有框架立体定向技术在帕金森病中的应用及基础研究
发布时间：2021-05-31 19:46
背景及目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是中老年人群中常见的神经变性疾病,不仅给患者、家庭带来了身体和心理的痛苦,同时也给社会带来了沉重的经济负担。其病理特征是黑质中的多巴能神经元进行性丧失,纹状体内多巴胺含量下降,α突触核蛋白（α-Syn）聚集以及神经炎症过度表达在帕金森病中扮演了重要的角色。基于有框架立体定向技术的丘脑底核脑深部电刺激术（Deep brain stimulation of Subthalamic nucleus,STN-DBS）可以显著改善帕金森病运动症状,但对非运动症状的改善存在不确定性,如何改善患者运动症状的同时改善非运动症状是诸多医疗科技工作者研究的重点。近年来,小胶质细胞神经炎症反应在帕金森病发病机制和调控中的作用越来越得到重视,研究表明,mi RNA在α-syn诱导的小胶质细胞神经炎症中发挥调节作用,mi R-let-7a是let-7家族非常重要的成员,被发现在体外条件下可调节小胶质细胞的炎症,我们假设mi R-let-7a可能在PD发病中起作用,并试图探讨其机制。本研究从临床上回顾性分析江西省人民医院行STN-DBS手术治疗的...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
(A-B)术前计划，C术后电极与术前计划对比，(D-E)术中电极植入照片，F术后头颅CT，电极在位，无出血及颅内积气等表现
第3章立体定向技术在鼠帕金森病模型中的应用：miR-let-7a通过靶向STAT3抑制α-突触核蛋白诱导的帕金森病炎症反应27我们首先在帕金森病小鼠模型中检测了上述指标的表达。造模成功3周后，通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析，模型组的小鼠SNpc中miR-let-7a的表达水平明显低于对照组(图6A)。同时，Westernblot实验证实，STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)的表达水平较对照组显著升高(图6B)。以上结果表明了miR-let-7a和STAT3水平在小鼠帕金森病模型中负相关的表达模式。由于帕金森病病理过程中的神经炎症反应主要由小胶质细胞介导，我们在小鼠小胶质细胞株BV-2中检测了上述指标，结果与动物模型一致。并且发现α-Syn以浓度依赖方式调控miR-let-7a水平（图6C）、STAT3水平以及磷酸化STAT3水平（图6D），随着α-Syn浓度的提升，miR-let-7a水平逐渐降低，而STAT3水平以及磷酸化STAT3水平逐渐升高。图6在α-sync诱导的小鼠帕金森病模型和小鼠小胶质细胞株中，miR-let-7a和STAT3表达水平相反。(A)将AAV2-vector或AAV2-α-SynPBS溶液注射入小鼠SNpc。每组12只小鼠。注射后3周取出SNpc，通过qRT-PCR分析miR-let-7a水平。使用内参对数据进行标准化。(B)Westernblotting检测SNpc中STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。每组4只小鼠。（C-D）用1、5、10ug/ml不同浓度的重组蛋白α-Syn处理BV-2小胶质细胞24h分别通过qRT-PCR和Westernblotting检测miR-let-7a、STAT3、p-STAT3水平。3.3.2BV-2小胶质细胞株中，STAT3是miR-let-7a的直接靶标miRNAs通常通过一种序列特异的方式负性调控基因表达。通过观察α
第3章立体定向技术在鼠帕金森病模型中的应用：miR-let-7a通过靶向STAT3抑制α-突触核蛋白诱导的帕金森病炎症反应28-Syn诱导的miR-let-7a和STAT3的反向调控现象，我们猜测在小胶质细胞中，STAT3是miR-let-7a的直接作用靶点。为了验证这一假说，首先，我们进行了数据库检索，通过TargetScan数据库发现miR-let-7a和STAT3之间有一段互补序列（图7A）。为了进一步验证miR-let-7a和STAT3的相互作用，我们构建了STAT3的3’UTR载体，通过荧光素酶报告实验进行验证，发现miR-let-7a过表达或者敲低之后会反向调控野生型STAT3的3’UTR表达水平（图7B-C）。