NUSAP1通过稳定ATR蛋白调控胶质母细胞瘤生长与增殖的机制研究

发布时间：2021-05-21 09:50

　　胶质母细胞瘤（多形性成胶质细胞瘤）,又称为四级星形细胞瘤,与其他的胶质瘤一起构成了绝大多数的恶性脑瘤。胶质母细胞瘤是恶性程度最高的脑肿瘤,具有高死亡率,预后差以及生存期短等特性。目前亟需探索更多胶质母细胞瘤的诊断和治疗方案来进一步延长胶质母细胞瘤病人的生存期。核仁纺锤体相关蛋白1（NUSAP1）最初是作为一个有丝分裂调控因子被发现,同时NUSAP1也是一个微管结合蛋白。NUSAP1不仅参与到有丝分裂过程中,在多种生物学进程尤其是肿瘤生物学中也发挥着必不可少的作用。研究表明,NUSAP1在多种人类肿瘤中高表达,因此NUSAP1是肿瘤治疗中的一个潜在靶标。然而,NUSAP1在胶质母细胞瘤中的作用尚不清楚。本论文旨在研究NUSAP1在胶质母细胞瘤中所扮演的角色。结合临床数据平台及临床样本的分析,NUSAP1可作为胶质母细胞瘤诊断及治疗的分子标记物。结合细胞水平及体内水平的研究,NUSAP1能够促进胶质母细胞瘤的生长,并且NUSAP1能够增强胶质母细胞瘤的化学耐药性,提供了NUSAP1在胶质母细胞瘤治疗中的理论基础。主要研究结果如下:1.NUSAP1在胶质瘤中高表达并且其高表达与胶质瘤病人的不... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 概述
    1.2 胶质母细胞瘤
        1.2.1 胶质母细胞瘤的特性
        1.2.2 胶质母细胞瘤的治疗
    1.3 核仁纺锤体相关蛋白(NUSAP1)与肿瘤
        1.3.1 NUSAP1的生物学特性
        1.3.2 NUSAP1的研究进展
第2章 引言
    2.1 研究背景及目的意义
        2.1.1 研究背景
        2.1.2 研究目的及意义
    2.2 主要研究内容
        2.2.1 NUSAP1在胶质母细胞瘤中的表达及其对胶质母细胞瘤预后的影响
        2.2.2 NUSAP1对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡和成瘤能力的调控
        2.2.3 NUSAP1调控胶质母细胞瘤生长的机制研究
        2.2.4 NUSAP1调控胶质母细胞瘤化学耐药性的研究
    2.3 技术路线
第3章 NUSAP1在胶质母细胞瘤中的表达及其临床预后分析
    3.1 实验材料、仪器及试剂
        3.1.1 主要实验材料(组织样本及细胞系)
        3.1.2 临床病人数据库
        3.1.3 实验仪器及设备
        3.1.4 实验试剂
        3.1.5 主要实验试剂的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞复苏
        3.2.2 细胞培养
        3.2.3 细胞传代
        3.2.4 细胞冻存
        3.2.5 免疫组织化学
        3.2.6 蛋白免疫印迹(Western Blot)
        3.2.7 临床数据分析
        3.2.8 数据统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 NUSAP1在胶质母细胞瘤患者以及细胞系中高表达
        3.3.2 NUSAP1与胶质母细胞瘤患者的预后密切相关
    3.4 讨论
第4章 NUSAP1 调控胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡、DNA损伤以及肿瘤形成能力
    4.1 实验材料、仪器及试剂
        4.1.1 主要实验材料
        4.1.2 实验仪器及设备
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 主要实验试剂的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 NUSAP1敲低载体构建
        4.2.2 慢病毒转染以及细胞感染
        4.2.3 细胞计数及铺板
        4.2.4 MTT实验
        4.2.5 BrdU实验
        4.2.6 流式细胞术检测细胞凋亡
        4.2.7 蛋白免疫印迹(Western Blot)
        4.2.8 Caspase3/7 活性检测
        4.2.9 彗星实验
        4.2.10 免疫荧光
        4.2.11 软琼脂克隆实验
