化纤煎治疗气阴两虚、痰瘀互结型特发性肺纤维化的临床及实验研究
发布时间：2021-06-25 05:26
目的:根据中医“异病同治”理论,将邵长荣教授矽肺治疗经验应用于特发性肺纤维化,由治疗矽肺有效经验方化裁而成化纤煎应用于IPF治疗。采用随机、对照临床研究,评价化纤煎治疗气阴两虚、痰瘀互结型IPF的临床疗效。进行体外细胞实验研究,观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗IPF的作用机制。方法:临床实验:采用随机、对照临床研究,纳入符合入组标准IPF患者64例,治疗组33例,对照组31例,两组均采用N乙酰半胱氨酸基础治疗,治疗组同时予以中药化纤煎干预,观察比较两组治疗前后中医证候积分,肺功能FVC、TLC、DLCO,6min步行距离,Borg呼吸困难评分,SGRQ生活质量评分,血清细胞因子TNF-α、TGF-β指标。细胞实验:采用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。q RT-PCR法检测α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原m RNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,分泌细胞外基质情况。q RT...
【文章来源】：上海中医药大学上海市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同浓度化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞毒性检测（48H）
上海中医药大学2019届博士研究生学位论文29将MRC-5细胞与浓度分别为200ug/ml，100ug/ml，50ug/ml，25ug/ml，12.5ug/ml，6.25ug/ml，3.125ug/ml，0ug/ml化纤煎冻干粉溶液共同培养，48h和72h后检测细胞活力，结果提示在低于或等于25ug/ml的浓度范围内，均未呈现细胞毒性，为安全浓度范围（见图1，图2），由此确定后续实验化纤煎冻干粉溶液高、中、低浓度分别为25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml。NC:空白对照组,*P<0.01comparedwithNC。图1：不同浓度化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞毒性检测（48H）NC:空白对照组,*P<0.01comparedwithNC。图2：不同浓度化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞毒性检测（72H）2.TGF-β1诱导MRC-5细胞活化模型构建以1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml三个浓度梯度的TGF-β1刺激MRC-5细胞，结果显示，TGF-β1浓度为10ng/ml，作用时间48h时，α-SMA表达水平最高，与空白对照组相比具有显著性差异。刺激浓度为10ng/ml时，作用时间48Hα-SMA表达水平与作用时间24H、72H相比具有显著差异；在作用时间48H时，10ng/ml刺激浓度与1ng/ml、3ng/ml刺激浓度相比，α-SMA表达水平相比具有显著差异。由此可见TGF-β1浓度为10ng/ml，对MRC-5细胞刺激时间48h时，模型构建效果相对最佳。后续实验中选用10ng/ml的浓度和48h的刺激时间（见图3）。
上海中医药大学2019届博士研究生学位论文30图3：TGF-β1对MRC-5细胞α-SMAmRNA表达水平的影响（**P<0.01）3.化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响实验结果显示，与空白对照组比较，模型对照组的MRC-5细胞增殖水平具有显著增加（P<0.01），増值率为14.11%。与模型对照组比较，各化纤煎冻干粉溶液组MRC-5细胞增殖水平均有降低，在化纤煎中剂量、高剂量组降低尤明显（P<0.01），细胞增殖抑制率随药物浓度增加逐步提高（见表15，图4）表15：化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增值的影响（n=6，xˉ±s）组别OD值增殖抑制率（%）空白对照组2.799±0.108模型对照组3.194±0.232*化纤煎低剂量组2.979±0.2376.73化纤煎中剂量组2.709±0.133△15.18化纤煎高剂量组2.479±0.195△22.39注：与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较△P<0.01。NC:空白对照Control:阴性对照*P<0.01comparedwithNC,**P<0.01comparedwithControl图4：化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导MRC-5细胞增殖的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]邵长荣治疗间质性肺病经验[J]. 薛鸿浩,张惠勇. 中医药导报. 2017(18)
[2]益气养阴、散结化瘀方治疗特发性肺纤维化22例[J]. 薛鸿浩,张惠勇,王巍. 光明中医. 2017(04)
[3]基于现代文献特发性肺纤维化中医证候特征研究[J]. 徐飞,崔文强,刘宝君,董竞成. 中国中医基础医学杂志. 2017(01)
[4]活血药对肺纤维化大鼠肺组织TNF-α和IL-8表达的影响[J]. 张伟,韩佳,朱雪,闫小燕. 中国中医药科技. 2015(04)
[5]益气养阴方对肺间质纤维化大鼠肺组织TNF-α、TGF-β1和IFN-γ mRNA水平的影响[J]. 蔡杰,谭利平,冯佳,刘冬梅,赵小丹,夏燕,袁林,向阳. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(07)
[6]养肺活血方对肺纤维化大鼠肺组织水通道蛋白、黏附分子表达的影响[J]. 渠景连,郭海,龚婕宁,辛丽丽,陈惠. 中药材. 2014(09)
[7]特发性肺纤维化薄层MSCT征象与肺功能的相关性[J]. 李淑静,孙舰,郭欣珊,王藏海,史朝霞. 中国医学影像技术. 2012(10)