除此之外，还证实了miR-let-7a的表达水平直接影响了STAT3的mRNA水平：miR-let-7a过表达后，STAT3表达显著降低，而miR-let-7a敲除后，STAT3表达升高。以上实验表明miR-let-7a可以直接靶向作用于STAT3（图7D-E）。我们通过westernblot实验检测了STAT3和p-STAT3的蛋白水平，结果同前所述，进一步证实了经过α-Syn处理的BV-2细胞中miR-let-7a和STAT3的表达关系变化（图7F）。图7在BV-2细胞中STAT3作为miR-let-7a的直接靶标。（A）通过Targetscan分析miR-let-7a和STAT33’UTR的序列关系。（B-C）miR-let-7a过表达或敲低时STAT33’UTR水平变化。（D-E）BV-2细胞中miR-let-7a过表达以及敲低之后miR-let-7a和STAT3的表达水平变化。（F）进一步证实α-Syn、miR-let-7a和STAT3三者之间的相互作用关系，结论同前。3.3.3miR-let-7a在BV-2细胞中通过靶向STAT3抑制α-Syn诱导的促炎反应小胶质细胞活化和激发炎症对于帕金森病的发展至关重要，因此我们探究了miR-let-7a-STAT3信号轴对于α-Syn在体外诱导的小胶质细胞的活化和炎症
【参考文献】：
期刊论文
[1]立体定向微创穿刺置管引流与开颅血肿清除手术治疗基底核区脑出血疗效比较[J]. 周艳,夏莉君,陈映. 神经损伤与功能重建. 2020(02)
[2]转突变型A53Tα-突触核蛋白基因的帕金森模型小鼠中脑的全基因组甲基化测序分析[J]. 吴婷,刘琳,黎昭,林贤. 中山大学学报(医学版). 2020(01)
[3]伐仑克林靶向α-syn蛋白对帕金森病大鼠的机制研究[J]. 孙伟,赵守财,储照虎. 脑与神经疾病杂志. 2020(01)
[4]小鼠纹状体与视网膜的比较转录组学分析[J]. 须周恒,朱营利,孙孟菲,魏志远,潘佳琪,潘旭斌,陈建欢. 深圳大学学报(理工版). 2020(01)
[5]单唾液酸神经节苷脂对帕金森病痴呆模型大鼠的保护性治疗作用[J]. 潘燕,马亚新,朱静,白杨. 卒中与神经疾病. 2019(06)
[6]基于视觉定位的国产机器人辅助脑深部电刺激电极植入的精准性研究[J]. 刘焕光,杨岸超,刘德峰,张建国. 中华神经外科杂志. 2019(10)
[7]硫辛酸对帕金森病小鼠模型自噬蛋白表达水平的影响[J]. 王文慧,赵虹,苏正伟. 卒中与神经疾病. 2019(05)
[8]TRIF在秋水仙素致小鼠纹状体-黑质轴突退变模型中的作用[J]. 周红利,林森,李淑蓉,孙静,苏炳银. 成都医学院学报. 2019(05)
[9]我国成功完成世界首例5G远程操控颅脑手术[J]. 微创医学. 2019(04)
[10]边缘前皮质α2肾上腺素受体调节帕金森病模型大鼠的抑郁样行为[J]. 吴仲恒,王涛,惠艳娉,李立博,张巧俊. 西安交通大学学报(医学版). 2019(05)
本文编号：3208863
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
(A-B)术前计划，C术后电极与术前计划对比，(D-E)术中电极植入照片，F术后头颅CT，电极在位，无出血及颅内积气等表现
第3章立体定向技术在鼠帕金森病模型中的应用：miR-let-7a通过靶向STAT3抑制α-突触核蛋白诱导的帕金森病炎症反应27我们首先在帕金森病小鼠模型中检测了上述指标的表达。造模成功3周后，通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析，模型组的小鼠SNpc中miR-let-7a的表达水平明显低于对照组(图6A)。同时，Westernblot实验证实，STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)的表达水平较对照组显著升高(图6B)。以上结果表明了miR-let-7a和STAT3水平在小鼠帕金森病模型中负相关的表达模式。由于帕金森病病理过程中的神经炎症反应主要由小胶质细胞介导，我们在小鼠小胶质细胞株BV-2中检测了上述指标，结果与动物模型一致。并且发现α-Syn以浓度依赖方式调控miR-let-7a水平（图6C）、STAT3水平以及磷酸化STAT3水平（图6D），随着α-Syn浓度的提升，miR-let-7a水平逐渐降低，而STAT3水平以及磷酸化STAT3水平逐渐升高。图6在α-sync诱导的小鼠帕金森病模型和小鼠小胶质细胞株中，miR-let-7a和STAT3表达水平相反。(A)将AAV2-vector或AAV2-α-SynPBS溶液注射入小鼠SNpc。每组12只小鼠。