成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的机制研究及在毛囊再生中的应用
发布时间：2021-07-05 10:23
目前药物治疗和自体毛囊移植这两种治疗脱发的方法不能促进新的毛囊的形成。真皮毛乳头细胞（Dermal papilla cells,DPCs）在毛囊形态发生和调节毛发循环中起着至关重要的作用,但是体外传代培养会快速丢失其诱导毛发生成的能力。所以,如何在体外获得大量具有诱导毛发再生能力的DPCs已经成为目前毛囊再生研究的热点和难点。本研究的主要目的是探究海藻酸钠的三维培养环境是否能够诱导真皮成纤维细胞向毛乳头样细胞的转化及可能的作用机制。为促进成纤维细胞的聚集,我们利用静电喷雾的方法制备包裹真皮成纤维细胞的海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸（Alginate-poly-L-lysine-alginate,APA）微球,分别通过CCK-8和RT-PCR的方法检测人真皮成纤维细胞的增殖和人毛乳头特异性基因的表达;碱性磷酸酶染色和定量及流式细胞技术的方法检测人毛乳头标记基因的蛋白表达水平。发现在一定的培养时间内APA微球具有良好的生物相容性,并且人真皮成纤维细胞的DPC标记基因在转录和蛋白水平都随着APA微球培养时间的增加而增强。为探究人毛乳头样细胞是否具有诱导毛发再生的能力,诱导产生的毛乳头样细胞和新生...
【文章来源】：湖南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
毛囊形态发生过程[14]
博士学位论文7毛发向外生长存在的问题，最早在2008年被Qiao提出[65]，即首先分离胎鼠的表皮细胞，基底面朝上移植到硅胶板上，然后将胎鼠的DP细胞置于基底面，随后将硅胶板置于裸鼠背部的皮瓣下缝合。4周后可见生长方向方向垂直于硅胶板的毛发生长，随后再次手术翻转皮瓣，可见新形成的毛发在宿主皮肤表皮存活至少12个月。Su等利用单边切口的方法改进皮瓣后，可以减少重建毛囊所需的时间[66]。这种模型相对上述两种模型不仅需要的细胞量少而且并发症低，但是新形成毛囊时间最长，并且需要进行二次手术。除以上三种常用的毛囊重建模型外，组织工程三维培养技术的发展进一步增加了在体外形成毛囊的可能性。研究报道通过旋转、两步旋转、悬浮和悬滴等方法可在体外使DP细胞发生聚集[67-69]，而且这种DP细胞的聚集状态能够诱导毛发再生。Osada等将鼠触须DP细胞种植在圆底低粘附的96孔板中使其聚集成球，并且与上皮细胞混合后能在裸鼠背部形成毛囊[70]。研究显示DP细胞在EVAL表面自发聚集形成的微球组织中DP细胞的标记基因ALP，α-SMA和NCAM与平板相比发生增加[71]，混合新生鼠表皮细胞注射到裸鼠背部可见新的毛囊的形成。虽然与普通的平板培养相比，三维（Three-dimensional，3D）培养的方法更加精确的模拟体内毛发的发育情况，但是精确控制毛囊的结构仍然需要考虑一些未知的重要步骤，任何体外模型中得到的结构必须获得体内宿主的效果验证。图1.2三种体内毛囊重建模型[14]。a，硅腔小室模型；b，皮下细胞注射模型；c，贴片植入模型。Figure1.2Threetypicalinvivomodelsforevaluatingthetrichogenesisofisolatedhairfolliclecells,includingthesiliconchamber(a),subcutaneousinjection(b),andpatchimplantation(c).
博士学位论文9图1.3真皮成纤维细胞的分类[86]。人皮肤根据沉积的细胞外基质的类型分为不同成纤维细胞亚型。例如，真皮乳头富含血小板反应蛋白，而网状成纤维细胞富含对齐的ECM纤维沉积。从皮肤中分离的成纤维细胞保持不同特性暗示了不同的起源，而随后在体外ECM沉积反映了它们最初分离的位置。Pfi，乳头状成纤维细胞；DPfi，真皮乳头成纤维细胞。Figure1.3Classificationofdermalfibroblasts.Humanskininvivohasdistinctfeaturesestablishedbythefibroblastsubtypeswithinthedermisthatcreateanddepositextracellularmatrix(ECM).Forexample,thedermalpapillaisrichinthrombospondin,whereasthereticularfibroblast(Rfi)-depositedmatrixcontainsalignedECMfibres.Fibroblastsisolatedfromtheskinmaintaindistinctidentitiesreflectingtheirorigin,andsubsequentlydepositECMinvitro,whichreflectsthelocationfromwhichtheywereinitiallyisolated.Pfi,papillaryfibroblasts;DPfi,dermalpapillafibroblasts.1.3成纤维细胞聚集和迁移的平衡纤维化、瘢痕、毛囊真皮毛乳头细胞及发育过程参与间充质聚合物形成过程中都伴随着成纤维细胞簇的形成。成纤维细胞簇的存在机制依赖于细胞外基质的特征、细胞的生长环境和细胞-细胞及细胞-基质的相互作用。研究证明细胞-细胞和细胞-亚基之间的粘连增加会促进细胞的凝聚，现有研究成纤维细胞聚集常用的模型包括离心，悬滴培养，低粘附亚基培养等。成纤维细胞在促生长因子条件下（如血清或血清脂质激动剂溶血磷脂酸）发生聚集，而在血小板衍生生长因子（Platelet-derivedgrowthfactor,PDGF）的促迁移条件下不能形成聚集，并且这种聚集和迁移的特征可通过转换生长环境来发生逆转。1.3.1不同类型的细胞聚集行?
