肠道病毒D68型疫苗和单克隆抗体的应用基础研究
发布时间：2021-06-07 20:04
肠道病毒EVD68是小RNA病毒科,肠道病毒属D种的病毒,近年来肠道病毒的在全球范围内爆发感染,引起了广泛的关注。全球各个国家纷纷将EVD68病毒作为公共卫生系统的重点监测对象。目前针对EVD68病毒感染尚没有有效的预防性疫苗和治疗性药物上市。本研究工作的第一部分内容,介绍了一种基于灭活全病毒颗粒的EVD68疫苗。首先我们在500ml的搅拌瓶中,使用cytodex-1微载体密度为5g/L的培养条件下,实现了微载体辅助的Vero细胞悬浮培养,随后经过病毒感染条件的优化,确定了以MOI=1/5000的病毒感染,并在病毒感染之后第5天收获病毒上清液的最佳病毒培养条件。收获的病毒滴达108.15TCID50/ml。随后病毒液经过β丙内酯（β-propiolactone,BPL）灭活与PEG沉淀浓缩和蔗糖梯度超速离心纯化等步骤,获得了高纯度的灭活病毒颗粒。经过病毒衣壳蛋白生化分析和病毒形态的电镜分析,明确了病毒的衣壳蛋白的组成以及病毒30nm球形颗粒形态。最后用EVD68灭活病毒疫苗免疫小鼠之后,在小鼠体内诱导产生了针对EVD68...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海巴斯德研究所)上海市
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
小RNA病毒基因组结构和蛋白切割模式图
第1章背景介绍7非翻译区，衣壳区VP4/VP2和VP1以及3DRNA聚合酶基因的部分核苷酸序列的同源性分别为97.3,97.8,95.2和95.9％。两者衣壳蛋白氨基酸序列相似性98.1%，3DRNA聚合酶氨基酸序列相似性97.9%。因此在早期，EVD68病毒的分类被定义为HRV病毒。临床研究发现，EVD68病毒和HRV病毒经常出现共流行的情况，而且EVD68病例通常比鼻病毒的患者更有可能是哮喘病史的患者，同时在发病之后，更容易出现哮喘症状的复发[46]。EVD68儿童入院时的呼吸系统疾病似乎比患有HRV的儿童更严重，因为发热，喘息，支气管扩张剂使用率和儿科重症监护病房入院率较高[47,48]。尽管严重程度存在差异，但EVD68的病程和恢复与HRV一样快，没有显著性差异[49]。1.6EVD68的复制周期EVD68病毒的生活周期和其他肠道病毒的生活周期类似。EVD68完整的复制周期包括病毒的进入、病毒的RNA复制、病毒蛋白的翻译，病毒衣壳蛋白和基因组的组装，病毒的释放。病毒进入的过程，包括了病毒在细胞表面的吸附，细胞的内吞，病毒脱衣壳，RNA释放这些步骤。图1.2肠道病毒的生活周期示意图。（引自Thelifecycleofnon-polioenterovirusesandhowtotargetit.2018.）Figure1.2Schematicoverviewoftheenteroviruslifecycle.Afterbindingtoitsreceptor,orreceptors,andendocyticuptakeinthecell,theviriondeliversitspositive-strand(+)RNAgenomeacrosstheendosomalmembraneintothecytoplasm.Theviral
organizeintoprotomersandpentamersand,inconcertwithreplicationmachineryandgenomicRNA,assembleintoprovirionsthatareconvertedintoinfectious,maturevirionsuponthegenome-inducedcleavageofVP0intoVP4andVP2.Maturevirionsexitthehostcellvianon-lyticreleaseofextracellularvesiclesorviacelllysisinalatestageofinfection.dsRNA,double-strandedRNA.目前关于肠道病毒生活周期的研究，主要集中在EVD68的受体和病毒脱衣壳过程的研究方面。这部分内容在后面病毒的受体部分讲到。针对其他过程的研究，目前比较少。图1.3肠道病毒脱衣壳机制示意图。（引自Thelifecycleofnon-polioenterovirusesandhowtotargetit.2018.）Figure1.3Theenterovirusuncoatingmechanism.
本文编号：3217220
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海巴斯德研究所)上海市
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
小RNA病毒基因组结构和蛋白切割模式图
第1章背景介绍7非翻译区，衣壳区VP4/VP2和VP1以及3DRNA聚合酶基因的部分核苷酸序列的同源性分别为97.3,97.8,95.2和95.9％。两者衣壳蛋白氨基酸序列相似性98.1%，3DRNA聚合酶氨基酸序列相似性97.9%。因此在早期，EVD68病毒的分类被定义为HRV病毒。临床研究发现，EVD68病毒和HRV病毒经常出现共流行的情况，而且EVD68病例通常比鼻病毒的患者更有可能是哮喘病史的患者，同时在发病之后，更容易出现哮喘症状的复发[46]。EVD68儿童入院时的呼吸系统疾病似乎比患有HRV的儿童更严重，因为发热，喘息，支气管扩张剂使用率和儿科重症监护病房入院率较高[47,48]。尽管严重程度存在差异，但EVD68的病程和恢复与HRV一样快，没有显著性差异[49]。1.6EVD68的复制周期EVD68病毒的生活周期和其他肠道病毒的生活周期类似。EVD68完整的复制周期包括病毒的进入、病毒的RNA复制、病毒蛋白的翻译，病毒衣壳蛋白和基因组的组装，病毒的释放。病毒进入的过程，包括了病毒在细胞表面的吸附，细胞的内吞，病毒脱衣壳，RNA释放这些步骤。图1.2肠道病毒的生活周期示意图。（引自Thelifecycleofnon-polioenterovirusesandhowtotargetit.2018.）Figure1.2Schematicoverviewoftheenteroviruslifecycle.Afterbindingtoitsreceptor,orreceptors,andendocyticuptakeinthecell,theviriondeliversitspositive-strand(+)RNAgenomeacrosstheendosomalmembraneintothecytoplasm.Theviral
organizeintoprotomersandpentamersand,inconcertwithreplicationmachineryandgenomicRNA,assembleintoprovirionsthatareconvertedintoinfectious,maturevirionsuponthegenome-inducedcleavageofVP0intoVP4andVP2.Maturevirionsexitthehostcellvianon-lyticreleaseofextracellularvesiclesorviacelllysisinalatestageofinfection.dsRNA,double-strandedRNA.目前关于肠道病毒生活周期的研究，主要集中在EVD68的受体和病毒脱衣壳过程的研究方面。这部分内容在后面病毒的受体部分讲到。针对其他过程的研究，目前比较少。图1.3肠道病毒脱衣壳机制示意图。（引自Thelifecycleofnon-polioenterovirusesandhowtotargetit.2018.）Figure1.3Theenterovirusuncoatingmechanism.
本文编号：3217220
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