脊髓神经元上行特异激活延髓ON细胞易化慢性疼痛发生的新神经环路研究

发布时间：2021-04-27 05:56

　　背景:延髓头端腹内侧区（Rostral Ventromedial Medulla,RVM）是中枢痛觉下行调节系统的最后一个核团,被认为是疼痛调控的“闸门”。当外周出现疼痛刺激时,RVM这一“闸门”中存在放电活动立刻显著增加的“开”神经元（ON细胞）和放电活动立刻显著减少的“关”神经元（OFF细胞）。但这些能对疼痛刺激产生特异性放电变化,与疼痛关系如此密切的ON和OFF细胞,究竟对疼痛发挥怎样的作用仍是未解之谜。解开这一谜团有助于探索疼痛机制,寻找疼痛治疗的可能靶点。目的:探究特异性调控ON细胞对急慢性疼痛的影响并初步探索其所接受上行投射的神经环路。方法:本研究分为三个部分:1)使用CPRSPR-Cas9技术构建Gper1-Cre小鼠并通过短片段PCR联合琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型;采用含白喉毒素片段A（Diphtheria Toxin A-chain,DTA）病毒或光遗传激活病毒分别特异性毁损或激活ON细胞,通过热板、福尔马林实验和结直肠充胀（Colorectal Distention,CRD）等行为学实验探讨对生理痛阈和完全弗式佐剂（Complete Freund’s Adjuvant... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
中文部分
    1.绪论
        1.1 中枢下行易化与抑制系统参与疼痛调节
        1.2 RVM区 ON细胞参与疼痛调节
        1.3 脊髓与脊髓上中枢神经系统的投射联系
        1.4 脊髓水平存在躯体感觉特异性相关的神经元
    2.材料与方法
        2.1 实验动物
        2.2 实验材料
            2.2.1 主要实验试剂
            2.2.2 主要实验仪器及耗材
        2.3 主要实验方法
            2.3.1 Gper1-Cre小鼠构建
            2.3.2 Gper1-Cre小鼠基因型鉴定
            2.3.3 脑区和脊髓立体定位注射
            2.3.4 脑组织和脊髓组织制片
            2.3.5 免疫荧光染色
            2.3.6 慢性足底炎性疼痛模型的制备
            2.3.7 炎症性肠病慢性内脏疼痛模型的制备
            2.3.8 机械性痛阈值的检测
            2.3.9 热痛阈值的检测
            2.3.10 炎性痛阈值的检测
            2.3.11 内脏痛阈值的检测
            2.3.12 光遗传和化学遗传调控方法
        2.4 统计学处理
    3.实验结果
        3.1 特异性调控RVM区 ON细胞影响慢性疼痛
            3.1.1 Gper1-Cre小鼠的构建与验证
            3.1.2 含白喉毒素元件的病毒毁损RVM区 ON细胞可抑制慢性疼痛
            3.1.3 光遗传激活RVM区 ON细胞易化慢性疼痛
        3.2 脊髓存在一类兴奋性神经元可上行激活下行易化系统
            3.2.1 脊髓神经元可直接投射至RVM区
            3.2.2 SNAPR神经元为一类兴奋性神经元
            3.2.3 调控SNAPR神经元可影响机械疼痛阈值
        3.3 光遗传直接刺激脊髓SNAPR神经元可激活RVM区 ON细胞
            3.3.1 脊髓神经元直接投射至RVM区 ON细胞
            3.3.2 伤害性刺激可直接导致RVM区 ON细胞放电活动增加
            3.3.3 光遗传调控SNAPR神经元可激活RVM区 ON细胞
    4.讨论
        4.1 RVM区 ON细胞在疼痛调节中的作用
        4.2 脊髓存在一类兴奋性神经元可易化慢性疼痛
        4.3 脊髓神经元可上行激活RVM区 ON细胞
    5.结论
英文部分
    1. Introduction
    2. Materials and Methods
    3. Results
    4. Discussion
    5. Conclusion
参考文献
致谢
攻读博士学位期间的学术成果
八年制学位论文要求



本文编号：3162904