基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究
发布时间：2021-08-11 12:34
研究背景与目的:激素抵抗型肾病综合征（SRNS）致病因素复杂,临床治疗较为棘手,疗效不尽如人意,随着病情的变化,常易发展为终末期肾病而危及患者的生命。足细胞损伤与慢性肾病发生、发展密切关联,足细胞相关蛋白、基因突变及表达异常是SRNS发生的关键环节。有研究表明,miRNA表达失调与肾病有关,成熟的Dicer酶可以通过一些非编码的微小RNA来介导调节SD分子的应答。故调控Dicer-miRNA通路,使SD分子的表达得以改善,减少蛋白尿。右归丸可通过减毒增敏来减缓SRNS肾病足细胞的损伤,发挥减少尿蛋白和保护肾脏的作用,其分子机制尚未完全阐明。方法:1.64只雄性SPF级Wistar大鼠适应性饲养1周,按体重随机分为空白组（Control,12只）和造模组（52只）。造模成功后随机分为模型组（Model）;泼尼松组（PAT）;泼尼松+右归丸高、中、低组（PAT+YGh、PAT+YGm、PAT+YGl）。一次性尾静脉注射阿霉素6mg/kg（10mg/支,用0.9%氯化钠溶液2ml稀释成浓度为5mg/ml）,同时给予臀部肌肉注射氢化可的松25mg/kg/d（50mg/支,用0.9%氯化钠2ml...
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
Nephrin信号转导通路示意图
基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究16族中miRNA的研究成为防治多种疾病的热点。图2microRNA生物合成及作用机制单链非编码小RNA在动物中高度保守，在脏器组织中的分布具有器官特异性。在肾脏中，miRNA与肾脏发育、体内平衡和生理功能关系密切。肾脏中特异性miRNA出现特异的缺失或者低表达时，它们通过调控一些相关的靶基因，影响一些特异性蛋白的表达。大量实验研究表明[56-58]，在肾脏病的发生、发展进程中miRNA发挥重要作用。miRNA参与了足细胞生物学过程，包括细胞增殖、凋亡和分化，同时能维护肾小球滤过屏障的完整性。当miRNA所调控的下游基因网络出现异常时，肾小球逐渐呈现硬化，进行性蛋白尿随之产生。同时，miRNA变化也会影响足细胞骨架蛋白的表达[59-61]，足细胞结构与功能异常是SRNS产生的关键因素。近年来，越来越多的研究证明[62]，一些特异性成熟的miRNAs与足细胞结构功能损伤有关。3.2miRNA与足细胞相关基因的表达肾脏病理类型是临床对不同类型肾脏病的有效依据，肾病综合征各种病理类型都有可能出现激素抵抗，但最主要的病理类型是膜性肾病（membranousnephropathy，MN）和局灶节段性肾小球硬化(focalsegementaiglomerulosclerosis，FSGS）[63]。足细胞的病变是局灶性节段性肾小球硬化的主要病理机制[64]，而miRNA在维持足细胞生理平衡和调控激素治疗方面有不可代替的作用。研究发现，mir-30家族在FSGS足细胞中表达下
基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究461.5基因芯片检测肾皮质miRNA的表达各组大鼠肾皮质差异性miRNAs的筛选，我们选用AffymetrixmiRNA4.0芯片来检查分析。芯片对miRBasev200100%的全覆盖；涵盖了所有物种成熟信息RNA30424个；其中包括人、小鼠和大鼠mRNA5214条；并且包括人类snoRNA和scaRNA1996多条，370个探针组用于检测人与鼠类的premrnA发夹序列。AffymetrixmiRNA表达谱微阵列检测，先从待检测样品中提取总RNA，然后GenisphereFlashTag生物素标记。生物素标记原理见图7。主要步骤如下：(1)我们把用50mMTris-HCl与250mMNaCl及10mMMgCl2在pH7.9、温度25℃的实验条件下配成Poly(A)聚合酶反应缓冲液1份A，然后37℃且pH7.9的实验条件条加入1mMATP在为37℃水中温育十分钟；（2）然后对micRNA在生物素标记的3DNAdendrimer在连接酶的作用下连接RNA的polyA尾上进行标记；(3)在连接酶引导下3DNAdendrimer加尾于polyA；(4)芯片在杂交液中杂交，bufferA洗液洗涤，染色后通过荧光检测并进行图像扫描。1.5.1各组样品总RNA的提娶质检和纯化图7样品RNA生物素标记的原理
【参考文献】：
期刊论文
[1]右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠模型及SD蛋白的影响[J]. 王新斌,薛国忠,陈威辛,戴恩来. 光明中医. 2019(17)
[2]解毒通络保肾法对实验性DM大鼠肾足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响[J]. 何泽,成光宇,吕美香,丛婷婷,吴春炜. 中国老年学杂志. 2019(06)
[3]局灶节段性肾小球硬化足细胞保护机制及治疗进展[J]. 陈威辛,薛国忠,戴恩来. 中国中西医结合肾病杂志. 2018(12)
[4]补肾活血方保护FSGS小鼠足细胞的实验研究[J]. 左春霞,张勉之,贾胜琴. 天津中医药. 2018(05)
[5]氢化可的松诱导大鼠肾阳虚模型评价[J]. 马晓宇,姜梦如,张涛,杨英. 中国兽医学报. 2017(09)
[6]肾病综合征的新型生物学标志物研究进展[J]. 阳晓,黄旋,余学清. 中华肾病研究电子杂志. 2017(04)
[7]激素抵抗型肾病综合征中西医治疗进展[J]. 鲁盈,傅文宁. 中华肾病研究电子杂志. 2017(04)
