基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨四逆散抗皮质酮致海马神经元细胞损伤的作用机制
发布时间：2021-07-31 16:36
研究目的有研究表明,机体长期处于慢性应激状态下,将导致HPA轴功能亢进,糖皮质激素分泌增多,最终损伤海马神经元。自噬是细胞受到外界刺激后产生的一种自我保护机制,这种机制对损伤的神经元细胞至关重要,但自噬过度激活将导致其内环境紊乱,使其功能受损甚至死亡。四逆散出自《伤寒论》,由柴胡、枳实、白芍、炙甘草四味药物组成,具有疏肝解郁、调和肝脾之功。课题组前期实验忆证明四逆散可以改善慢性应激大鼠抑郁样行为。故本实验以原代海马神经元细胞为研究对象,利用皮质酮建立体外慢性应激细胞模型,通过Western-blot、Real-timePCR、免疫荧光等现代实验技术,从蛋白、基因等层面探讨慢性应激的致病机理以及中药四逆散的作用机制,为中医药治疗慢性应激提供新的理论依据。实验方法1、根据相关文献培养原代海马神经元细胞并在显微镜下观察4h、24h、48h以及5-7天的生长情况,第7天采用免疫荧光法鉴定所取原代海马神经元细胞。2、利用CCK-8法检测不同时间段（6h、12h、24h、48h）和不同浓度皮质酮（0μM、5μM、1OμM、50μM、100μM、200μM、300μM、400μM、600μM、800...
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用[J]. 石文姣,袁瑞霞,郭志新. 中国动脉硬化杂志. 2019(02)
[2]中医药通过mTOR途径调节细胞凋亡与自噬的研究进展[J]. 郜然然,周慧,吴也可,贺宇,吴克明. 中国实验方剂学杂志. 2019(04)
[3]中药复方对无镁诱导培养的发育期大鼠海马神经元细胞活力及其凋亡的影响[J]. 戎萍,马融,任献青,杨常泉,张喜莲. 辽宁中医杂志. 2018(08)
[4]自噬启动与调控机制的研究进展[J]. 李迪,李艳. 武汉大学学报(医学版). 2018(05)
[5]左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR-5-HT信号轴的影响[J]. 杨琴,凌佳,王宇红,刘检,杨蕙,孟盼,韩远山,杜青. 中药药理与临床. 2018(03)
[6]脑还丹对SAM-P/8小鼠海马神经元细胞色素C氧化酶和细胞凋亡的影响[J]. 黄秀芳,陶彦谷,张茹兰,黄启辉. 中成药. 2018(03)
[7]Beclin1、LC3和mTOR在肝癌中的表达及临床意义[J]. 于海,刘清华,肖培伦,王健欣,张明,蒋吉英,李进,于丽,于树娜. 安徽医药. 2018(02)
[8]麦粒灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤不同时期保护效应及Beclin 1表达的影响[J]. 白桦,卢圣锋,陈婉莹,仲泽昊,顾一煌. 针刺研究. 2017(06)
[9]氟对原代培养大鼠海马神经元一氧化氮和钙及钙调激酶的影响[J]. 杨洪蕊,刘晓静,刘颖,李清钊,张文丽,薛玲,蒋守芳. 环境与健康杂志. 2017(11)
[10]通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的保护作用及代谢组学研究[J]. 董晓红,刘斌,姚壮,刘海洋,张艳,周忠光. 现代生物医学进展. 2017(22)
博士论文
[1]海藻糖对角质形成细胞的非MTOR依赖性自噬调控机制及其抗紫外线损伤效应研究[D]. 徐松.北京协和医学院 2017
[2]二氢杨梅素通过诱导细胞自噬改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用及其机制研究[D]. 施琳颖.第三军医大学 2015
硕士论文
[1]慢性应激诱发大鼠海马自噬并具有偏侧化[D]. 薛妍.浙江理工大学 2018
[2]PI3K/Akt/mTOR介导的BDNF/TrkB信号通路在沃替西汀抗抑郁作用中的研究[D]. 司晓铭.青岛大学 2018
[3]四逆散加味方对免疫诱导肝纤维化大鼠肝组织NOX、PI3K/Akt信号通路的影响[D]. 方惠娴.甘肃中医药大学 2018
[4]自噬在巨噬细胞抗绵羊肺炎支原体感染中作用的研究[D]. 李旭卉.宁夏大学 2017
[5]补肾法、疏肝法改善子宫内膜容受性的作用与调控PI3K/Akt通路的关系[D]. 耿丹丹.河北医科大学 2017
[6]甘草次酸影响自噬及Bcl-2抗凋亡抑制胃癌SGC7901细胞增殖[D]. 姚俊杰.新乡医学院 2016
[7]自噬在慢性不可预知应激损害大鼠学习记忆功能中的作用[D]. 许伟.南华大学 2015
[8]四逆散和逍遥散对抑郁模型大鼠行为学及其抗病机理的研究[D]. 彭淑芹.山东中医药大学 2014
[9]调肝健脾法影响慢性心理应激大鼠自噬功能的初步研究[D]. 周江霞.广州中医药大学 2014
[10]大鼠脑缺血再灌注损伤Cathepsin D介导的细胞凋亡与ERK1/2信号通路的关系[D]. 蔡丽.南华大学 2014
本文编号：3313814
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代海马神经元细胞提取过程??注：Ａ：剪开皮肤；Ｂ：暴露脑组织；Ｃ：剥离脑组织；Ｄ：暴露海马组织；Ｅ：分离海马组织??１６??
