耐药细胞外泌体中miR193对食管癌细胞耐药作用及其机制

发布时间：2021-06-24 00:14

　　引言食管癌是全球第八大常见肿瘤,也是世界癌症相关死亡的最常见原因之一。统计结果显示,我国食管癌患者占全球患者总数的一半以上,男性和女性死亡率都居于全球首位,食管癌的治疗方案包括手术、化疗、放疗等。中晚期食管癌耐药性的产生是阻碍治疗效果的重要因素之一。肿瘤耐药的机制包括:（1）药物外排,减少肿瘤细胞内药物的浓度。（2）细胞凋亡阻滞。（3）DNA损伤修复应答。在肿瘤细胞中,耐药性的产生可能由一种或几种机制共同发挥作用,不同肿瘤细胞中的作用机制不同。外泌体是具有脂质双分子膜的纳米级囊泡,存在于所有体液中。肿瘤细胞分泌的外泌体参与多种细胞功能和生理病理事件。外泌体内容物包括mRNA、miRNA、蛋白质等,这些内容物都具有生物活性,能够在靶细胞中执行功能反应,而外泌体内容物miRNA与食管癌化疗耐药性的作用及其相关机制,目前尚不清楚。本实验通过食管癌细胞株TE1构建食管癌顺铂耐药细胞株TE1/DDP,并研究食管癌耐药细胞株TE1/DDP分泌的外泌体对敏感细胞株TE1顺铂敏感性的影响。通过对外泌体中的miRNA和处理细胞转录组进行高通量测序,利用生物信息学软件进行miRNA和mRNA关联分析,寻找... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：153 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１食管癌细胞ＣＣＫ－８检测结果??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣＣＫ－８?ｋｉｔ?ｆｏｒ?ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ??

?第一部分顺铂耐药细胞外泌体对敏感细胞顺钼耐受性的影响???３ｌ?令?ＴＳ１ＣＤＰ??Ｔ＆ｌ４〇７ｕ＾ＷＤＯＰ??Ｔ＆１？Ｗｔ０７ｕ（｜４Ｔｉ?ＤＯＰ??？?Ｔ＆１??Ｉ！??°?０?２４?４８?７２??Ｔｉｎ?ｅ?（ｈ）??图１．１食管癌细胞ＣＣＫ－８检测结果??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣＣＫ－８?ｋｉｔ?ｆｏｒ?ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ??ＳＯ??ａ?３??６０??????Ｅ?４０??［２??？２０?—：—Ｉ?邊：隱???????ｌｌ＿ｌｌ＿ｌｌ＂?■—???Ｔｔ：丨?Ｔｔ：ｌ／Ｉ＞ＤＩ＊??图１．２ＴＥ１／ＤＤＰ细胞活力检测??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ??４．２?ＴＥｌ／ＤＤＰ细胞凋亡检测??为了检测构建的顺铂耐药食管癌细胞株ＴＥ１／ＤＤＰ在ＩＣ５Ｑ浓度顺铂（０．７??ｕｇ／ｍＬ）压力下的细胞凋亡情况，我们利用流式细胞仪检测ＴＥ１／ＤＤＰ细胞的凋??亡情况（图１．３）。如图１．３所示：ＩＣ５〇浓度顺铂压力下，ＴＥ１细胞株基本完全凋??亡，凋亡率为９８．４±１．２％，而我们构建的顺铂耐药食管癌细胞株ＴＥ１／ＤＤＰ则只??有部分发生凋亡，凋亡率为５２．８士１５．８９％，两者相比具有显著统计学意义（尸＜??０．００１）。上述实验结果表明，我们构建的顺铂耐药食管癌细胞株ＴＥ１／ＤＤＰ是成??功的。??１５??

?第一部分顺铀耐药细胞外泌体对敏感细胞顺铂耐受性的影响???Ａ?Ｂ??ＴＥＩ?ＴＥ１／ＤＤＰ?穿??Ｓ■嫌????：二?．１?ｒｎ?＂?？??§??Ｉ?Ｍ．??＇黉１?ｒ??？［?＾?—?Ｉ?■??．．?■?＇?．．．?３??ＴＥ１?ＴＥ１，ＤＤＰ??图１．３?ＴＥ１／ＤＤＰ细胞凋亡检测??Ａ：流式细胞仪检测细胞凋亡结果；Ｂ：凋亡检测实验结果数据统计柱状图。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ??Ａ：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥＩ／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；?Ｂ：??ｈｉｓｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ＴＥＩ?／?ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．??表１．３?ＴＥ１／ＤＤＰ细胞凋亡检测数据统计??Ｔａｂｌｅ?１．３?ｄａｔａ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ??ｓａｍｐｌｅ?Ｘ±ＳＤ?Ｐ??ＴＥＩ?９５．８３６土?８．３２１??ＴＥ１／ＤＤＰ?４０．９８３士３．７９５?０．０１５８???４．３外泌体鉴定??我们利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和透射电镜观察的方法，鉴定提取的食管癌外泌体（图??１．４和图１．５）。结果显示，在透射电镜下，可以看到食管癌外泌体的形态，呈现??典型的圆形或椭圆形杯状结构，大小为５０－２００?ｎｍ。用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测外泌体??标志性蛋白分子ＣＤ６３的表达情况，结果显示，在ＴＥ１细胞和ＴＥ１／ＤＤＰ细


本文编号：3245948