TRIM28在结直肠癌转移过程中的作用及机制研究

发布时间：2021-08-18 18:29

　　目的:研究TRIM28在结直肠癌转移过程中的作用及分子机制。方法:1、细胞培养:正常结肠粘膜上皮细胞NCM460、结直肠癌细胞和HEK293T细胞用含有10%标准胎牛血清的DMEM培养基培养。所有细胞培养环境:37℃,5%CO2。2、质粒构建:从HEK293T的c DNA中PCR扩增目的基因的全长c DNA,利用重组的方法将其插入克隆载体。将靶向目的基因的sh RNA序列插入PLKO.1载体,构建敲减质粒。所有质粒均经过DNA测序来保证质粒序列正确。3、转染和si RNA干扰:利用转染试剂Lipofectamine 2000按照生产商说明书进行质粒转染和si RNA干扰。4、慢病毒转染和稳转细胞系的构建:利用HEK293T细胞进行慢病毒的包装,收集48小时或72小时含有慢病毒的上清培养基。利用polybrene（8μg/ml）将慢病毒转染Lo Vo,HCT116,SW48细胞,24小时后换液,用嘌呤霉素（1μg/ml）压力筛选一周后检测慢病毒转染效果。5、蛋白印记实验:用含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞提取蛋白质,利用BCA试剂盒检测蛋白质浓度。将蛋白样在98℃中煮10分钟后等... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩略词表
前言
    参考文献
中文摘要
ABSTRACT
材料和方法
实验结果
    第一章 TRIM28 敲低促进结直肠癌转移
    第二章 TRIM28与CARM1 结合并通过CARM1 抑制结直肠癌转移
    第三章 TRIM28 通过与CARM1 蛋白相互结合抑制CARM1 蛋白泛素化降解以及结直肠癌转移
    第四章 TRIM28 通过CARM1 抑制WNT/β-catenin通路从而影响结直肠癌转移
    第五章 TRIM28/CARM1 在结直肠癌中的表达及临床意义
讨论
参考文献
综述:TRIM家族研究进展
    参考文献
附录
    攻读博士学位期间发表论文
    攻读博士学位期间参与课题
致谢



本文编号：3350405