细胞质动力蛋白中间链1（DYNC1I1）促进胃癌细胞增殖迁移及机制研究
发布时间：2021-04-25 07:54
目的:正常细胞的功能维持依赖于细胞内精细的物质运输体系,相较于正常细胞,肿瘤细胞内物质代谢、信号传导更活跃。细胞质动力蛋白是细胞内物质运输的一个重要载体,是由多个亚基组成的分子量较大的复合物,其主要功能为沿着微管向微管负端进行长距离细胞内物质运输,以及有丝分裂过程中核膜破裂、纺锤体组装、染色体运动等。既往研究显示其功能异常可导致肿瘤发生,并且在肿瘤发展过程中,细胞质动力蛋白可以与某些促癌蛋白协同作用促进肿瘤增殖、转移。DYNC1I1是细胞质动力蛋白的重要货物结合亚基,其在肿瘤中的作用存在争议。早期研究发现其在肝细胞癌中表达增加,但最近研究显示在脑胶质瘤中其表达下调,抑制肿瘤进展,高表达DYNC1I1脑胶质瘤患者预后较好。目前对DYNC1I1在肿瘤中的作用研究有限,在胃癌中尚无报道。我们前期在线数据分析表明DYNC1I1是胃癌预后不良因素,但在胃癌中的作用及机制并不明确。在这里,我们主要研究DYNC1I1在胃癌中的作用及其潜在机制。材料与方法:1.利用MTT法测定细胞活性。2.利用ELISA检测细胞上清液中IL-6的浓度。3.利用eBioscienceTMAnnex...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :细胞质动力蛋白中间链1（DYNC1I1）促进胃癌细胞增殖、迁移及机制研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 Western blot检测蛋白水平
2.2.3 脂质体介导siRNA/shRNA转染
2.2.4 实时定量PCR（Real-Time PCR）
2.2.5 网络数据库下载及数据分析
2.2.6 MTT法进行细胞增殖检测
2.2.7 mRNA Array芯片筛查
2.2.8 集落形成测定
2.2.9 细胞迁移能力检测
2.2.10 免疫共沉淀
2.2.11 免疫荧光
2.2.12 酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbentassay,ELISA）
2.2.13动物实验
2.2.14 慢病毒转染
2.2.15 免疫组化
2.2.16 细胞质和细胞核蛋白提取
2.2.17 统计学分析
3 结果
3.1 高DYNC1I1 表达与胃癌患者预后不良相关
3.2 DYNC1I1 促进胃癌细胞的增殖和迁移
3.3 DYNC1I1 促进小鼠体内胃癌的增殖和转移
3.4 DYNC1I1 通过上调IL-6 发挥作用
3.5 DYNC1I1 上调IL-6 促进胃癌细胞的增殖和迁移
3.6 DYNC1I1 通过促进NF-κB核转运上调IL-6 的表达
4 讨论
5 结论一
第二部分 :DYNC1I1 促进入核辅助因子TNPO2表达
6 前言
7 材料与方法
7.1 试剂
7.2 实验方法
7.2.1 细胞培养
7.2.2 脂质体介导siRNA转染
7.2.3 MTT法进行细胞增殖检测
7.2.4 细胞周期检测
7.2.5 实时定量RT-PCR（Real-Time qPCR）
7.2.6 Western blot检测蛋白水平
7.2.7 统计学分析
8 结果
8.1 DYNC1I1 上调胃癌细胞中TNPO2 表达
8.2 高TNPO2 表达的胃癌患者预后不良
8.3 TNPO2 促进胃癌细胞增殖
8.4 DYNC1I1 上调转录因子SP1 上调TNPO2 表达
9 讨论
10 结论二
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：3159021
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :细胞质动力蛋白中间链1（DYNC1I1）促进胃癌细胞增殖、迁移及机制研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 Western blot检测蛋白水平
2.2.3 脂质体介导siRNA/shRNA转染
2.2.4 实时定量PCR（Real-Time PCR）
2.2.5 网络数据库下载及数据分析
2.2.6 MTT法进行细胞增殖检测
2.2.7 mRNA Array芯片筛查
2.2.8 集落形成测定
2.2.9 细胞迁移能力检测
2.2.10 免疫共沉淀
2.2.11 免疫荧光
2.2.12 酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbentassay,ELISA）
2.2.13动物实验
2.2.14 慢病毒转染
2.2.15 免疫组化
2.2.16 细胞质和细胞核蛋白提取
2.2.17 统计学分析
3 结果
3.1 高DYNC1I1 表达与胃癌患者预后不良相关
3.2 DYNC1I1 促进胃癌细胞的增殖和迁移
3.3 DYNC1I1 促进小鼠体内胃癌的增殖和转移
3.4 DYNC1I1 通过上调IL-6 发挥作用
3.5 DYNC1I1 上调IL-6 促进胃癌细胞的增殖和迁移
3.6 DYNC1I1 通过促进NF-κB核转运上调IL-6 的表达
4 讨论
5 结论一
第二部分 :DYNC1I1 促进入核辅助因子TNPO2表达
6 前言
7 材料与方法
7.1 试剂
7.2 实验方法
7.2.1 细胞培养
7.2.2 脂质体介导siRNA转染
7.2.3 MTT法进行细胞增殖检测
7.2.4 细胞周期检测
7.2.5 实时定量RT-PCR（Real-Time qPCR）
7.2.6 Western blot检测蛋白水平
7.2.7 统计学分析
8 结果
8.1 DYNC1I1 上调胃癌细胞中TNPO2 表达
8.2 高TNPO2 表达的胃癌患者预后不良
8.3 TNPO2 促进胃癌细胞增殖
8.4 DYNC1I1 上调转录因子SP1 上调TNPO2 表达
9 讨论
10 结论二
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：3159021
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3159021.html
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