天麻素调控p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻小鼠肝窦内皮细胞氧化损伤的机制研究

发布时间：2021-06-11 03:36

　　[目的]肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）是指在肝脏切除及肝移植过程中,由于临时性的阻断肝脏血供造成肝脏受损,当给予恢复正常血供后肝脏损伤情况未得到缓解反而加重的现象。在HIRI中肝窦内皮细胞（LSECs）是最早受到损伤的细胞,被称为HIRI中的第一道防线。HIRI中氧化应激的发生与肝窦内皮细胞的损伤关系密切。因此,如能有效的保护肝窦内皮细胞的功能及减轻氧化应激的发生,则有利于保护HIRI。目前临床上还没有研制出能减轻HIRI中氧化损伤的药物,因此开发出高效、低毒的抗氧化损伤的药物成了预防HIRI中有待解决难题。天麻素（GSTD）作为一种有效的抗氧化剂和氧自由基清除剂,主要被用于神经系统、心血管系统疾病的治疗,并且具有肝脏保护的功能。因此本研究的目的是探讨GSTD在LSECs氧化损伤中的保护作用及其分子机制,为临床HIRI的防治提供理论依据。[方法]首先使用1mM H2O2构建LSECs的氧化应激模型,同时给予1、10及50μM GSTD处理细胞,通过检测ROS、MDA的含量,评价了 GSTD在LSECs氧化应激过程中的缓解作用;通过TUNEL法、Annexin V-FITC-PI双染法检... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．?１?Ｈ２０２对ＬＳＥＣｓ存活率的影响??

?１??２９０．０－１?－？－?Ｈ｜〇，?？?１０?ｍＭ?ＯＳＴＤ?＿＾＿?４?Ｓ〇?＾?ＧＳＴＯ?＊＊?＊？?＊??一?ｍ?９０?ＪＬ?？??ｒｏ?ｅｏ?Ａ?ｌ＇°?ｎ??ｒ：＾?Ｉ：Ａ?ｎＡ?｜ｓｎ?ｆｌＬ??Ｑ?ＩＩ?，１１，１，１，１１，１１，１?〇?丄』Ｉ?Ｉ???？－ｒ＊?【１?Ｌ??０?ｉ?ｉ?；?．?？?（ｈ，?ＫＡ?－?？？…?ＨＡ?－?？?？?？?？??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０?（？ＡＩ）?ＧＳＴＯ?－?－?１?１０?５０?（｜ｉＭ）??图１．２?ＧＳＴＤ抑制Ｈ２Ｏ２诱导的ＬＳＥＣｓ凋亡与氧化应激??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?ＧＳＴＤ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?Ｈ２〇２－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ?ｉｎ?ＬＳＥＣｓ??（Ａ）流式细胞术检测了?Ｈ２Ｏ２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌ（ｉＭ、１０）ｉＭ、５０｜ａＭ）处理对??ＬＳＥＣｓ?凋亡水平的影响；（Ｂ）?Ｈ２０２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌ｜ａＭ、ｌＯｐＭ、５０（ｘＭ）??处理对?ＬＳＥＣｓ?存活率的影响；（Ｃ）?Ｈ２〇２（ｌｍＭ）和?ＧＳＴＤ（ｌｐＭ、１０ｐＭ、５０｜ａＭ）??处理对?ＲＯＳ?水平的影响；（Ｄ）?Ｈ２〇２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌｐＭ、ｌＯｐＭ、５０ｐＭ）??对?ＭＤＡ?水平的影响。（＊；Ｋ０．０５，＊＊／？＜０．０１）??３?ＧＳＴＤ抑制Ｈ２０２诱导的ＬＳＥＣｓ?ｃａｓｐａｓｅ－９相关凋亡途径??由于ＧＳＴＤ能够抑制Ｈ２〇２诱导的细胞凋亡，我们进一步研宄了?ＧＳＴＤ抑制??细胞调亡的机制。细胞调亡经典通路显示ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９是细胞阔亡中??的两

同时，为了弄清ＧＳＴＤ抑制Ｈ２０２诱导的氧化应激过程是否通过Ｈ０－１通路??进行调控，我们又检测了在加入ＨＯ－１抑制剂Ｚｎｐｐ时ＧＳＴＤ处理对细胞中ＭＤＡ??含量的影响。如图１．４Ｄ所示，与对照组相比，只加入Ｚｎｐｐ并不影响ＭＤＡ的含??量（尸＞０．０５）；在Ｈ２〇２诱导的同时加入Ｚｎｐｐ细胞中ＭＤＡ的含量达到峰值，也??就是说氧化应激程度达到最大；再加入不同浓度的ＧＳＴＤ处理后，ＭＤＡ含量随??之降低（／Ｋ０．０５），说明ＧＳＴＤ通过促进ＨＯ－１的表达从而抑制Ｈ２〇２诱导的氧??化应激作用。??Ａ??ＨＯ＞１?—?一?一?＿?鑛?ＨＯ＞１?＿?？馨??ｗ?ｍＢ?ｍｍ??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０（ｍＭ）ｈ２°２?？?？?？?？?？??Ｈ２Ｏａ?－?？?？?？?？?ＧＳＴＤ?－?〇?２?４?６?（ｈ）??１０?ｐＭ??ｈ－?ｉ－?ｉ－?ｉ?？?ｒ￣Ｆｌ－??ｈ?—￣ＨＴｉ?Ｕ?—￣??￥ｏｅ?￥?广??ｉ０４?ｎｎ?Ｉ?〇．５??０．Ｗ０ＩＩＩ??响．？?？?？?？?＾＞?：?；?２?；?；？ｈ，??ＯＳＴＤ?？?？?１?１０?ＳＯ?（？Ｍ）??Ｂ??Ｎｒｆ２?ｆｌｔｆｌｔｆｌＢ?Ｎｒｆ２?—??????ＬａｍｌｎＢ?Ｌ？ｎｌｎ?Ｂ??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０?＿＞?ＨＡ?？?？?？?？?？??Ｈ２Ｏ２?？?？?？?？?？?ＧＳＴＤ?－?０?２?４?６?（ｈ）??１０?ｍｍ??ｆ１－５ｉｒ－ＴＴｉ?ｉ１－６］?ｎ??％?＾?Ｉ??｜?０．５?｜?０．５???，?ｒ－－?〇〇ｌｌ７ｌ－〇－ＯＪ?．?ＬＬ－??叱？?？?？?？?？?ＨｊＯｊ?－?？?

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本文编号：3223728