甘草甜素对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及机制RAGE参与小鼠实验性肠炎的作用及机制
发布时间：2021-07-10 07:34
背景:Gasdermin家族D蛋白（GSDMD）是炎性caspase介导的巨噬细胞焦亡和白细胞介素-1beta（IL-1β）释放的关键底物蛋白,目前对其研究主要集中于微生物引起的感染性炎症。高迁移率族蛋白B1（High mobility group box-1,HMGB1）作为一种警报素分子参与包括缺血再灌注损伤在内的多种疾病的致病过程。甘草甜素是一种天然的三萜类化合物,因其抗炎抗病毒活性被广泛应用于肝炎等疾病的临床治疗。最近有研究发现甘草甜素可以通过抑制HMGB1的表达和活性减轻缺血再灌注引起的肝脏损伤,但是具体的作用机制尚不十分清楚。目的:本课题以缺血再灌注所致的小鼠肝脏损伤为模型,探讨甘草甜素参与肝脏缺血再灌注损伤的作用及可能机制。方法与结果:1.甘草甜素减轻缺血再灌注引起的小鼠肝组织损伤建立小鼠肝脏缺血再灌注模型,缺血90分钟后恢复肝脏供血。在恢复血供6小时后,采集小鼠静脉血并检测血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量;取小鼠肝组织,将组织固定、包埋后,制成石蜡切片并进行H&E染色检测肝组织损伤情况,利用免疫组化和髓过氧化物酶活性检测中性粒细胞的浸润。2.甘草甜素减轻肝脏缺...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
甘草甜素减轻缺血再灌注引起的小鼠肝组织损伤A.血清ALT水平（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；B.血清AST水平（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；C.肝组织病理学评分（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；
华中科技大学博士学位论文36A.肝组织HMGB1免疫组化检测；B.肝组织NLRP3免疫组化检测；C.肝组织F4/80免疫荧光检测；D.F4/80细胞数统计（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）。2.1.2甘草甜素抑制肝脏缺血再灌注引起的库普否细胞焦亡。为了进一步确证库普否细胞死亡的途径，接下来提取再灌注后小鼠肝脏内的库普否细胞，置于无血清培养基中培养12小时后收集细胞上清液，利用ELISA法检测释放入上清中有活性的IL-1β的含量；同时，将细胞裂解提取蛋白，通过蛋白质免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平。如图2-2A所示，缺血再灌注引起的上清细胞因子IL-1β水平升高受到甘草甜素的抑制；这一现象在westernblot实验结果中也得到了验证，缺血再灌注能够上调IL-1βP17（其活体形式）的表达，给予甘草甜素时表达下调。如图2-2B所示，缺血再灌注能够促进caspase-1和GSDMD的激活；甘草甜素使HMGB1表达水平明显降低，同时激活的caspase-1P20和GSDMD-N30也受到抑制，它们的前体蛋白的表达则不受影响。图2-2甘草甜素抑制肝脏缺血再灌注引起的库普否细胞焦亡
华中科技大学博士学位论文37A.ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的含量（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；B.Westernblot检测细胞胞浆蛋白的表达。2.1.3甘草甜素可能通过抑制内源性HMGB1减少缺氧－复氧诱导的库普否细胞焦亡。为了阐明甘草甜素影响肝脏缺血再灌注引起的库普否细胞焦亡的分子机制，本课题建立了一种体外缺氧－复氧细胞培养模型。由于IL-1β的释放需要两个步骤：即IL-1β前体的产生和IL-1β前体的激活，本研究应用LPS对细胞进行预刺激以激活NF-κB信号转录产生大量IL-1β前体，再对细胞进行缺氧－复氧刺激。结果显示（如图2-3），只有先后进行两种信号刺激时才能在细胞培养上清中检测到具有活性的IL-1β，单独给予LPS或缺氧－复氧刺激均不能检测到激活的IL-1β的释放。图2-3体外缺氧－复氧细胞培养模型的建立A.ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的含量（mean±SE，n=6；*,P<0.05vscontrol）；B.免疫荧光检测细胞NF-κB的激活。在缺氧－复氧的基础上向细胞培养基中加入甘草甜素，如图2-4A所示，结果与体内实验相一致，甘草甜素可以降低细胞上清中IL-1β的释放和细胞内HMGB1水平，抑制IL-1β、caspase-1和GSDMD的激活（图2-4B）。并且甘草甜素含量越高，抑制
【参考文献】：
期刊论文
[1]RAGE gene three polymorphisms with Crohn’s disease susceptibility in Chinese Han population[J]. Zheng-Ting Wang,Jia-Jia Hu,Rong Fan,Jie Zhou,Jie Zhong. World Journal of Gastroenterology. 2014(09)