[8]特发性肺间质纤维化中医证候规律临床研究[J]. 樊茂蓉,韩克华,王书臣. 北京中医药. 2012(04)
[9]实验性矽肺模型大鼠血清TGF-β1和TNF-α的变化[J]. 成红,夏丹,唐婷婷,沙泉. 蚌埠医学院学报. 2012(04)
[10]络通纤溶饮对特发性肺纤维化大鼠肺组织中羟脯氨酸含量的影响[J]. 谢玉兰,方朝义. 河北中医. 2011(11)
博士论文
[1]化痰药干预肺纤维化大鼠纤维生成机制的研究[D]. 张宗学.山东中医药大学 2016
[2]从痰浊阻肺大鼠模型初探痰邪致病机理[D]. 吴秀艳.湖北中医学院 2005
本文编号：3248591
【文章来源】：上海中医药大学上海市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同浓度化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞毒性检测（48H）
上海中医药大学2019届博士研究生学位论文29将MRC-5细胞与浓度分别为200ug/ml，100ug/ml，50ug/ml，25ug/ml，12.5ug/ml，6.25ug/ml，3.125ug/ml，0ug/ml化纤煎冻干粉溶液共同培养，48h和72h后检测细胞活力，结果提示在低于或等于25ug/ml的浓度范围内，均未呈现细胞毒性，为安全浓度范围（见图1，图2），由此确定后续实验化纤煎冻干粉溶液高、中、低浓度分别为25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml。NC:空白对照组,*P<0.01comparedwithNC。图1：不同浓度化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞毒性检测（48H）NC:空白对照组,*P<0.01comparedwithNC。图2：不同浓度化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞毒性检测（72H）2.TGF-β1诱导MRC-5细胞活化模型构建以1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml三个浓度梯度的TGF-β1刺激MRC-5细胞，结果显示，TGF-β1浓度为10ng/ml，作用时间48h时，α-SMA表达水平最高，与空白对照组相比具有显著性差异。刺激浓度为10ng/ml时，作用时间48Hα-SMA表达水平与作用时间24H、72H相比具有显著差异；在作用时间48H时，10ng/ml刺激浓度与1ng/ml、3ng/ml刺激浓度相比，α-SMA表达水平相比具有显著差异。由此可见TGF-β1浓度为10ng/ml，对MRC-5细胞刺激时间48h时，模型构建效果相对最佳。后续实验中选用10ng/ml的浓度和48h的刺激时间（见图3）。
上海中医药大学2019届博士研究生学位论文30图3：TGF-β1对MRC-5细胞α-SMAmRNA表达水平的影响（**P<0.01）3.化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响实验结果显示，与空白对照组比较，模型对照组的MRC-5细胞增殖水平具有显著增加（P<0.01），増值率为14.11%。与模型对照组比较，各化纤煎冻干粉溶液组MRC-5细胞增殖水平均有降低，在化纤煎中剂量、高剂量组降低尤明显（P<0.01），细胞增殖抑制率随药物浓度增加逐步提高（见表15，图4）表15：化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增值的影响（n=6，xˉ±s）组别OD值增殖抑制率（%）空白对照组2.799±0.108模型对照组3.194±0.232*化纤煎低剂量组2.979±0.2376.73化纤煎中剂量组2.709±0.133△15.18化纤煎高剂量组2.479±0.195△22.39注：与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较△P<0.01。NC:空白对照Control:阴性对照*P<0.01comparedwithNC,**P<0.01comparedwithControl图4：化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导MRC-5细胞增殖的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]邵长荣治疗间质性肺病经验[J]. 薛鸿浩,张惠勇. 中医药导报. 2017(18)
[2]益气养阴、散结化瘀方治疗特发性肺纤维化22例[J]. 薛鸿浩,张惠勇,王巍. 光明中医. 2017(04)
[3]基于现代文献特发性肺纤维化中医证候特征研究[J]. 徐飞,崔文强,刘宝君,董竞成. 中国中医基础医学杂志. 2017(01)
[4]活血药对肺纤维化大鼠肺组织TNF-α和IL-8表达的影响[J]. 张伟,韩佳,朱雪,闫小燕. 中国中医药科技. 2015(04)
[5]益气养阴方对肺间质纤维化大鼠肺组织TNF-α、TGF-β1和IFN-γ mRNA水平的影响[J]. 蔡杰,谭利平,冯佳,刘冬梅,赵小丹,夏燕,袁林,向阳. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(07)
[6]养肺活血方对肺纤维化大鼠肺组织水通道蛋白、黏附分子表达的影响[J]. 渠景连,郭海,龚婕宁,辛丽丽,陈惠. 中药材. 2014(09)
[7]特发性肺纤维化薄层MSCT征象与肺功能的相关性[J]. 李淑静,孙舰,郭欣珊,王藏海,史朝霞. 中国医学影像技术. 2012(10)
[8]特发性肺间质纤维化中医证候规律临床研究[J]. 樊茂蓉,韩克华,王书臣. 北京中医药. 2012(04)
[9]实验性矽肺模型大鼠血清TGF-β1和TNF-α的变化[J]. 成红,夏丹,唐婷婷,沙泉. 蚌埠医学院学报. 2012(04)
[10]络通纤溶饮对特发性肺纤维化大鼠肺组织中羟脯氨酸含量的影响[J]. 谢玉兰,方朝义. 河北中医. 2011(11)
博士论文
[1]化痰药干预肺纤维化大鼠纤维生成机制的研究[D]. 张宗学.山东中医药大学 2016
[2]从痰浊阻肺大鼠模型初探痰邪致病机理[D]. 吴秀艳.湖北中医学院 2005
本文编号：3248591
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3248591.html
教材专著
