环状RNA circ-RanGAP1对胃癌侵袭迁移的影响及机制研究
发布时间：2021-07-25 19:19
目的:胃癌（Gastric cancer,GC）是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一,肿瘤的侵袭转移是导致当前胃癌治疗失败的主要原因。近年来的研究表明,环状RNA（circRNA）在肿瘤的发生和发展过程中起着十分重要的表观遗传学调控作用。然而,circRNA在GC侵袭转移中的作用及其机制尚未完全阐明。本课题通过circRNA表达谱芯片鉴定、RT-qPCR方法验证胃癌组织及血清外泌体中差异表达的circRNA;通过体内外实验研究circRNA对胃癌增殖、侵袭和迁移等细胞生物学行为的影响;并进一步阐明circRNA在胃癌侵袭转移中的作用机制,为基于circRNA的胃癌靶向治疗提供新的理论依据和实验基础。此外,胃癌的准确分期是提高肿瘤治疗效果的重要前提,贯穿于临床诊疗全程,但是当前TNM分期仍存在缺陷。因此,在最后部分,本课题回归临床,揭示circRNA对胃癌患者预后和TNM分期系统的影响,为胃癌个体化治疗和随访提供新的思路和视角。方法:1.采用RNA表达谱芯片鉴定胃癌组织及其对应癌旁组织,胃癌患者术前血清及健康志愿者血清中共同差异表达的circRNA。2.采用RT-qPCR方法验证,根据RT...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
circRNA生物学功能模式图(引自：AmJCancerRes.20181;8(10):1919-1932.)
223)VolcanoPlot火山图分析根据表达谱芯片筛选出差异表达的circRNA，绘制散点图(图1.2D)，红色区域代表的circRNA差异倍数超过1.2倍，且有差异统计学意义（p＜0.05）。图1.2A.血清外泌体电镜下形态；B.Westernblot检测胃癌病人术前（左）及健康志愿者（右）血清外泌体标志物CD9和CD81；C.胃癌病人术前及健康志愿者血清外泌体circRNA微阵列（ArraystarHumancircRNAArrayv2）分析，得到的circRNA差异表达谱（差异倍数差异≥1.2，p<0.05；T1-5表示5例胃癌病人术前血清样本，C1-5表示健
362.3结果2.3.1circ-RanGAP1（hsa_circ_0063526）的特征分析通过circBase数据库，我们发现hsa_circ_0063526位于染色体22q13.2，由宿主基因RanGAP1的第1、8、10号外显子及第1、2、4、5、6号内含子环化形成，因此我们将其命名为circ-RanGAP1（图2.1A）。接下来，我们通过荧光原位杂交技术(fluorescenceinsituhybridization,FISH)（图2.1B），发现circ-RanGAP1主要定位于细胞质；以及通过细胞核质分离，抽提RNA，RT-qPCR检测circ-RanGAP1的表达情况，同样发现circ-RanGAP1主要分布在细胞质（图2.1C）。随后，我们采用放线菌素D处理细胞抑制RNA转录，然后在不同时间点提取细胞RNA，RT-qPCR检测circ-RanGAP1的表达情况，我们发现circ-RanGAP1在24小时内表达量变化不明显，说明其具有较高的稳定性（图2.1D）,同时我们利用核糖核酸酶（RNase）处理细胞，发现其不能被降解（图2.1E）。上述结果均提示，circ-RanGAP1符合环状RNA的特性。图2.1A.circ-RanGAP1的在circBase数据库中的基本信息；B.FISH实验显示circ-RanGAP1定位于细胞质；C.核质分离实验同样发现circ-RanGAP1定位于细胞质；D.放线菌素D实验检测circ-RanGAP1的稳定性；E.核糖核酸酶（RNase）处理后，circ-RanGAP1的稳定性分析。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Circular RNA hsacirc0000745 may serve as a diagnostic marker for gastric cancer[J]. Mei Huang,Yi-Ren He,Li-Chuan Liang,Qiang Huang,Zhi-Qiang Zhu. World Journal of Gastroenterology. 2017(34)
[2]Incidence and mortality of gastric cancer in China[J]. Ling Yang,National Office for Cancer Prevention and Control,Beijing 100021,China. World Journal of Gastroenterology. 2006(01)
本文编号：3302618
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
circRNA生物学功能模式图(引自：AmJCancerRes.20181;8(10):1919-1932.)
223)VolcanoPlot火山图分析根据表达谱芯片筛选出差异表达的circRNA，绘制散点图(图1.2D)，红色区域代表的circRNA差异倍数超过1.2倍，且有差异统计学意义（p＜0.05）。图1.2A.血清外泌体电镜下形态；B.Westernblot检测胃癌病人术前（左）及健康志愿者（右）血清外泌体标志物CD9和CD81；C.胃癌病人术前及健康志愿者血清外泌体circRNA微阵列（ArraystarHumancircRNAArrayv2）分析，得到的circRNA差异表达谱（差异倍数差异≥1.2，p<0.05；T1-5表示5例胃癌病人术前血清样本，C1-5表示健
362.3结果2.3.1circ-RanGAP1（hsa_circ_0063526）的特征分析通过circBase数据库，我们发现hsa_circ_0063526位于染色体22q13.2，由宿主基因RanGAP1的第1、8、10号外显子及第1、2、4、5、6号内含子环化形成，因此我们将其命名为circ-RanGAP1（图2.1A）。接下来，我们通过荧光原位杂交技术(fluorescenceinsituhybridization,FISH)（图2.1B），发现circ-RanGAP1主要定位于细胞质；以及通过细胞核质分离，抽提RNA，RT-qPCR检测circ-RanGAP1的表达情况，同样发现circ-RanGAP1主要分布在细胞质（图2.1C）。随后，我们采用放线菌素D处理细胞抑制RNA转录，然后在不同时间点提取细胞RNA，RT-qPCR检测circ-RanGAP1的表达情况，我们发现circ-RanGAP1在24小时内表达量变化不明显，说明其具有较高的稳定性（图2.1D）,同时我们利用核糖核酸酶（RNase）处理细胞，发现其不能被降解（图2.1E）。上述结果均提示，circ-RanGAP1符合环状RNA的特性。图2.1A.circ-RanGAP1的在circBase数据库中的基本信息；B.FISH实验显示circ-RanGAP1定位于细胞质；C.核质分离实验同样发现circ-RanGAP1定位于细胞质；D.放线菌素D实验检测circ-RanGAP1的稳定性；E.核糖核酸酶（RNase）处理后，circ-RanGAP1的稳定性分析。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Circular RNA hsacirc0000745 may serve as a diagnostic marker for gastric cancer[J]. Mei Huang,Yi-Ren He,Li-Chuan Liang,Qiang Huang,Zhi-Qiang Zhu. World Journal of Gastroenterology. 2017(34)
[2]Incidence and mortality of gastric cancer in China[J]. Ling Yang,National Office for Cancer Prevention and Control,Beijing 100021,China. World Journal of Gastroenterology. 2006(01)
本文编号：3302618
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3302618.html
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