【参考文献】：
期刊论文
[1]毛囊色素[J]. 吴磊,范卫新. 国际皮肤性病学杂志. 2006(03)
[2]微囊化人头皮毛乳头细胞诱导小鼠耳毛囊再生的研究[J]. 李宇,林常敏,蔡湘娜,李国强,黄铿. 中华整形外科杂志. 2006(02)
本文编号：3265895
【文章来源】：湖南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
毛囊形态发生过程[14]
博士学位论文7毛发向外生长存在的问题，最早在2008年被Qiao提出[65]，即首先分离胎鼠的表皮细胞，基底面朝上移植到硅胶板上，然后将胎鼠的DP细胞置于基底面，随后将硅胶板置于裸鼠背部的皮瓣下缝合。4周后可见生长方向方向垂直于硅胶板的毛发生长，随后再次手术翻转皮瓣，可见新形成的毛发在宿主皮肤表皮存活至少12个月。Su等利用单边切口的方法改进皮瓣后，可以减少重建毛囊所需的时间[66]。这种模型相对上述两种模型不仅需要的细胞量少而且并发症低，但是新形成毛囊时间最长，并且需要进行二次手术。除以上三种常用的毛囊重建模型外，组织工程三维培养技术的发展进一步增加了在体外形成毛囊的可能性。研究报道通过旋转、两步旋转、悬浮和悬滴等方法可在体外使DP细胞发生聚集[67-69]，而且这种DP细胞的聚集状态能够诱导毛发再生。Osada等将鼠触须DP细胞种植在圆底低粘附的96孔板中使其聚集成球，并且与上皮细胞混合后能在裸鼠背部形成毛囊[70]。研究显示DP细胞在EVAL表面自发聚集形成的微球组织中DP细胞的标记基因ALP，α-SMA和NCAM与平板相比发生增加[71]，混合新生鼠表皮细胞注射到裸鼠背部可见新的毛囊的形成。虽然与普通的平板培养相比，三维（Three-dimensional，3D）培养的方法更加精确的模拟体内毛发的发育情况，但是精确控制毛囊的结构仍然需要考虑一些未知的重要步骤，任何体外模型中得到的结构必须获得体内宿主的效果验证。图1.2三种体内毛囊重建模型[14]。a，硅腔小室模型；b，皮下细胞注射模型；c，贴片植入模型。Figure1.2Threetypicalinvivomodelsforevaluatingthetrichogenesisofisolatedhairfolliclecells,includingthesiliconchamber(a),subcutaneousinjection(b),andpatchimplantation(c).
博士学位论文9图1.3真皮成纤维细胞的分类[86]。人皮肤根据沉积的细胞外基质的类型分为不同成纤维细胞亚型。例如，真皮乳头富含血小板反应蛋白，而网状成纤维细胞富含对齐的ECM纤维沉积。从皮肤中分离的成纤维细胞保持不同特性暗示了不同的起源，而随后在体外ECM沉积反映了它们最初分离的位置。Pfi，乳头状成纤维细胞；DPfi，真皮乳头成纤维细胞。Figure1.3Classificationofdermalfibroblasts.Humanskininvivohasdistinctfeaturesestablishedbythefibroblastsubtypeswithinthedermisthatcreateanddepositextracellularmatrix(ECM).Forexample,thedermalpapillaisrichinthrombospondin,whereasthereticularfibroblast(Rfi)-depositedmatrixcontainsalignedECMfibres.Fibroblastsisolatedfromtheskinmaintaindistinctidentitiesreflectingtheirorigin,andsubsequentlydepositECMinvitro,whichreflectsthelocationfromwhichtheywereinitiallyisolated.Pfi,papillaryfibroblasts;DPfi,dermalpapillafibroblasts.1.3成纤维细胞聚集和迁移的平衡纤维化、瘢痕、毛囊真皮毛乳头细胞及发育过程参与间充质聚合物形成过程中都伴随着成纤维细胞簇的形成。成纤维细胞簇的存在机制依赖于细胞外基质的特征、细胞的生长环境和细胞-细胞及细胞-基质的相互作用。研究证明细胞-细胞和细胞-亚基之间的粘连增加会促进细胞的凝聚，现有研究成纤维细胞聚集常用的模型包括离心，悬滴培养，低粘附亚基培养等。成纤维细胞在促生长因子条件下（如血清或血清脂质激动剂溶血磷脂酸）发生聚集，而在血小板衍生生长因子（Platelet-derivedgrowthfactor,PDGF）的促迁移条件下不能形成聚集，并且这种聚集和迁移的特征可通过转换生长环境来发生逆转。1.3.1不同类型的细胞聚集行?
【参考文献】：
期刊论文
[1]毛囊色素[J]. 吴磊,范卫新. 国际皮肤性病学杂志. 2006(03)
[2]微囊化人头皮毛乳头细胞诱导小鼠耳毛囊再生的研究[J]. 李宇,林常敏,蔡湘娜,李国强,黄铿. 中华整形外科杂志. 2006(02)
本文编号：3265895
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