞形态。(A)：原代培养第4天，细胞呈梭形或圆形贴壁；(B)：7-10天后，出现典型的细胞集落；(C)：2-3周后，细胞形态呈鹅卵石状，集落发生融合；(D)：P6细胞逐渐呈梭形。比例尺：100μm。Figure3.2.1EPCsMorphologyA:Atday4,spindle-likeandroundcellsappearedB:After7-10
47days,typicalcellclusterappearedC:After2and3weeks,cellswithinthecoloniesexhibitedthetypicalcobblestonemorphologyuponconfluence.D:TheP6EPCsshowedfusiformappearanceandcloselyarranged.Scalebarsrepresent100μm.3.2.2EPCs流式细胞仪检测结果流式细胞仪(FACS)分别检测分离培养P3代细胞表面CD31、CD34、VEGF2和CD45的表达，CD31、CD34、VEGF2及CD45在培养细胞中的阳性率分别为99.26%、57.51%、5.14%、98.12%和0.24%，可以认为本实验获得纯度较高的EPCs。见图3.2.2。图3.2.2CD31、CD34和VEGF2表达阳性，CD45表达阴性。Figure3.2.2CD31,CD34andVEGF2werepositiveinculturedEPCs,butthehematopoieticcell-specificmarkerCD45wasnegative
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文编号：3123078
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
2颈动脉蹼CTA、DSA表现
46intra-membranethickeningofCTAwasreviewed3monthsaftersurgery(f).3.2EPCs及其分泌的外泌体的鉴定3.2.1EPCs的形态学观察倒置相差显微镜下观察用密度离心法分离诱导培养人脐带血来源的EPCs形态。培养4天后，细胞培养板中可见贴壁细胞，呈圆形或梭形(图3.2.1A)；第7-10天，圆形贴壁细胞，以集落为中心，呈发芽式向外生长的典型的内皮细胞群，即细胞集落(图3.2.1B)；在2-3周左右，细胞形态呈鹅卵石状，集落生长融合(图3.2.1C)。细胞传至第6代，逐渐呈梭形，排列紧密(图3.2.1D)。图3.2.1EPCs细胞形态。(A)：原代培养第4天，细胞呈梭形或圆形贴壁；(B)：7-10天后，出现典型的细胞集落；(C)：2-3周后，细胞形态呈鹅卵石状，集落发生融合；(D)：P6细胞逐渐呈梭形。比例尺：100μm。Figure3.2.1EPCsMorphologyA:Atday4,spindle-likeandroundcellsappearedB:After7-10
47days,typicalcellclusterappearedC:After2and3weeks,cellswithinthecoloniesexhibitedthetypicalcobblestonemorphologyuponconfluence.D:TheP6EPCsshowedfusiformappearanceandcloselyarranged.Scalebarsrepresent100μm.3.2.2EPCs流式细胞仪检测结果流式细胞仪(FACS)分别检测分离培养P3代细胞表面CD31、CD34、VEGF2和CD45的表达，CD31、CD34、VEGF2及CD45在培养细胞中的阳性率分别为99.26%、57.51%、5.14%、98.12%和0.24%，可以认为本实验获得纯度较高的EPCs。见图3.2.2。图3.2.2CD31、CD34和VEGF2表达阳性，CD45表达阴性。Figure3.2.2CD31,CD34andVEGF2werepositiveinculturedEPCs,butthehematopoieticcell-specificmarkerCD45wasnegative
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文编号：3123078
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