CRT对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制研究

发布时间：2021-05-16 20:30

　　目的:乳腺癌是严重威胁全球女性健康的常见恶性肿瘤之一,世界范围内每年大约有167万新发乳腺癌患者,预计到2030年,全球大约有2200万乳腺癌患者。随着治疗手段不断发展进步,乳腺癌患者的预后已有了显著的改善,但仍有30%-40%的患者最终复发转移直至死亡。三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）因其恶性程度高、侵袭性强、且无法从内分泌治疗及抗HER-2靶向治疗中获益,治疗手段有限,预后差,已成为乳腺癌治疗领域的一个难题。因此,当务之急是发现新的有效的治疗三阴性乳腺癌的靶点来改善三阴性乳腺癌患者的预后。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）是肿瘤组织中存在的一部分特殊的肿瘤细胞,这些细胞通过某些机制不断自我更新,分裂增殖,促进肿瘤的复发和转移。2003年,Al-Hajj等首次在乳腺癌中分离鉴定出乳腺癌干细胞。相较于其他类型的乳腺癌,三阴性乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞的占比更高。因此,针对肿瘤干细胞进行靶向治疗可能是未来乳腺肿瘤特别是三阴性乳腺癌治疗最有效的方法之一。微小RNA（microRNA,miRNA）是一类小分子非编码RN... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:miR-1对乳腺癌干细胞自我更新,增殖和凋亡能力的影响及其调控机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究方法
            2.2.1 临床病例筛选
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 流式细胞术分选乳腺癌干细胞
            2.2.4 脂质体介导miR-1 agomir和antagomir转染
            2.2.5 双荧光素酶报告系统
            2.2.6 微球体形成实验
            2.2.7 CCK-8实验
            2.2.8 实时定量PCR
            2.2.9 Western blotting实验
            2.2.10 裸鼠移植瘤模型的建立
            2.2.11 免疫组织化学染色
            2.2.12 免疫组织化学染色结果判定
            2.2.13 统计分析
    3 结果
        3.1 miR-1在三阴性乳腺癌和其配对的癌旁组织中表达情况
        3.2 流式细胞术分选乳腺癌干细胞
        3.3 过表达miR-1下调CRT表达,沉默miR-1上调CRT表达
        3.4 生物信息学方法预测miR-1的候选靶基因
        3.5 双荧光素酶实验验证miR-1与EVI-1 mRNA3’UTR区靶向结合
        3.6 过表达miR-1下调EVI-1表达,沉默miR-1上调EVI-1表达
        3.7 miR-1对乳腺癌干细胞微球体形成能力的影响
        3.8 miR-1对乳腺癌干细胞增殖能力的影响
        3.9 miR-1对乳腺癌干细胞凋亡通路相关因子的影响
        3.10 miR-1对乳腺癌干细胞EMT通路相关因子的影响
        3.11 生物信息学方法预测CRT是EVI-1的靶基因
        3.12 EVI-1正性调控CRT表达
        3.13 过表达的miR-1抑制裸鼠乳腺癌干细胞移植瘤的生长
        3.14 裸鼠移植瘤内miR-1、EVI-1和CRT的表达情况
    4 讨论
    5 结论
第二部分:钙网蛋白不同结构域对乳腺癌干细胞生物学行为的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 钙网蛋白各结构域表达载体的构建
            2.2.3 质粒转染
            2.2.4 微球体形成实验
            2.2.5 流式细胞凋亡实验
            2.2.6 Western blotting实验
            2.2.7 统计分析
    3 结果
        3.1 钙网蛋白各结构域重组质粒的测序及转染结果
        3.2 钙网蛋白各个结构域对乳腺癌干细胞微球体形成的影响
        3.3 钙网蛋白各个结构域对乳腺癌干细胞凋亡能力的影响
        3.4 钙网蛋白各个结构域对乳腺癌干细胞EMT过程相关蛋白表达水平的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]下调钙网蛋白表达对乳腺癌干细胞增殖、侵袭和凋亡的影响[J]. 李晓曦,孟琳,王天一,孙大鹏,仇凤启,马萍.  解剖科学进展. 2013(04)
[2]Significance and relationship between Cripto-1 and p-STAT3 expression in gastric cancer and precancerous lesions[J]. Jian-Guo Zhang, Jing Zhao, Yan Xin, The Fourth Laboratory of Cancer Institute, Department of Tumor Pathology of General Surgery Institute, the First Affi liated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(05)



本文编号：3190351