益气除湿方对MG患者及EAMG大鼠血清AChR抗体和可溶性PD-L1分子的影响

发布时间：2017-04-25 09:04

  本文关键词：益气除湿方对MG患者及EAMG大鼠血清AChR抗体和可溶性PD-L1分子的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：重症肌无力(myasthenia gravis,MG)主要病变部位涉及到人体神经和肌肉接头上的乙酰胆碱的受体(acetylcholine receptor,ACh R),这种受体位于接头的突触后膜上,而起主要介导作用的是乙酰胆主要碱受体抗体(acetylcholine receptor antibody,ACh Rab),这种病变过程依赖的是细胞免疫(cell-mediated immunity,CMI),当然补体也参与这个病的这个病的产生发展过程,重症肌无力是一种常见的并且非常典型的自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)。该病在临床上表现为活动后症状严重的全身或者部分的骨胳肌的劳累甚至无力的现象,但是通过休息后肌无力的症状会缓解,甚至部分病人可以达到完全正常的暂时状态,同时该病具有傍晚较晨起后症状较更为严重的特征,即晨轻暮重的特点。重症肌无力目前是一种世界性的不容易治疗的疾病,西医方面的治疗的药物主要是激素和乙酰胆碱抑制剂,这两种药物在治疗重症肌无力的同时会出现一些的不良反应,中医药在治疗重症肌无力的过程中发现了一些疗效确切,同时又可以缓解西药不良反应的中药和治疗方法。益气除湿方是导师谭子虎教授从“治痿独取阳明”的理论出发,结合众多医家治痿学说以及在临床上积累的多年的经验,拟定的治疗重症肌无力的中药制剂,无论是在临床观察方面还在在动物实验研究中,都取得了疗效确切的结论。第一部分益气除湿方对MG患者临床疗效及血清ACh R抗体和可溶性PD-L1分子的影响目的:观察益气除湿方治疗重症肌无力的临床疗效,包括临床疗效显效率,绝对评分和相对评分,中医证候疗效,中医证候积分;观察益气除湿方对重症肌无力患者血清ACh R抗体滴度的影响;观察益气除湿方对重症肌无力患者血清可溶性PD-L1分子含量的影响,从免疫学指标判定益气除湿方对重症肌无力症状改善的机制研究。方法:观察52例符合纳入标准的重症肌无力患者,按照事先准备好的随机序列表,将受试者按1:1比例随机分配到两个组中:治疗组26例;对照组26例,完全随机设计。对照组服用强的松联合溴吡斯的明片,治疗组在对照组治疗方法上给予益气除湿方煎剂口服。治疗组、对照组全部用药及观察均为8周。所有受试患者分别于治疗前、治疗结束后进行问诊、查体及相关生化检查,填写临床观察表,进行疗效评价及安全性观察。观察治疗前后的临床疗效,绝对评分和相对评分,中医证候疗效,中医证候积分,并进行统计学分析;使用人乙酰胆碱受体抗体(ACh Rab)酶联免疫吸附测定试剂盒测定治疗前后患者血清ACh R抗体滴度,并进行统计学分析;使用人细胞程序性死亡蛋白1配体1(PDCD1LG1)酶联免疫吸附测定试剂盒血清可溶性PD-L1分子含量,并进行统计学分析。结果:益气除湿方对重症肌无力具有明显的疗效,从总的临床疗效积分变化统计:治疗组显效率96.15%,对照组显效率88.46%,二者相比较,治疗组疗效优于对照组,具有显著性差异(P0.05);从绝对评分来看,治疗后治疗组与对照组的绝对评分分别为5.54±4.12、7.71±1.78,二者相比较,治疗组疗效优于对照组,具有显著性差异(P0.05);治疗组与对照组相对评分分别为53.59±25.33、37.89±19.93,二者相比较,治疗组疗效优于对照组;从中医证候积分变化统计:治疗组有效率88.46%,对照组有效率为57.69%,两组中医证候改善情况有显著差异(P0.05),提示治疗组在中医证候改善方面明显优于对照组。