LAT2调控胰腺癌化疗耐药的功能与机制研究

发布时间：2021-07-21 12:23

　　研究背景胰腺癌恶性程度高,预后极差,化疗耐药是限制胰腺癌患者预后的主要因素之一,因此深入研究介导胰腺癌化疗耐药的分子机制并寻找潜在的化疗联合治疗靶点对于改善胰腺癌患者预后具有重要的意义。近年来随着对肿瘤能量代谢以及肿瘤微环境的研究不断深入,能量代谢重编程逐渐成为恶性肿瘤发生发展以及化疗耐药调控的重要机制之一。研究表明氨基酸转运体可以作为氨基酸感受器参与雷帕霉素机制性靶点（Mechanistic target of rapamycin,mTOR）的募集和活化,而mTOR对于正常细胞和肿瘤细胞的增殖均至关重要。L型氨基酸转运体 2（L-type amino acid transporter 2,LAT2）由 SLC7A8 基因编码,是一种Na+非依赖性中性氨基酸转运体,主要负责转运包括谷氨酰胺在内的中性氨基酸。课题组前期通过高通量测序技术和生物信息学分析,构建了胰腺癌吉西他滨化疗耐药相关的lncRNA-miRNA-mRNA调控网络,其中LAT2在该调控网络中的下游参与调控胰腺癌化疗耐药。研究目的检测LAT2在胰腺癌组织中的表达并评估其临床意义;明确LAT2对胰腺癌细胞增殖、凋亡、化疗敏感性... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：136 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
前言
材料与方法
    实验材料
        1.组织病理标本
        2.免疫组化相关试剂及设备
        3.细胞株及培养条件
        4.细胞培养用品
        5.    CCK-8法检测所需的仪器和试剂
        6.细胞凋亡检测所需的仪器和试剂
        7.药物及配置
        8.    s?NA设计合成
        9.    LAT2过表达载体构建试剂
        10.稳定过表达LAT2的逆转录病毒载体的相关试剂和材料
        11. Western blot检测蛋白表达水平所需试剂及耗材
        12.免疫共沉淀所需试剂及伩器
        13.免疫荧光所需试剂、仪器及耗材
        14.能量代谢平台检测所需试剂和仪器
        15.    UHPLC-MS/MS靶标代谢组学检测所需试剂和仪器
        16.动物实验相关实验材料
    实验方法
结果
    第一部分: LAT2在胰腺癌组织中的表达及临床意义
        1.胰腺癌组织LAT2表达水平检测
        2.胰腺癌组织中LAT2表达水平与临床病理参数的相关性分析
        3.胰腺癌组织LAT2表达水平与胰腺癌患者预后的相关性单因素分析
        4.胰腺癌组织中LAT2表达水平与胰腺癌患者预后的相关性多因素分析
    第二部分: LAT2对胰腺癌细胞代谢和生物学行为的调控作用
        1.    LAT2在胰腺癌细胞株中的表达情况及工具细胞株的选择
        2.    LAT2对胰腺癌细胞增殖的影响
        3. LAT2对胰腺癌细胞凋亡的影响
        4. LAT2对胰腺癌化疗敏感性的影响
        5. LAT2对胰腺癌糖酵解的调控作用
        6. LAT2对胰腺癌细胞代谢表型的影响
        7.    LAT2对胰腺癌细胞谷氨酰胺代谢的调控作用
        8.    LAT2对胰腺癌糖酵解和谷氨酰胺代谢相关酶的调控作用
    第三部分: LAT2调控胰腺癌代谢和化疗耐药的机制研究
        1. LAT2通过激活mTOR通路调控LDHB的表达
        2. LAT2通过激活mTOR通路诱导胰腺癌细胞化疗耐药
        3. LAT2通过激活mTOR通路促进胰腺癌细胞糖酵解的发生
        4. LAT2通过激活mTOR通路调控胰腺癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢
        5.胰腺癌组织LDHB表达水平检测及其临床意义
        6. LAT2通过依赖谷氨酰胺的mTOR通路活化调控胰腺癌细胞代谢和化疗耐药
        7.外源性谷氨酰胺可以激活mTOR信号通路
        8.谷氨酰胺参与调控LAT2与p-mTOR的相互作用
        9.    LAT2通过激活mTOR通路调控糖酵解和谷氨酰胺代谢依赖于外源性谷氨酰胺的存在
        10. LAT2通过激活mTOR通路促进细胞内谷氨酰胺合成
        11.裸鼠移植瘤标本免疫组化检测
        12.    LAT2通过调控胰腺癌谷氨酰胺代谢和和糖酵解诱导化疗耐药的机制
    第四部分: 靶向LAT2下游通路对胰腺癌的治疗作用
        1.KPC小鼠基因型鉴定
        2. KPC小鼠胰腺癌成瘤前后外周血PBMC成分比例变化
        3. KPC小鼠胰腺肿瘤HE染色和免疫组化
        4.小动物彩超监测KPC小鼠胰腺癌生长情况
        5. mTOR抑制剂联合吉西他滨或PD-Ll单抗对KPC小鼠胰腺癌的治疗效果
        6. mTOR抑制剂联合吉西他滨或PD-Ll单抗对KPC小鼠胰腺癌治疗作用的机制初步探索
讨论
结论
参考文献
文献综述
    References
攻读学位期间取得的研究成果及奖励
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Novel therapeutic approaches targeting L-type amino acid transporters for cancer treatment[J]. Keitaro Hayashi,Naohiko Anzai.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2017(01)
[2]Viro-immune therapy:A new strategy for treatment of pancreatic cancer[J]. Andrea Marie Ibrahim,Yao-he Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)
[3]Immunotherapy for pancreatic ductal adenocarcinoma: an overview of clinical trials[J]. Alessandro Paniccia,Justin Merkow,Barish H.Edil,Yuwen Zhu.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(04)

博士论文
[1]长链非编码RNA GSTM3TV2调控胰腺癌化疗耐药的功能与机制研究[D]. 熊光冰.北京协和医学院 2017

硕士论文
[1]RB-P53调控网络在乳腺癌进展和转移中的调控机制[D]. 冯梦宇.华中科技大学 2016



本文编号：3295014