[8]局灶节段性肾小球硬化的基因诊断策略[J]. 刘韵子,谢静远,陈楠. 中华内科杂志. 2017 (08)
[9]氢化可的松致肾虚证小鼠模型的建立及相关指标的评价[J]. 戴冰,张嘉妮,杨梦琳,李玉星,肖子曾,杨磊,韦强. 中国实验动物学报. 2017(01)
[10]右归丸联合环磷酰胺治疗激素抵抗型肾病综合征的临床研究[J]. 段喜芳. 实用中西医结合临床. 2017(02)
硕士论文
[1]右归丸干预肾间质纤维化的作用及机制研究[D]. 陈叶香.南京中医药大学 2016
本文编号：3336167
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
Nephrin信号转导通路示意图
基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究16族中miRNA的研究成为防治多种疾病的热点。图2microRNA生物合成及作用机制单链非编码小RNA在动物中高度保守，在脏器组织中的分布具有器官特异性。在肾脏中，miRNA与肾脏发育、体内平衡和生理功能关系密切。肾脏中特异性miRNA出现特异的缺失或者低表达时，它们通过调控一些相关的靶基因，影响一些特异性蛋白的表达。大量实验研究表明[56-58]，在肾脏病的发生、发展进程中miRNA发挥重要作用。miRNA参与了足细胞生物学过程，包括细胞增殖、凋亡和分化，同时能维护肾小球滤过屏障的完整性。当miRNA所调控的下游基因网络出现异常时，肾小球逐渐呈现硬化，进行性蛋白尿随之产生。同时，miRNA变化也会影响足细胞骨架蛋白的表达[59-61]，足细胞结构与功能异常是SRNS产生的关键因素。近年来，越来越多的研究证明[62]，一些特异性成熟的miRNAs与足细胞结构功能损伤有关。3.2miRNA与足细胞相关基因的表达肾脏病理类型是临床对不同类型肾脏病的有效依据，肾病综合征各种病理类型都有可能出现激素抵抗，但最主要的病理类型是膜性肾病（membranousnephropathy，MN）和局灶节段性肾小球硬化(focalsegementaiglomerulosclerosis，FSGS）[63]。足细胞的病变是局灶性节段性肾小球硬化的主要病理机制[64]，而miRNA在维持足细胞生理平衡和调控激素治疗方面有不可代替的作用。研究发现，mir-30家族在FSGS足细胞中表达下
基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究461.5基因芯片检测肾皮质miRNA的表达各组大鼠肾皮质差异性miRNAs的筛选，我们选用AffymetrixmiRNA4.0芯片来检查分析。芯片对miRBasev200100%的全覆盖；涵盖了所有物种成熟信息RNA30424个；其中包括人、小鼠和大鼠mRNA5214条；并且包括人类snoRNA和scaRNA1996多条，370个探针组用于检测人与鼠类的premrnA发夹序列。AffymetrixmiRNA表达谱微阵列检测，先从待检测样品中提取总RNA，然后GenisphereFlashTag生物素标记。生物素标记原理见图7。主要步骤如下：(1)我们把用50mMTris-HCl与250mMNaCl及10mMMgCl2在pH7.9、温度25℃的实验条件下配成Poly(A)聚合酶反应缓冲液1份A，然后37℃且pH7.9的实验条件条加入1mMATP在为37℃水中温育十分钟；（2）然后对micRNA在生物素标记的3DNAdendrimer在连接酶的作用下连接RNA的polyA尾上进行标记；(3)在连接酶引导下3DNAdendrimer加尾于polyA；(4)芯片在杂交液中杂交，bufferA洗液洗涤，染色后通过荧光检测并进行图像扫描。1.5.1各组样品总RNA的提娶质检和纯化图7样品RNA生物素标记的原理
【参考文献】：
期刊论文
[1]右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠模型及SD蛋白的影响[J]. 王新斌,薛国忠,陈威辛,戴恩来. 光明中医. 2019(17)
[2]解毒通络保肾法对实验性DM大鼠肾足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响[J]. 何泽,成光宇,吕美香,丛婷婷,吴春炜. 中国老年学杂志. 2019(06)
[3]局灶节段性肾小球硬化足细胞保护机制及治疗进展[J]. 陈威辛,薛国忠,戴恩来. 中国中西医结合肾病杂志. 2018(12)
[4]补肾活血方保护FSGS小鼠足细胞的实验研究[J]. 左春霞,张勉之,贾胜琴. 天津中医药. 2018(05)
[5]氢化可的松诱导大鼠肾阳虚模型评价[J]. 马晓宇,姜梦如,张涛,杨英. 中国兽医学报. 2017(09)
[6]肾病综合征的新型生物学标志物研究进展[J]. 阳晓,黄旋,余学清. 中华肾病研究电子杂志. 2017(04)
[7]激素抵抗型肾病综合征中西医治疗进展[J]. 鲁盈,傅文宁. 中华肾病研究电子杂志. 2017(04)
[8]局灶节段性肾小球硬化的基因诊断策略[J]. 刘韵子,谢静远,陈楠. 中华内科杂志. 2017 (08)
[9]氢化可的松致肾虚证小鼠模型的建立及相关指标的评价[J]. 戴冰,张嘉妮,杨梦琳,李玉星,肖子曾,杨磊,韦强. 中国实验动物学报. 2017(01)
[10]右归丸联合环磷酰胺治疗激素抵抗型肾病综合征的临床研究[J]. 段喜芳. 实用中西医结合临床. 2017(02)
硕士论文
[1]右归丸干预肾间质纤维化的作用及机制研究[D]. 陈叶香.南京中医药大学 2016
本文编号：3336167
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