?广州中医药大学２０１９级博士学位论文???Ａ?丨，??．Ｃ、?＇．丨）??图二不同时间段显微镜下海马神经元细胞生长情况（Ｘ４００）??注：Ａ：?４ｈ?；?Ｂ：?２４ｈ；?Ｃ：?４８ｈ；?Ｄ：?５－７?天??２．２新生ＳＤ大鼠原代海马神经元细胞免疫荧光鉴定??由图三可知，Ｍａｐ－２是神经元细胞标记物，ＤＡＰＩ为细胞核的标记物，两图重叠??后视野中基本是海马神经元细胞，纯度在９０％以上。且发现海马神经元细胞胞体饱满，??突触粗大形成网络这与形态学图片一致。??ＭＡＰ－２?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??图三原代海马神经元细胞免疫荧光鉴定（ｘｌＯＯ）??５讨论??目前，体外实验和体内实验是一个完整且不可分割的整体。从各自在实验的分工??上看，体外实验可以更为直观、确切、有效的证明药物对人或动物的疗效；而体内实??１８??
?广州中医药大学２０１９级博士学位论文???Ａ?丨，??．Ｃ、?＇．丨）??图二不同时间段显微镜下海马神经元细胞生长情况（Ｘ４００）??注：Ａ：?４ｈ?；?Ｂ：?２４ｈ；?Ｃ：?４８ｈ；?Ｄ：?５－７?天??２．２新生ＳＤ大鼠原代海马神经元细胞免疫荧光鉴定??由图三可知，Ｍａｐ－２是神经元细胞标记物，ＤＡＰＩ为细胞核的标记物，两图重叠??后视野中基本是海马神经元细胞，纯度在９０％以上。且发现海马神经元细胞胞体饱满，??突触粗大形成网络这与形态学图片一致。??ＭＡＰ－２?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??图三原代海马神经元细胞免疫荧光鉴定（ｘｌＯＯ）??５讨论??目前，体外实验和体内实验是一个完整且不可分割的整体。从各自在实验的分工??上看，体外实验可以更为直观、确切、有效的证明药物对人或动物的疗效；而体内实??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用[J]. 石文姣,袁瑞霞,郭志新. 中国动脉硬化杂志. 2019(02)
[2]中医药通过mTOR途径调节细胞凋亡与自噬的研究进展[J]. 郜然然,周慧,吴也可,贺宇,吴克明. 中国实验方剂学杂志. 2019(04)
[3]中药复方对无镁诱导培养的发育期大鼠海马神经元细胞活力及其凋亡的影响[J]. 戎萍,马融,任献青,杨常泉,张喜莲. 辽宁中医杂志. 2018(08)
[4]自噬启动与调控机制的研究进展[J]. 李迪,李艳. 武汉大学学报(医学版). 2018(05)
[5]左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR-5-HT信号轴的影响[J]. 杨琴,凌佳,王宇红,刘检,杨蕙,孟盼,韩远山,杜青. 中药药理与临床. 2018(03)
[6]脑还丹对SAM-P/8小鼠海马神经元细胞色素C氧化酶和细胞凋亡的影响[J]. 黄秀芳,陶彦谷,张茹兰,黄启辉. 中成药. 2018(03)
[7]Beclin1、LC3和mTOR在肝癌中的表达及临床意义[J]. 于海,刘清华,肖培伦,王健欣,张明,蒋吉英,李进,于丽,于树娜. 安徽医药. 2018(02)
[8]麦粒灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤不同时期保护效应及Beclin 1表达的影响[J]. 白桦,卢圣锋,陈婉莹,仲泽昊,顾一煌. 针刺研究. 2017(06)
[9]氟对原代培养大鼠海马神经元一氧化氮和钙及钙调激酶的影响[J]. 杨洪蕊,刘晓静,刘颖,李清钊,张文丽,薛玲,蒋守芳. 环境与健康杂志. 2017(11)
[10]通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的保护作用及代谢组学研究[J]. 董晓红,刘斌,姚壮,刘海洋,张艳,周忠光. 现代生物医学进展. 2017(22)
博士论文
[1]海藻糖对角质形成细胞的非MTOR依赖性自噬调控机制及其抗紫外线损伤效应研究[D]. 徐松.北京协和医学院 2017
[2]二氢杨梅素通过诱导细胞自噬改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用及其机制研究[D]. 施琳颖.第三军医大学 2015
硕士论文
[1]慢性应激诱发大鼠海马自噬并具有偏侧化[D]. 薛妍.浙江理工大学 2018
[2]PI3K/Akt/mTOR介导的BDNF/TrkB信号通路在沃替西汀抗抑郁作用中的研究[D]. 司晓铭.青岛大学 2018
[3]四逆散加味方对免疫诱导肝纤维化大鼠肝组织NOX、PI3K/Akt信号通路的影响[D]. 方惠娴.甘肃中医药大学 2018
[4]自噬在巨噬细胞抗绵羊肺炎支原体感染中作用的研究[D]. 李旭卉.宁夏大学 2017
[5]补肾法、疏肝法改善子宫内膜容受性的作用与调控PI3K/Akt通路的关系[D]. 耿丹丹.河北医科大学 2017
[6]甘草次酸影响自噬及Bcl-2抗凋亡抑制胃癌SGC7901细胞增殖[D]. 姚俊杰.新乡医学院 2016
[7]自噬在慢性不可预知应激损害大鼠学习记忆功能中的作用[D]. 许伟.南华大学 2015
[8]四逆散和逍遥散对抑郁模型大鼠行为学及其抗病机理的研究[D]. 彭淑芹.山东中医药大学 2014
[9]调肝健脾法影响慢性心理应激大鼠自噬功能的初步研究[D]. 周江霞.广州中医药大学 2014
[10]大鼠脑缺血再灌注损伤Cathepsin D介导的细胞凋亡与ERK1/2信号通路的关系[D]. 蔡丽.南华大学 2014
本文编号：3313814
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