细胞因子辅助免疫的抗体制备与应用及基于亲和力的免疫检测灵敏度研究

发布时间：2021-08-18 14:26

　　抗体作为免疫检测技术开发的关键原料,其质量直接决定了相应免疫检测方法的性能。对于一些免疫原性低,甚至不具备免疫原性的目标检测物,传统的免疫方式较难以获得高质量的目标抗体。同时在免疫检测过程中,抗原与抗体间的亲和力对所建立的检测方法灵敏度的影响也是不可忽视的。因此,开发高质量检测抗体及明确抗原与抗体间的亲和力对免疫检测方法灵敏度的影响十分有意义。本研究通过应用细胞因子作为分子佐剂辅助免疫制备单克隆抗体,在DNA免疫和皮下免疫两种免疫策略中证实了细胞因子作为分子佐剂对制备单克隆抗体的积极效果。进一步分析了高亲和力抗体所识别的具体抗原表位信息,以及抗原表位氨基酸对抗原-抗体免疫反应亲和力的影响,明确了亲和力在抗原与抗体结合与解离反应过程中的重要作用。通过分析系列与检测抗体具有不同亲和力的竞争抗原对竞争法免疫检测灵敏度的影响,明确了竞争抗原与检测抗体的亲和力和样本中待检抗原与检测抗体的亲和力差异对竞争法免疫检测灵敏度的影响。最后,应用制备得到的高亲和力单克隆抗体开发了抗缪勒氏管激素（Anti-mullerian hormone,AMH）及和肽素（Copeptin,CPP）全自动化学发光检测试剂... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【部分图文】：

研究技术路线示意图

华南理工大学博士学位论文26的条带。同样图2-2（B）和（C）中也产生相应的目的条带，实验结果与预期目的片段大小一致。经测序比对，同样证实插入目标片段完全正确；测序比对结果见附录Ⅰ。2.4.2真核表达鉴定图2-3Westernblot检测细胞因子蛋白在293F细胞中的表达Figure2-3Analysisofcytokineproteinexpressionin293Fcellsbywesternblot通过试剂将pCAGGS-mFlt3L，pCAGGS-mGM-CSF和pCAGGS-mCCL20三种质粒分别转染293F细胞。在转染后的第四、五、六天收集培养基和细胞。进行半纯化处理后，通过SDS-PAGE和WB分析细胞培养基、天然及变性蛋白质。结果如图2-3所示，

华南理工大学博士学位论文42图3-3腹水中抗体亚型鉴定Figure3-3Identificationofantibodysubtypesinascites图3-4腹水效价评价结果Figure3-4Evaluationofascitetiters

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：3350057