Lgr5在肝细胞癌发生发展，转移和耐药性的功能及机制研究

发布时间：2021-08-11 21:05

　　第一部分:富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5在肝细胞癌中的表达及其在肿瘤细胞生物学行为中的效应目的:此部分旨在分析富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5（Lgr5）在肝细胞癌（HCC）中的表达量,探讨Lgr5的表达量与患者的临床病理资料以及预后的关系,观察Lgr5对肿瘤细胞生物学行为的效应。方法:采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）以及免疫印迹分析检测肝癌细胞系和肝细胞癌组织样本中Lgr5的达水平。通过免疫组织化学检测临床收集的肝细胞癌样本中Lgr5的表达情况。结合Lgr5的表达情况与收集到的肝癌患者的临床病理资料分析两者之间的相关性。通过Kaplan–Meier生存曲线分析Lgr5表达量水平与肝癌患者预后的联系。建立COX回归模型与单/多因素分析判别Lgr5是否为肝癌预后的独立因素。在肝癌细胞系SK-Hep1和HepG2中对Lgr5基因过表达或基因沉默,从而通过Transwell细胞侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力,CCK8（Cell Counting Kit-8）细胞增殖实验检测细胞的增值能力,免疫印迹法分析上皮-间质化（epithelial–mesenchymal... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

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论文创新点
中文摘要
Abstract
1.引言
第一部分：富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5在肝细胞癌中的表达及其在肿瘤细胞生物学行为中的效应
    2.材料与方法
        2.1 临床样本
        2.2 细胞株
        2.3 实验动物
        2.4 主要仪器
        2.5 主要试剂
        2.6 主要溶液的配制
        2.7 实验方法
    3.实验结果
        3.1 Lgr5 在肝细胞癌组织和细胞中的表达
        3.2 Lgr5 在肝细胞癌组织的表达与临床病理资料和预后的关系
        3.3 Lgr5 可以推动肝癌细胞的EMT进程以及促进细胞的侵袭迁移与生长
        3.4 Lgr5 可以提高肿瘤细胞对阿霉素的耐药性
    4.讨论
第二部分：富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5与程序性细胞死亡蛋白5 的之间的相互作用
    5.材料与方法
        5.1 细胞株
        5.2 主要仪器
        5.3 主要试剂
        5.4 主要溶液的配制
        5.5 实验方法
    6.实验结果
        6.1 筛选验证Lgr5 的相互作用蛋白
        6.2 Lgr5与PDCD5 的结合位点在Lgr5 蛋白N端△22-561段
        6.3 PDCD5 在肝癌组织和细胞中的表达
        6.4 PDCD5 在肝细胞癌组织中的表达与临床病理资料以及预后的相关性
        6.5 PDCD5 过表达可以部分逆转Lgr5 介导的药物耐受
    7.讨论
第三部分：富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5通过竞争性结合程序性细胞死亡蛋白5调控肝癌细胞的化疗耐药
    8.材料与方法
        8.1 临床样本
        8.2 细胞株
        8.3 主要仪器
        8.4 主要试剂
        8.5 主要溶液的配制
        8.6 实验方法
    9.实验结果
        9.1 Lgr5和PDCD5 不能影响彼此的表达
        9.2 Lgr5 可以抑制PDCD5 的核转位
        9.3 Lgr5 可以竞争性结合PDCD5 进而降低p53 的稳定性
        9.4 Lgr5 通过PDCD5/p53 抑制阿霉素介导的细胞凋亡
    10.讨论
参考文献
综述
    参考文献
攻博期间发表的科研成果目录
致谢



本文编号：3336893