类泛素化Ncddvlatioa E2 UBE2M在肥胖诱导的炎症反应和胰岛素抵抗中的作用及其机制研究

发布时间：2021-04-27 06:20

　　机体代谢和免疫系统是维持生命存活的根本,两者密不可分,任一功能紊乱都会导致机体慢性代谢障碍。越来越多的研究表明慢性炎症与代谢性疾病的关联密切,尤其在肥胖和胰岛素抵抗的发生发展中至关重要,而巨噬细胞对于慢性炎症的调节及其可塑性被认为在这复杂的病理生理环境中起了决定性的作用。类泛素化Neddylation作为一种崭新的蛋白质翻译后修饰途径已经逐渐成为细胞分子生物学的研究热点,UBE2M是类泛素化修饰过程中关键的E2结合酶,从类泛素化角度探索巨噬细胞在慢性炎症反应和相关代谢性疾病中的新功能,寻找其内源性调控分子成为治疗相关代谢性疾病的关键。本课题的研究发现,UBE2M在调控巨噬细胞慢性炎症反应,影响机体肥胖和胰岛素抵抗等病理过程中发挥重要作用。在高脂饮食诱导的肥胖疾病模型中,UBE2M巨噬细胞特异性敲除的小鼠肥胖程度较轻,胰岛素抵抗减弱,机体对胰岛素敏感性更强。与此同时,UBE2M的敲除减轻了脂肪组织和肝脏中炎症反应强度,并减少了肝脏中脂滴的沉积缓解了肝脏脂肪变性和肝损伤。体内体外机制研究表明,UBE2M敲除对慢性炎症的减轻以及相关代谢性疾病的缓解与IL-1β的转录调控有关。进一步研究发现,... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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第一部分 类泛素化Neddylation E2 UBE2M在肥胖诱导的炎症反应和胰岛素抵抗中的作用及其机制研究
    1. 引言
    2. 实验材料及方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 细胞系
            2.1.3 载体和菌株
            2.1.4 常规试剂
            2.1.5 实验抗体
            2.1.6 主要溶液及其配制
            2.1.7 实验耗材
            2.1.8 主要设备和软件
        2.2 实验方法
            2.2.1 小鼠基因组提取和基因型鉴定
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 腹腔巨噬细胞诱导
            2.2.4 骨髓来源巨噬细胞培养
            2.2.5 分子克隆
            2.2.6 去内毒素质粒提取
            2.2.7 细胞转染
            2.2.8 组织细胞RNA提取和荧光定量PCR检测
            2.2.9 组织细胞总蛋白提取
            2.2.10 蛋白质印迹
            2.2.11 免疫共沉淀
            2.2.12 流式细胞术分析
            2.2.13 酶联免疫吸附实验（ELISA）
            2.2.14 葡萄糖耐受实验（GTT）
            2.2.15 胰岛素耐受实验（ITT）
            2.2.16 石蜡切片
    3. 实验结果
        3.1 UBE2M巨噬细胞特异性敲除小鼠基因型和细胞表型的鉴定
        3.2 UBE2M缺陷缓解高脂饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗
        3.3 UBE2M缺陷减轻高脂饮食诱导的炎症性反应
        3.4 UBE2M缺陷减轻高脂饮食诱导的非酒精性肝脏脂肪变性
        3.5 UBE2M通过转录水平调控pro-IL-1β前体的表达
        3.6 UBE2M通过调控VHL E3泛素连接酶复合物影响HIF-Iα的蛋白稳定性以及pro-IL-1β的表达
        3.7 UBE2M对VHL E3泛素连接酶的调控作用依赖于BRCC3
    4. 讨论
    5. 小结
第二部分 Fas信号介导的TH9细胞分化促进肠道炎症和抗肿瘤作用
    1. 引言
    2. 实验材料及方法
    3. 实验结果
    4. 讨论
    5. 小结
参考文献
综述
    参考文献
作者简历



本文编号：3162943