非小细胞肺癌第三代EGFR-TKI奥希替尼获得性耐药细胞株的建立及耐药机制初探

发布时间：2021-08-11 12:07

　　目的:第三代EGFR-TKI在临床试验中较一代、二代TKI显示了更加惊喜的数据,奥希替尼作为目前唯一获批的三代TKI逐渐在临床上得到广泛认可并顺利赢得四大指南联合推荐一线治疗宝座。然而奥希替尼作为新一代的明星靶向药物,终将面临耐药问题。明确耐药机制,并探索耐药后潜在的治疗策略成为重要的研究方向。本课题拟通过体外诱导建立奥希替尼耐药细胞株H1975/OR,利用二代测序技术找到可能导致奥希替尼获得性耐药的关键基因,探讨奥希替尼获得性耐药的分子机制。以期为EGFR-TKI获得性耐药机制研究提供更多体外实验依据,进而为临床耐药后患者找到潜在性的治疗策略。方法:对含有EGFR L858R/T790M双突变的细胞系H1975进行体外低浓度加量递增方法诱导建立第三代EGFR-TKI奥希替尼耐药株H1975/OR。经过细胞毒性实验检测耐药指数明确成功建立耐药株后首先比较亲本细胞与耐药细胞在形态学及生物学特征方面的差异,包括利用CCK8、平板克隆形成明确两株细胞增殖水平差异,利用流式分析仪检测凋亡与细胞周期的差异,利用划痕实验、Transwell实验明确两株细胞迁移、侵袭能力的差异。由表型的差异考虑可能... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

孔板实验处理图示

肺腺癌细胞系，分别观察其对一代、三代 EGFR-TKI 药物厄洛替尼、奥希替尼药物敏感性差异。在实验中发现 PC9 对一代 TKI 厄洛替尼与三代 TKI 奥希替尼敏感性相差不多，但奥希替尼的 IC50较低即对奥希替尼敏感性更高（图1.2.1A，表 1.2.1）；而 H1975 细胞系由于存在 T790M，一代 TKI 厄洛替尼不敏感，三代TKI 敏感（图 1.2.1 B）。两细胞系的对两种药物的 IC50 见表 1.2.1。根据结果表明 H1975 符合实验设计要求。

1.2.3 奥希替尼耐药株 H1975/OR 的鉴定及生物学特征分析1.2.3.1 奥希替尼耐药株 H1975/OR 耐药细胞株鉴定为确定耐药细胞株是否成功建立，我们检测亲本和耐药株在不同奥希替尼药物浓度下 72 小时细胞存活情况，探讨两系细胞对奥希替尼的敏感性差异及耐药指数。结果如图 1.2.3.1 所示，随着奥希替尼药物浓度增加，两种细胞存活逐渐减少。在相同药物浓度作用下，耐药细胞较亲本细胞存活数多，测得两系 IC50及耐药指数如表1.2.3.1，亲本细胞IC50为11.2nmol/L，耐药株IC50为4.5umol/L，耐药指数为 391.3。说明 H1975 奥希替尼耐药株诱导成功。

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]Hedgehog信号通路在EGFR-TKI敏感和耐药非小细胞肺癌细胞中的作用机制研究[D]. 白晓燕.南方医科大学 2013



本文编号：3336128