研究还发现,益气除湿方治疗组有2例患者出现了轻度恶心呕吐的胃肠道的轻度的不适表现,未影响到实验的进程,未发现益气除湿方治疗组有在心电图、肝功能、肾功能、空腹血糖受损、股骨头坏死等方面的病理现象的产生;西药对照组治疗后出现轻度肝功能下降的有2个人,表现在总胆红素和转氨酶的升高,除此之外空腹血糖增高高于6.1mmol/L的有1人,经统计学分析两组之间存在于差异性,说明益气除湿方治疗组较西药对照组相比,表现出的安全性方面的指数更具有可靠性。治疗后治疗组与对照组血清ACh R抗体水平与治疗前相比显著增高,差异有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组与对照组血清可溶性PD-L1分子水平与治疗前相比降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益气除湿方联合基础西药能明显改善重症肌无力患者的临床症状,中医证候,绝对评分和相对评分,且优于单独应用基础西药治疗,同时未见无明显毒副作用。益气除湿方能降低血清ACh R抗体滴度,并优于对照组。益气除湿方与西药均能升高血清可溶性PD-L1含量,但二者无明显差异性。益气除湿方联合基础西药通过增加可溶性PD-L1的血清含量,直接影响受体/配体相互作用的PD-1/PD-L1负性共刺激信号,PD-1/PD-L1联合作用共同阻滞CD4+和CD8+T细胞的增殖以及IL-2的分泌,在细胞周期的G0/G1期细胞周期时间延长,并减少IFN-γ,IL-2和IL-10的含量,这些细胞因子的分泌减少,使得乙酰胆碱受体抗体合成减少;同时可溶性PD-L1分子可以参与血液循环,同细胞因子一样,在机体的免疫调节中发挥作用,增加可溶性PD-L1分子的含量,作为一种阻断性分子,在与表面PD-1结合单个核细胞的发生率增加,即可减少膜型PD-L1和PD-1在血管内皮细胞的细胞膜上合成的可能性,同时组织和细胞,单核细胞表面的相互作用显著性增强,同时活化T细胞获得足够强度的负控制信号,避免过量T细胞的活化增殖性,对自身抗原的免疫反应引起的持续,减少组织损伤。减少乙酰胆碱受体抗体的合成可以减少乙酰胆碱受体的抗体,抑制功能的缓慢溶解,补体介导的同时,突触后膜和突触后膜受体数量增加,从而减少重症肌无力的症状。第二部分益气除湿方对EAMG大鼠血清ACh R抗体和可溶性PD-L1分子的影响目的:制备实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠模型,通过服用益气除湿方后,观察大鼠的临床症状、血清可溶性PD-L1及ACh R抗体的含量变化,探讨重症肌无力的发病机制及益气除湿方治疗重症肌无力的作用机制,为进一步在临床上更好的运用益气除湿方提供理论基础。方法:将健康成年的雌性的Lewis大鼠40只,随机地抽取10只作为空白对照组(A组),剩余大鼠皮下注射鼠源ACh R-α亚基97-116肽段进行EAMG造模,把造模后的实验动物随机分为模型西药对照组(B组)、西药对照组(C组)、益气除湿方组(D组),每组为10只,目前4组。造模成功2周后,A组与B组给予生理盐水灌胃,C组给予强的松灌胃,D组给予益气除湿方灌胃,4周后进行Lennon症状分级的分值测定、血清ACh R抗体滴度的测定和血清可溶性PD-L1含量的检测。结果:Lennon临床评分达0.5-1级,且随着时间的延长肌无力症状愈加显著,至造模结束时临床评分在1级以上者占造模数量的75.39%;使用五赫兹连续10次的低频电刺激检测28只已造模完毕的实验大鼠,共有25只大鼠第五个肌电波的波幅比第一个肌电波的波幅降低百分之十以上,即衰减率大于或等于百分之十,平均为(19.35士3.89),其余3只大鼠的电衰减率小于百分之十,而空白对照组第五个肌电波的波幅比第一个肌电波的波幅降低均不超过百分之十;新斯的明试验阳性者为26只。EAMG大鼠血清ACh R抗体含量较健康大鼠含量高,可溶性PD-L1分子含量较健康大鼠含量低,经统计学分析,具有统计学意义(P0.05)。