细胞外囊泡中的miR-196b-5p参与醛固酮调控的肾脏间质纤维化

发布时间：2021-06-28 23:40

　　目的:醛固酮参与了肾脏疾病的发生发展,但醛固酮介导糖尿病小鼠肾脏损害的机制尚不完全清楚。方法:醛固酮和/或盐皮质激素受体拮抗剂（MRA）依普利酮干预糖尿病小鼠（db/db）或近端小管上皮细胞（PTECs）:检测肾脏/PTECs的损伤;提取来源于PTECs的细胞外囊泡（EVs）干预成纤维细胞,并对EVs做miRNA芯片分析。提取肾脏来源的EVs干预正常小鼠,检测肾脏的损伤。检测糖尿病伴或者不伴糖尿病肾病（DKD）患者血清和肾脏样品miR-196b-5p表达。结果:我们发现醛固酮能促进db/db糖尿病小鼠蛋白尿和肾小管间质细胞外基质（ECM）的积累,而依普利酮能减轻醛固酮的不良反应。然而,PTECs和成纤维细胞的共培养发现,当PTECs衍生的细胞外囊泡被成纤维细胞吸收时,ECM的产生显著增加。此外,经醛固酮处理的肾皮质注射EVs的C57BL/6小鼠显示ECM积累增加。我们分析了PTECs分泌的EVs的功能,鉴定出RNAs与EVs诱导的成纤维细胞功能障碍有关。进一步的miRNA芯片分析显示,在醛固酮刺激的PTECs来源的EVs中,miR-196b-5p是升高最显著的miRNA。成纤维细胞中m... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：68 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

醛固酮组血BUN及UACR水平明显高于对照组，复合依普利酮可以明显缓解肾脏功能的损伤

重庆医科大学博士研究生学位论文图2血糖、体重、血钾水平和血压水平在各组小鼠之间无差异。Figure2Bloodglucose,bodyweight,potassiumandbloodpressuredidnotdifferbetweenthegroupsdb/db小鼠予皮下微量泵泵入醛固酮（0.4mg/kg/d）和/或通过饮水给予依普利酮（100mg/kg/d），干预6周。A-D检测小鼠血糖、体重、血钾和血压变化。Aldo：醛固酮；Epl：依普利酮。N=10。db/dbmiceweregivensubcutaneousmicropumpsofaldosterone(0.4mg/kg/d)and/oreprazone(100mg/kg/d)bydrinkingwaterfor6weeks.Changesinbloodglucose,weight,potassiumandbloodpressureweremeasuredwithA-D.Aldo:aldosterone;Epl:eplerenone.N=10.3.1.3各组小鼠肾脏HE染色、PAS染色、天狼星红染色和Massom染色的检测建模完成后，我们取肾脏组织固定后制备石蜡块，用于各组小鼠肾脏病理形态学的检测，以观察观察醛固酮的肾脏损害作用。HE染色发现Aldo组肾脏组织肾小管间质部分细胞肿胀、间质膨胀、刷状缘丢失、空泡变性、坏死小管、铸型形成和脱落等情况明显比对照组严重，复合依普利酮后损伤明显好转。PAS染色液可以看到Aldo组肾脏组织糖原沉积水平明显高于对照组，而给予依普利酮后可以明显缓解（如图3）。

重庆医科大学博士研究生学位论文图3HE染色及PAS染色观察醛固酮及依普利酮对db/db小鼠肾脏病理改变的影响（200X）Figure3HEstainingandPASstainingtoobservetheeffectofaldosteroneandeplerenoneonrenalpathologicalchangesindb/dbmice(200X)进一步通过天狼星红染色及Masson染色观察肾脏纤维化的情况。首先，通过天狼星红染色我们发现Aldo组肾脏胶原纤维沉积程度明显高于对照组，而复合了依普利酮后，胶原纤维沉积情况明显缓解。其次，通过Masson染色评估各组小鼠肾组织中胶原堆积的情况，对比发现Aldo组胶原沉积明显增加，复合依普利酮后，胶原堆积的程度明显缓解（如图4）。


本文编号：3255263