TLR4在大鼠蛛网膜下腔出血早期脑损伤中的机制作用研究及纳洛酮的抗炎及神经保护作用
发布时间：2021-07-25 20:38
研究背景:蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）是一种具有高死亡率和高致残率的脑血管疾病,也是神经外科常见的危急重症,发病后往往具有毁灭性后果。尽管SAH仅占所有卒中的5%-10%,但由于其高死亡率,高致残率和临床预后差的特点给社会带来了沉重负担。尽管研究者们对SAH进行了数十年的研究,但它仍是一个全球性的严重威胁生命健康的问题。迄今为止,SAH造成脑损伤的潜在机制仍不清楚。目前对SAH机制的研究主要集中在早期脑损伤（early brain injury,EBI）和延迟性脑损伤（delayed brain injury,DBI）。但随着针对DBI临床研究的失败,研究人员已开始将研究重点转向EBI。EBI是指颅内血管破裂出血后,72小时以内脑组织所出现的一系列病理生理性事件,是一个非常复杂的病理生理过程,所涉及的分子机制也是多种多样,其中神经炎症被认为是造成早期脑损伤的一个重要分子机制。研究证明TLR4介导的神经炎症在SAH后早期脑损伤阶段发挥着重要作用。TLR4可通过与两个调节促炎因子基因表达的不同衔接蛋白（My D88和TRIF）相互作用,从而激活两...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
蛛网膜下腔出血后TLR4信号通路概述Figure2.1.OverviewofToll-likereceptor-4signalingpathwayafterSAH.EndogenousligandrecognitionisfacilitatedbyTLR4withtheassistanceofCD14andMD-2,whichleadstotherecruitmentofvariousadaptorproteinslikeTRAM/TRIFandTIRAP/MyD88
20carotidartery,CCA)、颈内动脉(internalcarotidartery，ICA)和颈外动脉(externalcarotidartery，ECA)结构。镜下小心游离ECA，在距离“Y”形分叉口5mm处电凝烧灼并离断ECA，接着用临时动脉阻断夹夹闭CCA，轻拉ECA使之与ICA成一直线，用显微剪在ECA残端剪开一“V”形小口，迅速将准备好的5cm长的3-0单丝尼龙线(前端切成斜面，并在距离前端20mm处标记)从破口处插入颈内动脉防止逆流血液外溢污染视野，轻轻推送尼龙线进入约20mm深度时可感受到轻微阻力，此时继续推入1~2mm，有落空感提示尼龙线尖端刺破大脑前动脉及大脑中动脉分叉处动脉壁,留置3~5s后迅速拔出尼龙线。同时，结扎ECA破口并撤去临时动脉阻断夹，可见动物呼吸骤然停顿后出现急促样呼吸，提示造模成功。给大鼠缝合创口后用碘伏再次消毒，并将动物放入37℃恒温箱内至麻醉苏醒。图3.1蛛网膜下腔出血血管穿孔模型Figure3.1EndovascularperforationforSAHmodel3.3.7RT-qPCR3.3.7.1RNA提取1）各组取15-20mg脑组织，液氮冷冻后用研磨杵研磨成粉末，将粉末转移至离心管中，每10mg左右的组织加0.3ml的BB4（每1mlBB4，加10μlβ-巯基乙醇，现用现配）和15μlProteinaseK，混匀后56℃处理10-20分钟。2）室温12000r/min离心5分钟，吸上清于一RNase-free的离心管中。
C），从而证实结果是可靠的，并且可以应用于后续分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll-like receptor 4 as a possible therapeutic target for delayed brain injuries after aneurysmal subarachnoid hemorrhage[J]. Takeshi Okada,Hidenori Suzuki. Neural Regeneration Research. 2017(02)
[2]Tenascin-C in aneurysmal subarachnoid hemorrhage: deleterious or protective?[J]. Hidenori Suzuki,Fumihiro Kawakita. Neural Regeneration Research. 2016(02)
本文编号：3302737
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
蛛网膜下腔出血后TLR4信号通路概述Figure2.1.OverviewofToll-likereceptor-4signalingpathwayafterSAH.EndogenousligandrecognitionisfacilitatedbyTLR4withtheassistanceofCD14andMD-2,whichleadstotherecruitmentofvariousadaptorproteinslikeTRAM/TRIFandTIRAP/MyD88
20carotidartery,CCA)、颈内动脉(internalcarotidartery，ICA)和颈外动脉(externalcarotidartery，ECA)结构。镜下小心游离ECA，在距离“Y”形分叉口5mm处电凝烧灼并离断ECA，接着用临时动脉阻断夹夹闭CCA，轻拉ECA使之与ICA成一直线，用显微剪在ECA残端剪开一“V”形小口，迅速将准备好的5cm长的3-0单丝尼龙线(前端切成斜面，并在距离前端20mm处标记)从破口处插入颈内动脉防止逆流血液外溢污染视野，轻轻推送尼龙线进入约20mm深度时可感受到轻微阻力，此时继续推入1~2mm，有落空感提示尼龙线尖端刺破大脑前动脉及大脑中动脉分叉处动脉壁,留置3~5s后迅速拔出尼龙线。同时，结扎ECA破口并撤去临时动脉阻断夹，可见动物呼吸骤然停顿后出现急促样呼吸，提示造模成功。给大鼠缝合创口后用碘伏再次消毒，并将动物放入37℃恒温箱内至麻醉苏醒。图3.1蛛网膜下腔出血血管穿孔模型Figure3.1EndovascularperforationforSAHmodel3.3.7RT-qPCR3.3.7.1RNA提取1）各组取15-20mg脑组织，液氮冷冻后用研磨杵研磨成粉末，将粉末转移至离心管中，每10mg左右的组织加0.3ml的BB4（每1mlBB4，加10μlβ-巯基乙醇，现用现配）和15μlProteinaseK，混匀后56℃处理10-20分钟。2）室温12000r/min离心5分钟，吸上清于一RNase-free的离心管中。
C），从而证实结果是可靠的，并且可以应用于后续分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll-like receptor 4 as a possible therapeutic target for delayed brain injuries after aneurysmal subarachnoid hemorrhage[J]. Takeshi Okada,Hidenori Suzuki. Neural Regeneration Research. 2017(02)
[2]Tenascin-C in aneurysmal subarachnoid hemorrhage: deleterious or protective?[J]. Hidenori Suzuki,Fumihiro Kawakita. Neural Regeneration Research. 2016(02)
本文编号：3302737
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3302737.html
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