说明血清ACh R抗体、可溶性PD-L1分子在重症肌无力的发病中具有重要意义。益气除湿方、强的松均能改善EAMG大鼠肌无力症状,影响大鼠的体重,经统计学分析,益气除湿方明显优于强的松(P0.05)。益气除湿方组、强的松组血清ACh R抗体含量均较模型组明显降低(P0.05)。益气除湿方、强的松均能降低EAMG大鼠血清ACh R抗体浓度,益气除湿方减低血清ACh R抗体浓度的程度不及强的松(P0.05)。益气除湿方、强的松均能增加EAMG大鼠血清可溶性PD-L1分子含量,益气除湿方增加血清可溶性PD-L1分子含量的程度优于强的松(P0.05)。结论:用皮下注射鼠源性ACh R-α亚基97-116肽段可以有效制作EAMG模型,并且具有成功率高的特点。益气除湿方能提高EAMG大鼠的体重、肌力和运动能力,抑制EAMG模型大鼠血清中ACh R抗体浓度,增加血清可溶性PD-L1分子含量。益气除湿方联合基础西药通过增加可溶性PD-L1的血清含量,直接影响受体/配体相互作用的PD-1/PD-L1负性共刺激信号,PD-1/PD-L1联合作用共同阻滞CD4+和CD8+T细胞的增殖以及IL-2的分泌,在细胞周期的G0/G1期细胞周期时间延长,并减少IFN-γ,IL-2和IL-10的含量,这些细胞因子的分泌减少,使得乙酰胆碱受体抗体合成减少;同时可溶性PD-L1分子可以参与血液循环,同细胞因子一样,在机体的免疫调节中发挥作用,增加可溶性PD-L1分子的含量,作为一种阻断性分子,在与表面PD-1结合单个核细胞的发生率增加,即可减少膜型PD-L1和PD-1在血管内皮细胞的细胞膜上合成的可能性,同时组织和细胞,单核细胞表面的相互作用显著性增强,同时活化T细胞获得足够强度的负控制信号,避免过量T细胞的活化增殖性,对自身抗原的免疫反应引起的持续,减少组织损伤。减少乙酰胆碱受体抗体的合成可以减少乙酰胆碱受体的抗体,抑制功能的缓慢溶解,补体介导的同时,突触后膜和突触后膜受体数量增加,最终达到改善改善EAMG大鼠肌无力症状。
【关键词】：益气除湿方 重症肌无力 EAMG AChR抗体 可溶性PD-L1分子
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
【目录】：

• 中文摘要5-10
• ABSTRACT10-16
• 英文缩略词表16-17
• 前言17-21
• 第一部分 益气除湿方对MG患者临床疗效及血清ACh R抗体和可溶性PD-L1分子的影响21-39
• 一 病例选择21-24
• 二 研究方法24-32
• 三 统计方法32
• 四 临床资料分析32-34
• 五 实验结果34-37
• 六 结论37-39
• 第二 部分益气除湿方对E A M G大 鼠血清A C h R抗 体和可溶性PD-L1分子的影响39-55
• 一 实验目的39
• 二 实验材料39-41
• 三 实验对象41-43
• 四 实验方法43-48
• 五 统计方法48
• 六 实验结果48-53
• 七 结论53-55
• 讨论55-80
• 一 重症肌无力的发病机制55-62
• 二 中医学对重症肌无力的认识62-68
• 三 益气除湿方的方药分析及配伍特点68-72
• 四 临床研究结果及疗效分析72-75
• 五 EAMG模型制作75-77
• 六 益气除湿方对EAMG大鼠的疗效机制77-80
• 结语80-82
• 参考文献82-92
• 附录一：综述92-99
• 参考文献96-99
• 附录二：攻读学位期间发表论文99-100
• 附录三：定量重症肌无力评分QMG表100-101
• 致谢101

  本文关键词：益气除湿方对MG患者及EAMG大鼠血清AChR抗体和可溶性PD-L1分子的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：326008