MALAT1与megalin调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究
发布时间：2021-06-30 20:11
背景和目的:骨质疏松的主要特征是是骨组织的微结构破坏,单位结构内骨量下降及骨的脆性增加。人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal cells,hBMSCs）的成骨分化对于骨骼生成十分重要,是目前骨质疏松发病机制和治疗的重点研究方向。新的证据表明,长链非编码RNA（long-noncoding RNA,lncRNA）在hBMSCs的成骨分化中发挥重要作用。MALAT1通常被认为是一种肿瘤相关lncRNA,它在间充质干细胞分化中的作用目前尚不清楚。1α,25-二羟维生素D3[1α,25-dihydroxyvitamin D3,1α,25（OH）2D3]和25-羟基维生素D3[25-hydroxyvitamin D3,25（OH）D3]可以刺激hBMSCs的成骨分化。25（OH）D3需要在细胞内由1α羟化酶（Cytochrome P450 27B1,1α-hydroxylase/CYP27B1）转化为1α,25（OH）2D3...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
体内维素D的代谢示意图
上海交通大学博士学位论文17性形式，但却是维生素D的主要存在形式，因此血清中维生素D的浓度主要以25(OH)D的浓度作为检测指标。在血液循环中，维生素D像其他类固醇激素一样，绝大部分（大约85-90%）与特殊的载体维生素D结合蛋白（DBP）紧密结合进行运输，少量（大约10-15%）与血清白蛋白松散地结合，只有极少量（少于0.03%）以游离的形式存在[63]（图2）。血清中25(OH)D的浓度大约为20-80ng/mL，而1α,25(OH)2D的浓度仅为25(OH)D的1/1000。在血清中，DBP的浓度约为所有维生素D代谢形式总浓度的20倍。因此在血清中，超过99%的维生素D以结合为复合体的形式存在[64,65]。对于1α,25(OH)2D，由于其含有一个多余的羟基，这使得其与DBP结合的亲和力仅仅是25(OH)D的1/10到1/100[66]，因此在血清中，一部分1α,25(OH)2D可以以游离的形式存在，但由于其在血清中并不是主要存在形式，其浓度也远远低于25(OH)D。图2：液循环中25(OH)D的分布示意图（引自Tsuprykov等2018）Figure2:Aschematicdrawingshowingthedistributionof25(OH)Dinthecirculatingblood.(CitedfromTsuprykovetal2018)维生素D的入胞由于血清中的25(OH)D主要以25(OH)D-DBP复合体的形式存在，其进入细胞需通过细胞膜上的受体介导进入细胞内。在肾小球上皮细胞和乳腺细胞中，25(OH)D以25(OH)D-DBP复合体的形式，由megalin特异性结合DBP，在cubilin的协助下将25(OH)D转移至细胞内。一旦进入细胞内，25(OH)D便不再结合于DBP，在CYP27B1的作用下生成1α,25(OH)2D，并进入细胞核结合VDR发挥其生物学作用。Megalin对于维生素D内吞的必要性已经有体内试验证实，megalin缺失的小鼠[67]和cubilin突变的狗[68]均表现出继发于肾脏细胞摄取25(OH)D-DBP复合体并转化为1α,25(OH)2D障碍的维
上海交通大学博士学位论文36培养箱内成骨诱导21d，每2天更换一次OM。21d后终止诱导，PBS洗涤2遍（注意动作一定轻柔），4%多聚甲醛室温下固定20min，PBS洗涤2遍，每孔加入1ml茜素红染液，染色20min后，吸走染液，PBS洗涤3遍，观察拍照。1.3.18统计分析采用GraphPad统计软件进行数据分析，每组实验数据以均数±标准差（Mean±SD）表述出来，两组间比较采用one-wayANOVA或StudentT-test进行统计学检验。*p<0.05记为有显著性差异。1.4实验结果1.4.1hBMSCs的分离和鉴定目前有很多种方法可以分离hBMSCs，例如免疫磁珠法、血细胞完全贴壁法以及密度梯度离心法等。我们采用的是密度梯度离心法（图1A）进行hBMSCs的分离，被接种于培养皿的细胞包含造血细胞和间充质细胞等。经过2-3天的培养及换液后，包括破骨细胞等在内的非粘附性造血谱系细胞在换液后被清除，从而使粘附的间充质干细胞进入快速生长期，并大量克拢图1：hBMSCs分离过程（引自Geng等2013）Figure1:IsolationofhBMSCs.(CitedfromGengetal2013)
【参考文献】：
期刊论文
[1]Two-year clinical outcome of denosumab treatment alone and in combination with teriparatide in Japanese treatment-naive postmenopausal osteoporotic women[J]. Yukio Nakamura,Takako Suzuki,Mikio Kamimura,Shota Ikegami,Kohei Murakami,Shigeharu Uchiyama,Akira Taguchi,Hiroyuki Kato. Bone Research. 2017(02)
[2]Mesenchymal stem cells: Emerging mechanisms of immunomodulation and therapy[J]. Justin D Glenn,Katharine A Whartenby. World Journal of Stem Cells. 2014(05)
[3]成骨细胞特异性转录因子Osterix对骨形成作用的分子机制（英文）[J]. 张驰. 北京大学学报(医学版). 2012(05)
