细胞类型特异性p38α信号通路在类风湿性关节炎发病中的作用

发布时间：2021-05-18 14:30

　　类风湿性关节炎是关节病变为主的自身免疫性疾病,临床表现为滑膜炎,继发软骨破坏、关节间隙变窄,晚期因骨质破坏而致残。研究表明:Th17细胞在关节炎发病中发挥重要作用,抑制其分化和功能会是一种有效的治疗方法。人们对T细胞内在因素如何调控Th17细胞的分化和功能研究得较为清楚,但对T细胞外在因素如何调控Th17细胞的分化及Th17细胞介导的类风湿性关节炎还知之甚少。Th17细胞的分化需要抗原递呈细胞提供固有免疫信号。树突状细胞（Dendritic Cells,DCs）是抗原递呈能力最强的固有免疫细胞,但DCs在外界刺激后如何通过其胞内的信号通路来调控Th17细胞的分化还不是十分清楚。有丝分裂原激活的蛋白激酶信号通路是DCs感知外界刺激并作出免疫应答的重要信号通路之一,主要包括p38、JNK和ERK,其中p38是最主要的调节免疫炎症反应的蛋白激酶,但是DCs中p38α如何调控关节炎的发病是不清楚的。本文研究了在DCs中特异性地敲除p38α(p38α^△DC)对于关节炎的影响。我们发现敲除DCs中p38α可以降低CFA/CII诱导的关节炎的发病率和严重程度,伴随p38α

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 类风湿性关节炎
        1.1.1 类风湿性关节炎概述
        1.1.2 类风湿性关节炎的病理变化
        1.1.3 类风湿性关节炎的发病原因
    1.2 树突状细胞与类风湿性关节炎
        1.2.1 树突状细胞的发现起源
        1.2.2 树突状细胞的功能概述
        1.2.3 树突状细胞的分类以及亚群功能
        1.2.4 树突状细胞在T细胞分化中的作用
        1.2.5 树突状细胞与RA的发生与发展
    1.3 p38α信号通路与类风湿性关节炎
        1.3.1 MAPK家族
        1.3.2 p38 MAPK家族
        1.3.3 p38 MAPKs的上游信号
        1.3.4 p38 MAPKs的下游靶点
        1.3.5 p38 MAPKs在类风湿性关节炎中的作用
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 小鼠基因型鉴定引物
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 主要液体试剂的配制
        2.1.4 主要的仪器设备
        2.1.5 其他实验用材料及器具
    2.2 实验动物
        2.2.1 条件性敲除小鼠p38α~(△DC)构建
        2.2.2 K/BxN小鼠
    2.3 实验方法
        2.3.1 小鼠组织DNA样本的制备
        2.3.2 PCR法鉴定小鼠基因型
        2.3.3 小鼠关节炎疾病模型的制备
        2.3.4 小鼠脾脏单细胞悬液制备
        2.3.5 小鼠脾脏单细胞悬液制备(检测脾脏中的DC)
        2.3.6 小鼠淋巴结单细胞悬液制备
        2.3.7 小鼠淋巴结单细胞悬液制备(检测淋巴结中的DC)
        2.3.8 小鼠关节浸润细胞单细胞悬液的制备
        2.3.9 小鼠外周血血清制备
        2.3.10 流式细胞术检测细胞表面分子的表达
        2.3.11 流式细胞术检测细胞胞内蛋白的表达
        2.3.12 流式细胞术检测细胞核内蛋白的表达
        2.3.13 小鼠初始T淋巴细胞的分选
        2.3.14 小鼠树突状细胞DC的分选
        2.3.15 ELISA法检测自身抗体
        2.3.16 ELISA法检测细胞因子
        2.3.17 RNA提取(Trizol法)
        2.3.18 RNA提取(试剂盒法)
        2.3.19 逆转录
        2.3.20 实时荧光定量PCR
        2.3.21 Westernblot检测蛋白样本的制备
        2.3.22 BCA法检测蛋白浓度
        2.3.23 Westernblot检测蛋白
        2.3.24 关节组织石蜡切片制备
        2.3.25 关节组织苏木素-伊红染色
        2.3.26 关节组织番红固绿染色
        2.3.27 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 实验小鼠的建立及鉴定
        3.1.1 树突状细胞条件性敲除p38α小鼠的建立
        3.1.2 树突状细胞条件性敲除p38α小鼠的鉴定
        3.1.3 KRN小鼠基因型的鉴定
        3.1.4 K/BxN小鼠模型的建立
    3.2 DCs p38α介导CIA诱导的关节炎的发生
        3.2.1 p38α参与CIA的发病过程
        3.2.2 DCs中 p38α参与关节炎的进展
    3.3 DCs中 p38α促进胶原诱导的小鼠关节炎进展
        3.3.1 DC中 p38α促进关节炎的进展以及炎性细胞浸润
        3.3.2 p38α~(△DC)小鼠中Th17 细胞减少
        3.3.3 DCs中 p38α不影响CD4+T 淋巴细胞的比例、凋亡和增殖
        3.3.4 DCs中 p38α不影响CD4+T 淋巴细胞的活化
        3.3.5 p38α~(△DC)小鼠中初始T淋巴细胞启动缺陷
    3.4 DCs中 p38α如何促进Th17 细胞的产生
        3.4.1 p38α的缺失并不影响DCs自身的凋亡与增殖
        3.4.2 p38α缺失的DCs诱导T淋巴细胞分化的第一信号减弱
        3.4.3 p38α缺失的DCs并不影响诱导T淋巴细胞分化的第二信号
        3.4.4 p38α缺失的DCs中细胞因子的变化情况
        3.4.5 p38α缺失的DCs迁移至引流淋巴结功能缺陷
        3.4.6 FITC诱导的皮肤中p38α缺失的DCs迁移缺陷
        3.4.7 p38α缺失的DCs通过JNK-c-Jun上调IL-27的表达
    3.5 DCs中 p38α促进抗体的产生以及抗体介导的关节炎的发病
        3.5.1 p38α~(△DC)小鼠血清中自身抗体浓度下降
        3.5.2 DCs中 p38α促进Tfh和 GC B的生成
        3.5.3 DCs中 p38α促进抗体诱导的关节炎发病
        3.5.4 DCs中 p38α促进血清诱导的关节炎并不依赖Th17 细胞
        3.5.5 DCs中 p38α促进抗体介导的Tfh和 GC B细胞的生成
    3.6 p38α在成纤维样滑膜细胞中的作用
        3.6.1 成纤维样滑膜细胞中p38α可以被多种刺激活化
        3.6.2 p38α促进成纤维样滑膜细胞的增殖和迁移,抑制其凋亡
        3.6.3 p38α-MK2介导IL-17 诱导的细胞因子的分泌
    3.7 p38α在 CFA/CII诱导的关节炎中的治疗效果
第四章 全文总结与讨论
    4.1 全文总结
    4.2 讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文编号：3193956