[2]Role of the advanced glycation end products receptor in Crohn’s disease inflammation[J]. Rachele Ciccocioppo,Alessandro Vanoli,Catherine Klersy,Venerina Imbesi,Vincenzo Boccaccio,Rachele Manca,Elena Betti,Giuseppina Cristina Cangemi,Elena Strada,Roberta Besio,Antonio Rossi,Colomba Falcone,Sandro Ardizzone,Paolo Fociani,Piergiorgio Danelli,Gino Roberto Corazza. World Journal of Gastroenterology. 2013(45)
本文编号：3275485
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
甘草甜素减轻缺血再灌注引起的小鼠肝组织损伤A.血清ALT水平（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；B.血清AST水平（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；C.肝组织病理学评分（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；
华中科技大学博士学位论文36A.肝组织HMGB1免疫组化检测；B.肝组织NLRP3免疫组化检测；C.肝组织F4/80免疫荧光检测；D.F4/80细胞数统计（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）。2.1.2甘草甜素抑制肝脏缺血再灌注引起的库普否细胞焦亡。为了进一步确证库普否细胞死亡的途径，接下来提取再灌注后小鼠肝脏内的库普否细胞，置于无血清培养基中培养12小时后收集细胞上清液，利用ELISA法检测释放入上清中有活性的IL-1β的含量；同时，将细胞裂解提取蛋白，通过蛋白质免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平。如图2-2A所示，缺血再灌注引起的上清细胞因子IL-1β水平升高受到甘草甜素的抑制；这一现象在westernblot实验结果中也得到了验证，缺血再灌注能够上调IL-1βP17（其活体形式）的表达，给予甘草甜素时表达下调。如图2-2B所示，缺血再灌注能够促进caspase-1和GSDMD的激活；甘草甜素使HMGB1表达水平明显降低，同时激活的caspase-1P20和GSDMD-N30也受到抑制，它们的前体蛋白的表达则不受影响。图2-2甘草甜素抑制肝脏缺血再灌注引起的库普否细胞焦亡
华中科技大学博士学位论文37A.ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的含量（mean±SE，n=6；*,P<0.05vsshamcontrol.**,P<0.05vsI/R）；B.Westernblot检测细胞胞浆蛋白的表达。2.1.3甘草甜素可能通过抑制内源性HMGB1减少缺氧－复氧诱导的库普否细胞焦亡。为了阐明甘草甜素影响肝脏缺血再灌注引起的库普否细胞焦亡的分子机制，本课题建立了一种体外缺氧－复氧细胞培养模型。由于IL-1β的释放需要两个步骤：即IL-1β前体的产生和IL-1β前体的激活，本研究应用LPS对细胞进行预刺激以激活NF-κB信号转录产生大量IL-1β前体，再对细胞进行缺氧－复氧刺激。结果显示（如图2-3），只有先后进行两种信号刺激时才能在细胞培养上清中检测到具有活性的IL-1β，单独给予LPS或缺氧－复氧刺激均不能检测到激活的IL-1β的释放。图2-3体外缺氧－复氧细胞培养模型的建立A.ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的含量（mean±SE，n=6；*,P<0.05vscontrol）；B.免疫荧光检测细胞NF-κB的激活。在缺氧－复氧的基础上向细胞培养基中加入甘草甜素，如图2-4A所示，结果与体内实验相一致，甘草甜素可以降低细胞上清中IL-1β的释放和细胞内HMGB1水平，抑制IL-1β、caspase-1和GSDMD的激活（图2-4B）。并且甘草甜素含量越高，抑制
【参考文献】：
期刊论文
[1]RAGE gene three polymorphisms with Crohn’s disease susceptibility in Chinese Han population[J]. Zheng-Ting Wang,Jia-Jia Hu,Rong Fan,Jie Zhou,Jie Zhong. World Journal of Gastroenterology. 2014(09)
[2]Role of the advanced glycation end products receptor in Crohn’s disease inflammation[J]. Rachele Ciccocioppo,Alessandro Vanoli,Catherine Klersy,Venerina Imbesi,Vincenzo Boccaccio,Rachele Manca,Elena Betti,Giuseppina Cristina Cangemi,Elena Strada,Roberta Besio,Antonio Rossi,Colomba Falcone,Sandro Ardizzone,Paolo Fociani,Piergiorgio Danelli,Gino Roberto Corazza. World Journal of Gastroenterology. 2013(45)
本文编号：3275485
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