miR-520b靶向IGF-1R介导乳腺癌多柔比星耐药的研究

发布时间：2021-05-08 11:21

　　研究目的:1、多柔比星作为蒽环类化疗药物是目前治疗乳腺癌应用最广泛且疗效比较好的药物之一。而乳腺癌对化疗药物的耐药性是限制多柔比星取得理想治疗效果的主要因素,逆转乳腺癌对多柔比星的耐药性可能有助于提高乳腺癌治疗疗效。多柔比星的耐药机制尚不十分清楚,近年的研究表明,异常表达的mi RNAs参与了多种肿瘤耐药的形成。2、micro RNAs（mi RNAs）是一类高度保守的内源性、非编码、单链RNA分子,研究表明,其参与了多种肿瘤的发生发展。我们通过检索并下载了公共生物医学数据库中乳腺癌新辅助化疗（含蒽环类药物化疗方案）病例的基因表达谱数据及micro RNA数据,通过生物信息学分析构建了乳腺癌蒽环类药物化疗敏感性相关的mi RNA-m RNA调控网络。并通过文献复习,确定mi R-520b及IGF-1R作为进一步的研究目标。mi R-520b的异常表达与胃癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌等多种肿瘤相关。在乳腺癌,mi R-520b在耐药乳腺癌细胞中表达下调,并且在用多柔比星治疗乳腺癌的敏感性上mi R-520b与胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor-1re... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：163 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
个人简历
英文缩略词
摘要
ABSTRACT
前言
    文献回顾
    参考文献
第一部分 乳腺癌化疗敏感性相关micro RNA-m RNA调控网络的建立
    引言
    1.研究内容
    2.方法
        2.1 数据的检索及下载
        2.2 数据的预处理
        2.3 基因表达谱芯片的分析
        2.4 micro RNA表达谱芯片的分析
        2.5 mi RNA-Hub gene调控网络
        2.6 统计分析
    3.结果
        3.1 基因表达谱数据集的基本信息
        3.2 DEGs的分析结果
        3.3 DEGs的功能富集分析及Pathway分析
        3.4 DEGs的PPI分析
        3.5 micro RNA数据集的基本信息
        3.6 差异micro RNA的分析
        3.7 耐药相关mi RNA-m RNA网络构建
    4.讨论
    参考文献
第二部分 mi RNA-520b的表达水平与乳腺癌细胞对多柔比星敏感性的关系
    引言
    1.主要材料与试剂
        1.1 乳腺癌组织
        1.2 细胞株
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
    2.实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 q PCR检测新辅助化疗前肿瘤组织标本中mi R-520 的表达水平
        2.3 RT-PCR法检测乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231，及其相应的阿霉素耐药株MCF-7/ADR、MDA-MB-231/ADR中mi R-520b的表达
        2.4 细胞转染
        2.5 MTT法 检测MCF-7/ADR-NC、MDA-MB-231/ADR-NC、        MCF-7/ADR-mi R-520b mimics和MDA-MB-231/ADR-mi R-520bmimics细胞对多柔比星的敏感性的变化
        2.6 过表达mi R-520b对多柔比星处理后乳腺癌细胞增殖的影响..67
        2.7 过表达mi R-520b对多柔比星诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响..67
        2.8 western blot检 测MCF-7/ADR-NC、MDA-MB-231/ADR-NC、        MCF-7/ADR-mi R-520b和MDA-MB-231/ADR-mi R-520b细胞中凋亡相关蛋白caspase-3
        2.9 RT-PCR检测凋亡相关caspase-3/7 活性及caspase-9 活性
        2.10 western blot检测MCF-7/ADR-NC、MDA-MB-231/ADR-NC、        MCF-7/ ADR-mi R-520b和MDA-MB-231/ADR-mi R-520b细 胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白
        2.11 统计学方法
    3.结果
        3.1 mi R-520b在新辅助化疗前乳腺癌患者组织标本中的表达 ..71
        3.2 mi R-520b在阿霉素耐药株MCF-7/ADR、MDA-MB-231/ADR中的表达
        3.3 mi R-520b在 转染mi R-520b mimics耐 药株MCF-7/ADR、MDA-MB-231/ADR中的表达
        3.4 过表达mi R-520b后乳腺癌耐药株对多柔比星的敏感性
        3.5 过表达mi R-520b对化疗药物多柔比星处理后乳腺癌细胞增殖的影响
        3.6 过表达mi R-520b对多柔比星诱导的乳腺癌细胞株凋亡的影响77
        3.7 过表达mi R-520b对 乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR、MDA-MB-231/ADR凋亡相关基因的影响
        3.8 过表达mi R-520b对PI3K/AKT信号通路中相关蛋白表达的影响
    4.小结
第三部分 mi R-520b靶向调控IGF-1R增强对乳腺癌耐药细胞株敏感性机制研究
    引言
    1.主要材料与试剂
        1.1 细胞株
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2.方法
        2.1 细胞培养
        2.2 IGF-1R在乳腺癌细胞系中的表达
        2.3 组织中表达相关性检测
        2.4 IGF-1R对乳腺癌细胞耐药性的影响
        2.5 rescue实验：IGF-1R作为mi R-520b下游靶基因直接参与对乳腺癌耐药性的影响
        2.6 靶基因预测
        2.7 双荧光素酶报告基因实验
        2.8 统计学分析
    3.结果
        3.1 IGF-1R在乳腺癌细胞系中的表达
        3.2 组织中表达相关性检测
        3.3 IGF-1R对乳腺癌细胞耐药性的影响
        3.4 IGF-1R作为mi R-520b下游靶基因直接参与对乳腺癌耐药性的影响
        3.5 靶基因预测结果
        3.6 IGF-1R是mi R-520b的直接靶基因
    4.小结
全文小结
参考文献
综述
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA-21对人乳腺癌细胞株紫杉醇耐药性的影响及其机制[J]. 赵遵兰,蔡颖,王洋洋,夏春磊,李从新,陈素莲,杨清玲,陈昌杰.  浙江大学学报(医学版). 2015 (04)
[2]胰岛素样生长因子-1在乳腺癌发生发展中的作用[J]. 阎晓路,高哲,孙云.  河北医药. 2014(20)
[3]人工流产与中国女性乳腺癌关联性的荟萃分析[J]. 郭雪君,张寅静,梅勇.  医学研究杂志. 2014(02)
[4]miRNA与乳腺癌发生发展和多药耐药的研究现状[J]. 周明祎,白雪峰,魏敏杰.  中华肿瘤防治杂志. 2011(21)
[5]小分子IGF-1R抑制剂的研究进展[J]. 徐岩,王广树,孙薇,杨晓虹,徐利保.  药学学报. 2008(10)
[6]凋亡相关基因bcl-2、bax、bad与乳腺癌[J]. 于冰,孙治君.  中国普外基础与临床杂志. 2007(06)
[7]武汉地区女性乳腺癌危险因素的病例对照研究[J]. 韩定芬,马骏,周新,邱晖,方黎,黄姝.  中华流行病学杂志. 2004(03)
[8]乳腺癌危险因素综合评价及其趋势预测[J]. 方亚,施侣元.  中华流行病学杂志. 2003(07)

博士论文
[1]全球女性乳腺癌疾病负担分析及其与社会经济水平和医疗质量关系的初步探讨[D]. 胡凯敏.浙江大学 2016
[2]MicroRNA-195调控RAF1蛋白的表达增强乳腺癌细胞对阿霉素药物的敏感性的机制研究[D]. 杨舸.重庆医科大学 2013



本文编号：3175251