注射后3周取出SNpc，通过qRT-PCR分析miR-let-7a水平。使用内参对数据进行标准化。(B)Westernblotting检测SNpc中STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。每组4只小鼠。（C-D）用1、5、10ug/ml不同浓度的重组蛋白α-Syn处理BV-2小胶质细胞24h分别通过qRT-PCR和Westernblotting检测miR-let-7a、STAT3、p-STAT3水平。3.3.2BV-2小胶质细胞株中，STAT3是miR-let-7a的直接靶标miRNAs通常通过一种序列特异的方式负性调控基因表达。通过观察α
第3章立体定向技术在鼠帕金森病模型中的应用：miR-let-7a通过靶向STAT3抑制α-突触核蛋白诱导的帕金森病炎症反应28-Syn诱导的miR-let-7a和STAT3的反向调控现象，我们猜测在小胶质细胞中，STAT3是miR-let-7a的直接作用靶点。为了验证这一假说，首先，我们进行了数据库检索，通过TargetScan数据库发现miR-let-7a和STAT3之间有一段互补序列（图7A）。为了进一步验证miR-let-7a和STAT3的相互作用，我们构建了STAT3的3’UTR载体，通过荧光素酶报告实验进行验证，发现miR-let-7a过表达或者敲低之后会反向调控野生型STAT3的3’UTR表达水平（图7B-C）。除此之外，还证实了miR-let-7a的表达水平直接影响了STAT3的mRNA水平：miR-let-7a过表达后，STAT3表达显著降低，而miR-let-7a敲除后，STAT3表达升高。以上实验表明miR-let-7a可以直接靶向作用于STAT3（图7D-E）。我们通过westernblot实验检测了STAT3和p-STAT3的蛋白水平，结果同前所述，进一步证实了经过α-Syn处理的BV-2细胞中miR-let-7a和STAT3的表达关系变化（图7F）。图7在BV-2细胞中STAT3作为miR-let-7a的直接靶标。（A）通过Targetscan分析miR-let-7a和STAT33’UTR的序列关系。（B-C）miR-let-7a过表达或敲低时STAT33’UTR水平变化。（D-E）BV-2细胞中miR-let-7a过表达以及敲低之后miR-let-7a和STAT3的表达水平变化。（F）进一步证实α-Syn、miR-let-7a和STAT3三者之间的相互作用关系，结论同前。3.3.3miR-let-7a在BV-2细胞中通过靶向STAT3抑制α-Syn诱导的促炎反应小胶质细胞活化和激发炎症对于帕金森病的发展至关重要，因此我们探究了miR-let-7a-STAT3信号轴对于α-Syn在体外诱导的小胶质细胞的活化和炎症
【参考文献】：
期刊论文
[1]立体定向微创穿刺置管引流与开颅血肿清除手术治疗基底核区脑出血疗效比较[J]. 周艳,夏莉君,陈映. 神经损伤与功能重建. 2020(02)
[2]转突变型A53Tα-突触核蛋白基因的帕金森模型小鼠中脑的全基因组甲基化测序分析[J]. 吴婷,刘琳,黎昭,林贤. 中山大学学报(医学版). 2020(01)
[3]伐仑克林靶向α-syn蛋白对帕金森病大鼠的机制研究[J]. 孙伟,赵守财,储照虎. 脑与神经疾病杂志. 2020(01)
[4]小鼠纹状体与视网膜的比较转录组学分析[J]. 须周恒,朱营利,孙孟菲,魏志远,潘佳琪,潘旭斌,陈建欢. 深圳大学学报(理工版). 2020(01)
[5]单唾液酸神经节苷脂对帕金森病痴呆模型大鼠的保护性治疗作用[J]. 潘燕,马亚新,朱静,白杨. 卒中与神经疾病. 2019(06)
[6]基于视觉定位的国产机器人辅助脑深部电刺激电极植入的精准性研究[J]. 刘焕光,杨岸超,刘德峰,张建国. 中华神经外科杂志. 2019(10)
[7]硫辛酸对帕金森病小鼠模型自噬蛋白表达水平的影响[J]. 王文慧,赵虹,苏正伟. 卒中与神经疾病. 2019(05)
[8]TRIF在秋水仙素致小鼠纹状体-黑质轴突退变模型中的作用[J]. 周红利,林森,李淑蓉,孙静,苏炳银. 成都医学院学报. 2019(05)
[9]我国成功完成世界首例5G远程操控颅脑手术[J]. 微创医学. 2019(04)
[10]边缘前皮质α2肾上腺素受体调节帕金森病模型大鼠的抑郁样行为[J]. 吴仲恒,王涛,惠艳娉,李立博,张巧俊. 西安交通大学学报(医学版). 2019(05)
本文编号：3208863
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