荭草苷基于自噬网络调控的抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的分子机制研究

发布时间：2021-08-25 20:28

　　目的心肌缺血再灌注损伤（MIRI）在冠心病急性心肌缺血事件中的主要病理表现是缺血缺氧导致的心肌细胞损伤。最新研究表明：自噬对MIRI起“双刃剑”作用。mTOR介导的mTOR/自噬互反馈和Beclin 1介导的自噬/凋亡互反馈可能是调控自噬“双刃剑”转向促细胞存活的重要机制。我们前期研究证实苗药都木油活性成分荭草苷抗心肌缺血再灌损伤的作用机制可能与抗凋亡和诱导自噬有关。在此基础上,本研究拟通过建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,探寻荭草苷（Orientin, Ori）防治MIRI的主要作用靶点,验证“荭草苷抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的核心是通过调节mTOR与Beclin 1双通路,诱导细胞适度自噬,促使自噬“双刃剑”作用转向细胞保护”的假说,为苗药都木油防治MIRI提供药理学依据。方法和结果首先采用胰酶消化法体外分离培养大鼠乳鼠心肌细胞,利用三气培养法建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型（缺氧12h,复氧12 h）。实验共分为7组：正常对照组（Control组）、缺氧/复氧损伤组（HR组）、低剂量荭草苷预处理组（3 μmol/L, Ori-3组）、中剂量荭草苷预处理组（10μmol/L,Or... 

【文章来源】：中央民族大学北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：176 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语中英文对照
第一章 绪论
    一、细胞自噬的概述
        1. 细胞自噬的定义和生理意义
        2. 细胞自噬的分类
        3. 细胞自噬的发生过程及相关分子机制
    二、细胞自噬在心肌缺血再灌注损伤中的“双刃剑”作用及相关信号通路
        1. 自噬在MIRI中的“双刃剑”作用
        2. PI3K-Akt-mTOR通路对mTOR/自噬互反馈的关键调控作用
        3. Beclin 1与Bcl-2/Bcl-XL的相互作用对自噬/凋亡互反馈的关键调控作用
    三、本课题的研究背景、意义、前期研究基础及主要内容
        1. 选题背景及意义
        2. 前期研究基础
        3. 研究的主要内容与技术手段
第二章 荭草苷抗大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的药效学研究
    引言
    第一节 实验材料
        一、实验动物
        二、实验主要仪器和设备
        三、主要药品及试剂
        四、主要试剂的配制
    第二节 实验方法
        一、大鼠乳鼠心肌细胞的培养
        二、心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立
        三、实验分组
        四、观察指标及检测方法
    第三节 实验结果
        一、大鼠乳鼠心肌细胞免疫荧光鉴定结果
        二、光学显微镜下心肌细胞形态学观察结果
        三、荭草苷对心肌细胞毒性实验结果
        四、荭草苷对缺氧/复氧损伤心肌细胞活力的影响
        五、荭草苷对缺氧/复氧损伤引起的心肌细胞心肌酶释放的影响
        六、荭草苷对缺氧/复氧损伤引起的心肌细胞超微结构改变的影响
    第四节 分析与讨论
    第五节 小结
第三章 荭草苷对缺氧/复氧损伤心肌细胞自噬与凋亡的影响
    引言
    第一节 实验材料
        一、实验动物
        二、实验主要仪器和设备
        三、主要药品及试剂
        四、主要试剂的配制
    第二节 实验方法
        一、大鼠乳鼠心肌细胞的培养
        二、心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立
        三、实验分组
        四、观察指标及检测方法
    第三节 实验结果
        一、流式细胞仪检测心肌细胞凋亡
        二、TUNEL法检测心肌细胞凋亡
        三、Western Blot法检测心肌细胞Bcl-2和Bcl-XL的蛋白表达水平
        四、电镜检测心肌细胞内自噬体
        五、心肌细胞内LC3免疫荧光染色结果
        六、Western Blot法检测心肌细胞内LC3和Beclin 1蛋白表达水平
    第四节 分析与讨论
    第五节 小结
第四章 荭草苷基于mTOR相关信号通路的抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的分子机制研究
    引言
    第一节 实验材料
        一、实验动物
        二、实验主要仪器和设备
        三、主要药品及试剂
        四、主要试剂的配制
    第二节 实验方法
        一、大鼠乳鼠心肌细胞的培养
        二、心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立
        三、实验分组
        四、观察指标及检测方法
    第三节 实验结果
        一、Western Blot法检测Akt及其磷酸化水平
        二、Western Blot法检测mTOR、Raptor、p70S6K及其磷酸化水平
        三、Western Blot法检测AMPK及其磷酸化水平
        四、Western Blot法检测Rictor蛋白表达水平
    第四节 分析与讨论
    第五节 小结
第五章 荭草苷基于Beclin 1/Bcl-2相互作用的抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的分子机制研究
    引言
    第一节 实验材料
        一、实验动物
        二、实验主要仪器和设备
        三、主要药品及试剂
        四、主要试剂的配制
    第二节 实验方法
        一、大鼠乳鼠心肌细胞的培养
        二、心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立
        三、实验分组
        四、观察指标及检测方法
    第三节 实验结果
        一、实时荧光定量PCR法检测beclin 1基因的mRNA表达水平
        二、Western Blot法检测Beclin 1、Bcl-2和Bcl-XL的磷酸化水平
        三、免疫共沉淀法检测内质网上Beclin 1与Bcl-2的相互作用
    第四节 分析与讨论
    第五节 小结
全文总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[2]脂联素通过抑制Nur77线粒体转位减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡[D]. 贾敏.第四军医大学 2012
[3]PI3K-Akt信号通路参与白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用[D]. 何东伟.重庆医科大学 2012
[4]丁香酚对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响[D]. 袁德俊.广州中医药大学 2009



本文编号：3362801