PAK5通过影响DNPEP的泛素化降解调节乳腺癌细胞的增殖和转移

发布时间：2021-05-06 10:16

　　目的:乳腺癌是发病率最高的女性常见恶性肿瘤。近年来全世界范围内,乳腺癌的发病率都在逐年递增,严重威胁妇女的生命健康。尽管目前针对乳腺癌的诊疗措施有了实质性的进展,但乳腺癌的死亡率仍位于女性恶性肿瘤之首,乳腺癌转移已成为乳腺癌患者死亡的主要原因,超过90%的乳腺癌患者死于乳腺癌的转移。乳腺癌远隔转移造成了患者严重的不良预后,乳腺癌患者的5年生存率经统计,未发生转移的高达98%,而发生转移的患者急剧下降低至23%。目前乳腺癌转移的分子机制仍然是科研人员研究的重要课题,因此对其进行更深入的探索将为乳腺癌的诊疗提供一定的理论依据。P21蛋白活化激酶（P21-activated kinase,PAK）是一类丝/苏氨酸蛋白激酶,它在进化中保守,作为Cdc42/Rac1、生长因子信号下游的主要靶蛋白,它的活化依赖于生长因子和其他细胞外信号。PAK通过结合下游靶蛋白或生理性底物,参与到众多生物学功能,例如细胞极性、细胞运动、细胞骨架重组、细胞周期演进、基因转录调控等,尤其是在细胞转化和肿瘤进程中具有重要作用。目前,PAK家族一共发现并证实有6个成员,根据结构可分为两类,Ⅰ类成员有PAK1-3,Ⅱ类成员... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :PAK5-DNPEP-USP4 通路调控乳腺癌细胞的增殖与转移
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 细胞
            2.1.3 实验仪器
        2.2 方法
            2.2.1 克隆DNPEP基因的全长及突变体,构建到不同的质粒载体中
            2.2.2 体外GST-pull down
            2.2.3 脂质体转染法转染
            2.2.4 蛋白提取
            2.2.5 Western Blot
            2.2.6 免疫共沉淀
            2.2.7 银染
            2.2.8 体外激酶实验
    3 实验结果
        3.1 DNPEP是 PAK5 的相互作用蛋白
        3.2 PAK5 可磷酸化DNPEP的 S119 位点
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :PAK5介导DNPEP的磷酸化调节乳腺癌细胞的增殖和转移及其作用机制的研究
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 主要试剂
            7.1.2 细胞
            7.1.3 实验仪器
        7.2 方法
            7.2.1 脂质体转染法转染
            7.2.2 蛋白提取
            7.2.3 Western Blot
            7.2.4 免疫共沉淀
            7.2.5 免疫组化
            7.2.6 克隆形成实验
            7.2.7 划痕实验
            7.2.8 Transwell实验
            7.2.9 裸鼠皮下成瘤实验
            7.2.10 裸鼠乳腺癌转移模型的建立
    8 实验结果
        8.1 磷酸化的DNPEP可抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭
        8.2 USP4为PAK5-DNPEP通路的下游底物
        8.3 PAK5 促进DNPEP降解
        8.4 PAK5与USP4 的高表达可以促进乳腺癌的转移
    9 讨论
    10 结论
第三部分 :DNPEP通过水解CD44 抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和干性
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 主要试剂
            12.1.2 细胞
            12.1.3 实验仪器
        12.2 方法
            12.2.1 脂质体转染法转染
            12.2.2 蛋白提取
            12.2.3 Western Blot
            12.2.4 免疫共沉淀
            12.2.5 免疫组化
            12.2.6 克隆形成实验
            12.2.7 划痕实验
            12.2.8 Transwell实验
            12.2.9 免疫荧光及共聚焦激光扫描显微镜检测
    13 实验结果
        13.1 乳腺癌组织DNPEP呈低表达
        13.2 DNPEP可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭
        13.3 DNPEP与 CD44 相互作用并调节CD44 的表达
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3171745