[4]Mesenchymal stem cells: Molecular characteristics and clinical applications[J]. Farbod Rastegar,Deana Shenaq,Eric R Wagner,Stephanie H Kim,Russell R Reid,Hue H Luu,Rex C Haydon. World Journal of Stem Cells. 2010(04)
本文编号：3258413
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
体内维素D的代谢示意图
上海交通大学博士学位论文17性形式，但却是维生素D的主要存在形式，因此血清中维生素D的浓度主要以25(OH)D的浓度作为检测指标。在血液循环中，维生素D像其他类固醇激素一样，绝大部分（大约85-90%）与特殊的载体维生素D结合蛋白（DBP）紧密结合进行运输，少量（大约10-15%）与血清白蛋白松散地结合，只有极少量（少于0.03%）以游离的形式存在[63]（图2）。血清中25(OH)D的浓度大约为20-80ng/mL，而1α,25(OH)2D的浓度仅为25(OH)D的1/1000。在血清中，DBP的浓度约为所有维生素D代谢形式总浓度的20倍。因此在血清中，超过99%的维生素D以结合为复合体的形式存在[64,65]。对于1α,25(OH)2D，由于其含有一个多余的羟基，这使得其与DBP结合的亲和力仅仅是25(OH)D的1/10到1/100[66]，因此在血清中，一部分1α,25(OH)2D可以以游离的形式存在，但由于其在血清中并不是主要存在形式，其浓度也远远低于25(OH)D。图2：液循环中25(OH)D的分布示意图（引自Tsuprykov等2018）Figure2:Aschematicdrawingshowingthedistributionof25(OH)Dinthecirculatingblood.(CitedfromTsuprykovetal2018)维生素D的入胞由于血清中的25(OH)D主要以25(OH)D-DBP复合体的形式存在，其进入细胞需通过细胞膜上的受体介导进入细胞内。在肾小球上皮细胞和乳腺细胞中，25(OH)D以25(OH)D-DBP复合体的形式，由megalin特异性结合DBP，在cubilin的协助下将25(OH)D转移至细胞内。一旦进入细胞内，25(OH)D便不再结合于DBP，在CYP27B1的作用下生成1α,25(OH)2D，并进入细胞核结合VDR发挥其生物学作用。Megalin对于维生素D内吞的必要性已经有体内试验证实，megalin缺失的小鼠[67]和cubilin突变的狗[68]均表现出继发于肾脏细胞摄取25(OH)D-DBP复合体并转化为1α,25(OH)2D障碍的维
上海交通大学博士学位论文36培养箱内成骨诱导21d，每2天更换一次OM。21d后终止诱导，PBS洗涤2遍（注意动作一定轻柔），4%多聚甲醛室温下固定20min，PBS洗涤2遍，每孔加入1ml茜素红染液，染色20min后，吸走染液，PBS洗涤3遍，观察拍照。1.3.18统计分析采用GraphPad统计软件进行数据分析，每组实验数据以均数±标准差（Mean±SD）表述出来，两组间比较采用one-wayANOVA或StudentT-test进行统计学检验。*p<0.05记为有显著性差异。1.4实验结果1.4.1hBMSCs的分离和鉴定目前有很多种方法可以分离hBMSCs，例如免疫磁珠法、血细胞完全贴壁法以及密度梯度离心法等。我们采用的是密度梯度离心法（图1A）进行hBMSCs的分离，被接种于培养皿的细胞包含造血细胞和间充质细胞等。经过2-3天的培养及换液后，包括破骨细胞等在内的非粘附性造血谱系细胞在换液后被清除，从而使粘附的间充质干细胞进入快速生长期，并大量克拢图1：hBMSCs分离过程（引自Geng等2013）Figure1:IsolationofhBMSCs.(CitedfromGengetal2013)
【参考文献】：
期刊论文
[1]Two-year clinical outcome of denosumab treatment alone and in combination with teriparatide in Japanese treatment-naive postmenopausal osteoporotic women[J]. Yukio Nakamura,Takako Suzuki,Mikio Kamimura,Shota Ikegami,Kohei Murakami,Shigeharu Uchiyama,Akira Taguchi,Hiroyuki Kato. Bone Research. 2017(02)
[2]Mesenchymal stem cells: Emerging mechanisms of immunomodulation and therapy[J]. Justin D Glenn,Katharine A Whartenby. World Journal of Stem Cells. 2014(05)
[3]成骨细胞特异性转录因子Osterix对骨形成作用的分子机制（英文）[J]. 张驰. 北京大学学报(医学版). 2012(05)
[4]Mesenchymal stem cells: Molecular characteristics and clinical applications[J]. Farbod Rastegar,Deana Shenaq,Eric R Wagner,Stephanie H Kim,Russell R Reid,Hue H Luu,Rex C Haydon. World Journal of Stem Cells. 2010(04)
本文编号：3258413
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