长链非编码RNA HOTAIR通过上调Rab35表达并增强SNAP23磷酸化活性促进肝癌细胞外泌体释放的机制研究

发布时间：2021-07-22 03:20

　　目的:肝细胞肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一。肝癌细胞在发生发展过程中与肿瘤微环境间存在着广泛的信息和物质交流。近几年研究发现,肿瘤细胞能够在发生、发展过程中向微环境释放大量的直径为30-150nm的微小囊泡,这种囊泡被称为外泌体（exosome）。外泌体具有双层膜结构,能够稳定地携带蛋白质、RNA等物质参与肿瘤细胞间信息的传递。研究证实,肿瘤细胞分泌的外泌体能够广泛的参与肿瘤细胞转移前微环境的改造、肿瘤细胞耐药机制过程以及介导肿瘤细胞与基质细胞间代谢偶联的反应。因此,外泌体在肿瘤细胞中的研究受到了诸多学者的关注。但目前关于肿瘤细胞外泌体释放的过程尚未完全揭示,本研究聚焦于肝癌细胞内外泌体释放的分子机制研究。长链非编码RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA,通常不具备码蛋白质的功能。LncRNA在肿瘤形成中的调控作用越来越受到重视,但是在肝癌细胞中lncRNA对外泌体释放过程的调控机制尚有待探索。近几年研究发现,HOX转录反义RNA（HOTAIR）作为一种促癌基因能够参与多种肿瘤的发生发展。我们在前期的研究证实,HOT... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．?Ａ．ＴＣＧＡ肝癌组织?

以空载质粒ｐｃＤＮＡ３．１为对照组，利用外泌体提取试剂盒（ｅｘｏＥａｓｙ）分别??提取过表达ＨＯＴＡＩＲ肝癌细胞上清中的外泌体和对照组细胞上清中的外泌体。采??用透射电子显微镜观察到上清提取中的外泌体形态（图３Ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测提??取外泌体中表达外泌体标志物ＣＤ６３和ＴｓｇｌＯｌ?（图３Ｂ）。利用纳米颗粒跟踪技术分??析（Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ?ｔｒａｃｋｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ，ＮＴＡ）提取囊泡直径峰度，，结果显示我们所提取??的细胞外囊泡符合外泌体直径范围（图３０。通过计算外泌体释放囊泡数量，结??果显示ＨＯＴＡＩＲ能够显著促进肝癌细胞外泌体分泌（图３Ｄ）。??１１??

图１．?Ａ．＿Ｓ哀光＿系的，毫ＳＮＡＰ２３，?ＤＡＰＩ篮染的的是细胞核；Ｂ．綠色荧光Ｓ录的是ＳＮＡＰ２３，??红色毅光＆琦的是ＶＡＰＭ３的分布情況。??３．２?ＨＯＴＡＩＲ促进ＳＮＡＰ２３磷酸化并激活ｍＴＯＲ通路??为进一步探宄ＨＯＴＡＩＲ调控ＭＶＢ与细胞膜融合的分子机制，我们利用??Ｐｈｏｓ－ｔａｇ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ磷酸化蛋＆凝胶电泳实验检测ＨＯＴＡＩＲ对ＳＮＡＰ２３磷酸化水??乎的影响。结果显示，过表达ＨＯＴＡＩＲ能够Ｍ著促进了?ＳＮＡＰ２３磷酸化水平的??表达，Ｐ－ＳＮＡＰ２３／ＳＮＡＰ２３比例明显增加（图２ＡＬ有研究显示，ＩｎｃＲＮＡＨＯＴＡＩＲ??３２??


本文编号：3296331