        4.2.12 小鼠原位移植瘤实验
    4.3 实验结果
        4.3.1 在胶质母细胞瘤细胞中下调NUSAP1的表达
        4.3.2 敲低NUSAP1抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖
        4.3.3 敲低NUSAP1促进胶质母细胞瘤发生细胞凋亡
        4.3.4 敲低NUSAP1 引起胶质母细胞瘤细胞发生DNA损伤
        4.3.5 敲低NUSAP1抑制胶质母细胞瘤的克隆形成能力
        4.3.6 敲低NUSAP1抑制胶质母细胞瘤细胞的体内成瘤能力
    4.4 讨论
第5章 NUSAP1对ATR通路的影响及其调控作用
    5.1 实验材料、仪器及试剂
        5.1.1 主要实验材料
        5.1.2 实验仪器及设备
        5.1.3 实验试剂
        5.1.4 主要实验试剂的配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 RNA提取(Trizol/氯仿抽提)
        5.2.2 荧光定量PCR
        5.2.3 慢病毒转染及细胞感染
        5.2.4 蛋白免疫印迹
        5.2.5 蛋白稳定性检测
        5.2.6 蛋白免疫共沉淀实验
        5.2.7 泛素化实验
        5.2.8 蛋白截短实验
        5.2.9 SUMO化实验
        5.2.10 数据统计分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 胶质母细胞瘤细胞中ATR蛋白的表达量与NUSAP1 蛋白的表达呈正相关
        5.3.2 胶质母细胞瘤中NUSAP1 调控ATR的蛋白稳定性
        5.3.3 NUSAP1 调控ATR的泛素化
        5.3.4 NUSAP1 通过稳定ATR促进胶质母细胞瘤发生凋亡和DNA损伤
        5.3.5 NUSAP1与ATR相互结合
        5.3.6 NUSAP1 通过其COOH基末端与ATR结合
        5.3.7 NUSAP1 通过其SAP结构域调控ATR的泛素化和SUMO化
    5.4 讨论
第6章 NUSAP1调控胶质母细胞瘤细胞的化学耐药性
    6.1 实验材料、仪器及试剂
        6.1.1 主要实验材料
        6.1.2 实验仪器及设备
        6.1.3 实验试剂
        6.1.4 主要实验试剂的配制
    6.2 实验方法
        6.2.1 慢病毒转染
        6.2.2 细胞感染
        6.2.3 NUSAP1敲低及过表达与化疗药物的联合使用
        6.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡
        6.2.5 细胞活力检测以及细胞半致死浓度(IC50)计算
        6.2.6 数据统计分析
    6.3 实验结果
        6.3.1 敲低NUSAP1增强胶质母细胞瘤对替莫唑胺和阿霉素治疗的敏感性
        6.3.2 NUSAP1 通过其SAP结构域增强胶质母细胞瘤的化学耐药性
        6.3.3 NUSAP1 通过稳定ATR调控胶质母细胞瘤的生长以及化学耐药性
    6.4 讨论
第7章 综合与讨论
    1.NUSAP1在胶质母细胞瘤中的表达情况及其与预后的关系
    2.NUSAP1对胶质母细胞瘤细胞生长及成瘤能力的调控研究
    3.NUSAP1调控胶质母细胞瘤生长的分子机制研究
    4.NUSAP1 通过其SAP结构域调控胶质母细胞瘤细胞的化学耐药性
论文创新点
参考文献
博士在读期间发表论文及参研课题情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Hepatitis B virus X protein enhances hepatocarcinogenesis by depressing the targeting of NUSAP1 mRNA by miR-18b[J]. Zhe Yang,Jiong Li,Guoxing Feng,Yuan Wang,Guang Yang,Yunxia Liu,Shuqin Zhang,Jinyan Feng,Xiaodong Zhang.  Cancer Biology & Medicine. 2019(02)



本文编号：3199494