USP47参与调控神经元兴奋性突触传递及其对癫痫发作易感性的影响

发布时间：2021-08-09 11:15

　　第一部分USP47在中枢神经系统的表达定位研究目的:探讨USP47在中枢神经系统的表达特点及定位。方法:1.通过免疫印迹技术了解USP47在中枢神经系统的发育表达特点。2.通过免疫荧光技术了解USP47在中枢神经系统的表达分布。结果:1.USP47在刚出生时即在小鼠海马、皮层具有丰富的表达,且其表达水平随着发育成熟逐渐降低。2.免疫荧光显示在人脑组织皮层和成年小鼠海马与皮层脑组织中,USP47与神经元标记物NeuN存在共表达,但不与星形胶质细胞标志物GFAP共表达。另外,USP47主要定位于神经元胞浆,未在细胞核见到明显定位。结论:USP47随神经系统发育成熟蛋白表达水平逐渐降低,且主要定位于神经元胞浆,不在星形胶质细胞表达。第二部分USP47在中枢神经系统的功能研究目的:探讨USP47在中枢神经系统可能具有的功能。方法:1.构建靶向敲减USP47表达的慢病毒,并转染原代培养海马神经元,通过免疫印迹技术验证其敲减效率。2.采用Label-free定量蛋白质组学技术和串联质谱技术鉴定USP47相关靶点以及相互作用蛋白,并利用生物信息学软件分析。3.采用细胞电生理技术分析USP47对神经元... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

USP47在小鼠脑中的发育表达谱

重庆医科大学博士研究生学位论文29图1.2免疫荧光染色分析USP47在TBI患者颞叶皮层组织中的表达Figure1.2ExpressionofUSP47inTBIhumanbraintissuebyimmunofluorescencestaining（A）在TBI患者术后的颞叶皮层组织中可见，USP47(红色)与神经元标记物NeuN共定位，且USP47主要定位在神经元周围，而非细胞核中；（B）但USP47（红色）并不与星形胶质细胞GFAP（绿色）共定位。比例尺50μm，放大图比例尺10μm。(A)USP47(red)isco-localizedwiththeneuronalmarkerNeuNinthetemporalcorticaltissueofTBIpatients,andismainlylocatedinthecytoplasmoftheneuron,butnotinthenucleus;(B)WhileUSP47(red)doesnotco-localizewithastrocyteGFAP(green).Thescalebar=50μm(10μminzoomimages).同时，我们也观察了USP47在小鼠脑组织中的表达情况，与人脑组织中的发现一致，在海马CA1区，USP47主要与神经元细胞共定位（图1.3A），而与星形胶质细胞无共定位（图1.3C），并且USP47并不表达于细胞核，而主要位于神经元胞质内。USP47在皮层的定位与海马一致（图1.3B，D）。

重庆医科大学博士研究生学位论文30图1.3双标免疫荧光染色分析USP47在成年小鼠脑组织的表达Figure1.3ExpressionofUSP47inadultmousebrainbydual-labelledimmunofluorescencestaining（A-B）在小鼠的颞叶皮层和海马组织中，USP47(红色)与神经元标记物NeuN共定位，且USP47主要定位在神经元周围，并不定位于细胞核；（B）在小鼠的颞叶皮层和海马组织中，USP47（红色）并不与星形胶质细胞GFAP（绿色）共定位。比例尺50μm，放大图比例尺10μm。(A-B)Inthehippocampusandcortexofmice,USP47(red)isco-localizedwiththeneuronmarkerNeuN,andismainlylocatedinthecytoplasmoftheneuron,notinthenucleus;(B)Inhippocampusandcortexofmouse，USP47(red)isnotcolocalizedwithastrocyteGFAP(green).


本文编号：3331966