肠道共生菌促进HBV清除的免疫学机制探索

发布时间：2021-05-17 05:37

　　乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染可导致肝炎,肝硬化,最终发展成为肝癌。据估计全球大约有2.4亿人为慢性HBV感染。世界卫生组织（WHO）下属的国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer）已将HBV列为“一类致癌物”。HBV慢性感染与HBV暴露发生的年龄是有关的。母婴传播HBV以及幼儿时期感染HBV均可导致HBV慢性感染。超过90%的接触HBV的新生儿以及大约30%的儿童在1岁至5岁之间感染HBV,均无法有效清除HBV。然而,大约95%的成人感染HBV则可以自发地清除病毒。这种差异一直被认为是由于婴幼儿和成年人之间的免疫力差异导致的。因为与婴幼儿相比,成年人免疫系统发育完全,有能力清除HBV感染。人类的肠道聚集着数以万亿计的共生菌。这些肠道共生菌在人类健康中发挥着重要作用。肠道共生菌不仅调节代谢、上皮细胞的发育,粘膜免疫系统的发育而且也参与调控粘膜免疫系统例如肠道、肺脏和非粘膜免疫系统例如肝脏免疫应答。肝脏位于一个独特的全身循环系统中,接受来自肝动脉和门静脉的血液,使其成为代谢解毒和免疫细胞发挥功... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第1章 绪论
    1.1 乙肝研究进展
        1.1.1 乙肝的现状
        1.1.2 乙肝所参与的细胞及细胞免疫应答的研究
        1.1.3 乙肝中体液免疫应答的研究
    1.2 肠道共生菌与免疫系统相互作用
        1.2.1 肠道共生菌的概述
        1.2.2 肠道共生菌与免疫系统发育的关系
        1.2.3 肠道共生菌对免疫应答的调控
    1.3 肠道共生菌与肝脏免疫的关系
        1.3.1 肠道共生菌维持肝脏免疫耐受
        1.3.2 肠道共生菌与肝脏疾病
    1.4 结语
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验小鼠
        2.1.2 小鼠单个核细胞分离、纯化相关试剂
        2.1.3 流式细胞术检测的相关试剂
        2.1.4 细胞培养及刺激的相关试剂
        2.1.5 生化试剂
        2.1.6 质粒抽提及分子生物学相关试剂
        2.1.7 免疫组化和组织病理染色相关试剂
        2.1.8 放射性免疫检测相关试剂
        2.1.9 乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)检测试剂盒
    2.2 实验设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 口服抗生素水清除小鼠肠道共生菌
        2.3.2 中抽质粒
        2.3.3 高压注射pAAV-HBV1.2质粒构建小鼠HBV转染模型
        2.3.4 组织HE染色
        2.3.5 组织免疫化学染色检测HBV核心抗原
        2.3.6 放射免疫法检测HBV表面抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg),表面抗体(anti-HBs)
        2.3.7 小鼠肝脏、脾脏单个核细胞的分离
        2.3.8 流式细胞术
        2.3.9 MACS纯化细胞
        2.3.10 定量PCR法检测HBV DNA水平
        2.3.11 检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平(连续监测法)
        2.3.12 RNA抽提与逆转录PCR
        2.3.13 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 清除小鼠肠道共生菌的模型建立
    3.2 小鼠HBV转染模型的建立
    3.3 共生菌维持的抗HBV小鼠模型建立
        3.3.1 清除肠道共生菌的HBV转染模型构建
        3.3.2 清除肠道共生菌的高剂量HBV转染模型中,HBV清除能力无显著变化
        3.3.3 清除肠道共生菌的低剂量HBV转染模型中,HBV清除能力显著减弱
    3.4 CD4~+T细胞在共生菌维持的抗HBV免疫中发挥关键作用
        3.4.1 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,肝脏、脾脏单个核细胞的数量,淋巴细胞亚群的比例无显著差异
        3.4.2 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,肝脏、脾脏Treg细胞的比例和数量无显著差异
        3.4.3 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,效应性的CD4~+T细胞比例和数量显著减少
        3.4.4 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,HBV特异性的CD4~+T细胞比例显著减少
        3.4.5 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,CD4~+T细胞功能减弱
        3.4.6 共生菌促进HBV清除依赖适应性免疫系统
        3.4.7 共生菌促进HBV清除依赖CD4~+T细胞
    3.5 清除肠道共生菌的HBV转染模型中体液免疫应答减弱
        3.5.1 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,产生anti-HBs能力减弱
        3.5.2 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,HBsAg阳性小鼠比例显著增多
        3.5.3 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,生发中心B细胞比例减少
        3.5.4 清除肠道共生菌的HBV转染模型中,Tfh细胞比例减少,应答减弱
    3.6 共生菌载量在CD4~+T细胞依赖的HBV的清除中发挥重要作用
        3.6.1 单一抗菌素处理不足以延缓成年小鼠清除HBV
        3.6.2 TLR2,TLR4,TLR9信号的补充不能促进菌群缺失成年小鼠清除HBV
        3.6.3 TLR2/TLR4/TLR9的单一缺陷对共生菌介导的成年小鼠清除HBV无影响
第4章 讨论与总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间的主要研究成果
    学术论文发表情况
    参加的学术会议
    获得奖励


【参考文献】：
期刊论文
[1]Activation of TLR-4 and liver injury via NF-kappa B in rat with acute cholangitis[J]. Hong Yu and Shuo-Dong Wu Department of the First Biliary and Minimal Invasive Surgery, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(02)



本文编号：3191187