SOX4通过调节microRNAs促进前列腺癌进展的研究
发布时间：2021-07-27 04:42
前列腺癌是我国常见的男性生殖系统肿瘤,且近年来发病率快速增长。前列腺癌具有高度异质性和激素敏感性。尽管人们尚未完全阐明前列腺癌的发生机制,研究者已普遍接受高级别上皮内瘤变（high-grade prostatic intraepithelial neoplasia,HGPIN）是前列腺癌癌前病变的观点。HGPIN→隐匿癌→临床癌→转移可能是大多数前列腺癌的进展模式。临床癌的进展顺序为局限于前列腺内→侵犯并突破前列腺包膜→侵犯精囊腺→转移至邻近区域淋巴结→转移至骨骼（最多见）和其他脏器。针对局限性前列腺癌（localized prostate cancer）,临床上主要以手术治疗为主。雄激素剥夺治疗（androgen deprivation therapy,ADT）是进展期前列腺癌（advanced prostate cancer）的主要治疗手段,但大多数患者经过1～3年的治疗后出现复发,逐渐发展为去势抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer,CRPC）。随着新一代抗雄药物如阿比特龙或恩杂鲁胺的使用,一部分晚期前列腺癌患者易发生激素治疗诱发...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：181 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．前列腺癌恶性转变过程示意图［６］
ｌｕｔａｍｉｄｅ，?ａｂｉｒａｔｅｒｃｘｉｅ，Ｒａｄｉｕｍ??？?Ａｐａｌｕｔａｍｉｄｅ?２２３，?Ｚｏｔｅｄｒｏｎｉｃ?ａｃｉｄ，?Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ．??Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ，?ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ４，?ａｎｔｉ－ＰＤ１??Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ??—?一?Ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ?—??．?Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ?．?Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ??肩一＾?亦＃１?ＥＴ－１．ＴＧｆ＾．??ＩＧＦｓ．?ＦＧＦｓ．??，ＰＤＧＦｓ．?ＢＭＰｓ??ＲＡＮＫＬ，?ＰＴＨ??图２．前列腺癌演进中重要基因改变的示意图［１２Ｊ??为了进一步识别和研究在前列腺癌发生和进展中可能发挥驱动作用的肿瘤相??关基因，本课题组通过对ＴＣＧＡ及ＧＥＯ数据库进行深入分析和挖掘，从中筛选出??若干个可能与前列腺癌进展和预后相关的差异基因，包括前期工作中所涉及到的??Ｓ０Ｘ４、ＰＡＤＩ２、ＴＸＮＤＣ９、ＴＸＮＤＣ２、ＣＵＬ４Ｂ、ＢＴＦ３?和?ＫＩＦ１５?等。??Ｓ０Ｘ４?（ｓｅｘ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎＹ－ｂｏｘ４）基因是?ＳＯＸ?家族成员之一，翻译合成??约４７ｋＤａ的蛋白质，其中含一个高度保守的高迀移率族ＤＮＡ结合域，是参与发育??相关的转录因子［１３］。前期研究发现ＳＯＸ４被认为是６４个“肿瘤特征”基因之一，??Ｓ０Ｘ４在在多种肿瘤组织例如膀胱癌、肝癌、前列腺癌和急性粒细胞白血病等中表??达上调［１３，?１４ＬＳＯＸ４是最常见的逆转录病毒整合位点之一，导致ｍＲＮＡ增加［１５］。??研宄报道ＳＯＸ４参与多种信号通路途径如Ｗｎｔ、ＴＧＦｐｌ、ＴＰ５３和ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ信号??通路等，在调节肿瘤进展中发挥重要作用。??本课题
列腺癌小鼠肿瘤中表达上调［４２］；另外，成??年前列腺上皮中ＳＯＸ４基因特异性缺失可以强烈抑制ＰＴＥＮ缺失引发的肿瘤进展??［４３］。然而，ＳＯＸ４在动物体内移植瘤中的作用暂无报道。为了进一步研究ＳＯＸ４??在体内对前列腺癌细胞的作用，我们进行裸鼠皮下成瘤实验。??１．１．选取并构建细胞模型??我们首先检测了?ＳＯＸ４在前列腺癌细胞系中的表达水平，从而确定合适的细??胞系进行研究实验。结果显示，ＳＯＸ４在ＶＣａＰ和ＬＮＣａＰ细胞中表达较高，而在??ＰＣ３和ＤＵ１４５细胞中表达较低（图１Ａ）。因此，我们选择ＶＣａＰ和ＬＮＣａＰ细胞??进行ＳＯＸ４沉默表达，而ＰＣ３和ＤＵ１４５细胞进行ＳＯＸ４过表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检??测转染效率，ＧＡＰＤＨ作为内参，如图所示（图１Ｂ）。ＳＯＸ４表达水平在ＶＣａＰ细??胞中最高，因此选用ＶＣａＰ细胞进行慢病毒转染沉默ＳＯＸ４表达水平（图１Ｃ）。??Ａ?Ｂ?Ｃ??．Ｖ?＾?＾?ｓｈＮＣ?ｓｈＳＯＸ４??一。／／／／?Ｈｆｆｎ??ＳＯＸ４?一—馨》鲁?５０Ｘ４?？輪一—猶—??ＧＡＰＤＨ?ＧＡＰＤＨ?＿雜＿雜??ＰＣ３?ＤＵ１４５?ＶＣａＰ?２２ＲＶ１?ＬＮＣａＰ????????ｖｃａＰ?ＬＮＣａＰ?ＰＣ３?ＤＵ１４５??图１．?ＳＯＸ４沉默及过表达效率检测。（Ａ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测Ｓ０Ｘ４在各前列腺癌细胞系中的表达水平。??（Ｂ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测各细胞系中的Ｓ０Ｘ４沉默及过表达效率。（Ｃ）?ＶＣａＰ转染ｓｈＳ０Ｘ４病毒的荧光图??片。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?ＳＯＸ４?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ａｎｄ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉ
本文编号：3305102
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：181 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．前列腺癌恶性转变过程示意图［６］
ｌｕｔａｍｉｄｅ，?ａｂｉｒａｔｅｒｃｘｉｅ，Ｒａｄｉｕｍ??？?Ａｐａｌｕｔａｍｉｄｅ?２２３，?Ｚｏｔｅｄｒｏｎｉｃ?ａｃｉｄ，?Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ．??Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ，?ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ４，?ａｎｔｉ－ＰＤ１??Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ??—?一?Ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ?—??．?Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ?．?Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ??肩一＾?亦＃１?ＥＴ－１．ＴＧｆ＾．??ＩＧＦｓ．?ＦＧＦｓ．??，ＰＤＧＦｓ．?ＢＭＰｓ??ＲＡＮＫＬ，?ＰＴＨ??图２．前列腺癌演进中重要基因改变的示意图［１２Ｊ??为了进一步识别和研究在前列腺癌发生和进展中可能发挥驱动作用的肿瘤相??关基因，本课题组通过对ＴＣＧＡ及ＧＥＯ数据库进行深入分析和挖掘，从中筛选出??若干个可能与前列腺癌进展和预后相关的差异基因，包括前期工作中所涉及到的??Ｓ０Ｘ４、ＰＡＤＩ２、ＴＸＮＤＣ９、ＴＸＮＤＣ２、ＣＵＬ４Ｂ、ＢＴＦ３?和?ＫＩＦ１５?等。??Ｓ０Ｘ４?（ｓｅｘ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎＹ－ｂｏｘ４）基因是?ＳＯＸ?家族成员之一，翻译合成??约４７ｋＤａ的蛋白质，其中含一个高度保守的高迀移率族ＤＮＡ结合域，是参与发育??相关的转录因子［１３］。前期研究发现ＳＯＸ４被认为是６４个“肿瘤特征”基因之一，??Ｓ０Ｘ４在在多种肿瘤组织例如膀胱癌、肝癌、前列腺癌和急性粒细胞白血病等中表??达上调［１３，?１４ＬＳＯＸ４是最常见的逆转录病毒整合位点之一，导致ｍＲＮＡ增加［１５］。??研宄报道ＳＯＸ４参与多种信号通路途径如Ｗｎｔ、ＴＧＦｐｌ、ＴＰ５３和ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ信号??通路等，在调节肿瘤进展中发挥重要作用。??本课题
列腺癌小鼠肿瘤中表达上调［４２］；另外，成??年前列腺上皮中ＳＯＸ４基因特异性缺失可以强烈抑制ＰＴＥＮ缺失引发的肿瘤进展??［４３］。然而，ＳＯＸ４在动物体内移植瘤中的作用暂无报道。为了进一步研究ＳＯＸ４??在体内对前列腺癌细胞的作用，我们进行裸鼠皮下成瘤实验。??１．１．选取并构建细胞模型??我们首先检测了?ＳＯＸ４在前列腺癌细胞系中的表达水平，从而确定合适的细??胞系进行研究实验。结果显示，ＳＯＸ４在ＶＣａＰ和ＬＮＣａＰ细胞中表达较高，而在??ＰＣ３和ＤＵ１４５细胞中表达较低（图１Ａ）。因此，我们选择ＶＣａＰ和ＬＮＣａＰ细胞??进行ＳＯＸ４沉默表达，而ＰＣ３和ＤＵ１４５细胞进行ＳＯＸ４过表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检??测转染效率，ＧＡＰＤＨ作为内参，如图所示（图１Ｂ）。ＳＯＸ４表达水平在ＶＣａＰ细??胞中最高，因此选用ＶＣａＰ细胞进行慢病毒转染沉默ＳＯＸ４表达水平（图１Ｃ）。??Ａ?Ｂ?Ｃ??．Ｖ?＾?＾?ｓｈＮＣ?ｓｈＳＯＸ４??一。／／／／?Ｈｆｆｎ??ＳＯＸ４?一—馨》鲁?５０Ｘ４?？輪一—猶—??ＧＡＰＤＨ?ＧＡＰＤＨ?＿雜＿雜??ＰＣ３?ＤＵ１４５?ＶＣａＰ?２２ＲＶ１?ＬＮＣａＰ????????ｖｃａＰ?ＬＮＣａＰ?ＰＣ３?ＤＵ１４５??图１．?ＳＯＸ４沉默及过表达效率检测。（Ａ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测Ｓ０Ｘ４在各前列腺癌细胞系中的表达水平。??（Ｂ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测各细胞系中的Ｓ０Ｘ４沉默及过表达效率。（Ｃ）?ＶＣａＰ转染ｓｈＳ０Ｘ４病毒的荧光图??片。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?ＳＯＸ４?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ａｎｄ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉ
本文编号：3305102
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