基于母子细胞系及其酶消化的胎儿染色体非整倍体无创产前检测游离DNA参考物质的研究

发布时间：2021-07-25 20:59

　　1997年,香港中文大学卢煜明教授在孕妇血浆中发现存在胎儿游离DNA,随着新一代高通量测序（next-generation sequencing,NGS）的出现及成熟,基于血浆游离DNA（cell-free DNA,cfDNA）的胎儿染色体非整倍体无创产前检测（noninvasive prenatal testing,NIPT）成为可能。目前临床上最常用的基于NGS的NIPT方法主要有全基因组大规模平行测序（random massively parallel sequencing,MPS）和靶向测序。NIPT技术创伤性小、无流产风险,且与传统产前检测手段相比检测准确性显著提高。然而由于孕妇血浆中胎儿游离DNA 比例极低,针对其染色体微小差异的比较对检测方法的准确性要求很高,且NIPT流程复杂,不同环节中出现的各种因素,如游离DNA提取、文库制备及GC偏倚纠正等均可导致不同实验室间检测结果的不一致。因此,无创产前检测迫切需要标准化,而制备出接近真实样本的参考物质是进行临床实验室无创产前检测质量保证和实现标准化的关键。国内外现有的无创产前检测参考物质包括天然母体血浆样本和片段化人基因组DN... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：153 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２?ｐＥＴ－１５ｂ载体图谱??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＥＴ－１５ｂ??１．２实验方法??

图３?Ｑｕｂｉｔ?３．０简明操作流程??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｑｕｉｃｋ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ?ｆｏｒ?Ｑｕｂｉｔ?３．０??Ｄ．开启焚光计开关，点击“ｄｓＤＮＡ”选项，再点击“Ｈｉｇｈ?Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ”选项屏幕进入检测页面，打开检测孔盖，首先检测标准品管，将Ｓ１管插入检孔，点击“Ｒｅａｄ?Ｓｔａｎｄａｒｄ?１”选项，测得数据后将Ｓ１管取出，再置入Ｓ２管，??点击“Ｒｅａｄ?Ｓｔａｎｄａｒｄ?２”选项，测出数据后焚光计将自动在屏幕上绘制出条标准曲线；??Ｅ．然后将待测样本管依次插入检测孔中，点击“Ｒｕｎ?Ｓａｍｐｌｅｓ”选项，通过击屏幕上的“＋／－”选项进行待测样本体积的选择，再选择相应所显示的度单位，点击“ｒｅａｄ?ｔｕｂｅｓ”选项进行各个样本的检测，读取所检测浓度并记录。??．５．２电泳验证ＤＦＦ消化产物??琼脂糖凝胶电泳验证Ｄ－ｃｆＤＮＡ??一

５９５ｎｎｉ处的吸光度值绘制标准曲线，经计算得到该标准曲线的方程为：ｙ?＝?０．０１７８６?＋??０．０６９８３ｘ（炉＝０．９９１９７），再利用该标准曲线计算出ＤＦＦ蛋白的浓度为０．５８５?ｎｉｇ／ｍＬ。??结果如表９和图６所示。??表９?ＢＳＡ标准品和待测样本的体积、蛋白量及ＯＤ５９５值对照表??Ｔａｂｌｅ?９．?Ｌｉｓｔ?ｏｆ?ｖｏｌｕｍｅｓ，?ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ?ａｎｄ?ＯＤ５９５?ｆｏｒ?ＢＳＡ?ｓｔａｎｄａｒｄｓ?ａｎｄ?ｓａｍｐｌｅｓ??ＳＩ?Ｓ２?Ｓ３?Ｓ４?Ｓ５?Ｓ６?待测样本??体积（ｐＬ）?０?２?４?６?８?１０?６??ＰＢＳ?（ｐＬ）?３０?２８?２６?２４?２２?２０?２４??稀释后蛋白浓??０．０００?０．０６７?０．１３３?０．２００?０．２６７?０．３３３?０．１１７??度（ｍｇ／ｍＬ）??原始样本浓度??１．０００?１．０００?１．０００?１．０００?１．０００?１．０００?０．５８５??（ｍｇ／ｍＬ）??－５４－??


本文编号：3302768