通过靶向c-MET和BCL-2克服第三代EGFR抑制剂AC0010耐药的作用机制研究

发布时间：2021-06-08 18:08

　　研究背景和目的:AC0010（艾维替尼）是以吡咯嘧啶环为母核的EGFR不可逆结合抑制剂,与之前报道的基于嘧啶环为母核的EGFR不可逆结合抑制剂（如奥希替尼、卢瑟替尼等）在结构上有明显不同。在临床前和临床研究表明AC0010可选择性的抑制EGFR T790M突变。然而,AC0010治疗后最终也将导致耐药,具体作用机制尚未知晓。本研究拟通过体外不同方法建立AC0010耐药细胞株,并通过RNA seq和Western Blot等分子生物学方法探索耐药的作用机制。我们发现c-MET和BCL-2在两个耐药株中分别异常表达,通过小分子抑制剂和si RNA方法靶向c-MET和BCL-2可克服AC0010耐药。本研究为临床治疗中出现AC0010耐药的肺癌患者治疗提供了一种有效的基于耐药机制的联合用药克服耐药策略和解决方案。研究方法:1、选择同时具有21外显子L858R突变和20外显子T790M的NCI-H1975细胞株,通过体外浓度递增法诱导建立AC0010耐受的NCI-H1975耐药细胞株和通过NCIH1975移植瘤小鼠模型体内持续暴露AC0010形成耐药肿瘤组织并取出培养建立耐药细胞株。2、通过对... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

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1转录组建库测序流程图

AC0010为杭州艾森医药研发的第三代EGFR抑制剂,NCI-H1975为具有EGFR L858R和T790M双突变的人肺癌细胞株。根据CCK-8实验结果计算不同浓度的AC0010对NCI-H1975的增殖抑制率,再根据抑制率使用GraphPad拟合IC50曲线,如图3.1-1所示,AC0010作用NCI-H1975细胞的IC50为18.89nM。3.2 AC0010耐药细胞株的建立

使用正置显微镜下观察,NCI-H1975细胞、H1975-P细胞和H1975-AVR细胞均单层排列生长,细胞边界清楚,多为长梭形或多边形,生长时细胞分散较好,不聚团生长,与NCI-H1975细胞(A、D)相比,H1975-P细胞形态偏圆一些(B、E),H1975-AVR细胞偏长一些(C、F)(图3.2-1)。3.2.4多个EGFR-TKI对NCI-H1975及其耐药株H1975-P1和H1975-AVR1细胞的增殖抑制IC50

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3218938