LAG3与PD-1在乳腺癌患者T细胞中的共表达特点及作用研究
发布时间：2021-08-28 00:01
目的:1.探讨负性共刺激分子LAG3与PD-1在乳腺癌患者T细胞中共表达的特点。2.分析LAG3与PD-1共表达时对T细胞功能的影响。3.探讨LAG3与PD-1不同阻断治疗策略对乳腺癌发展的影响。方法:1.根据纳入和排除标准,临床入组乳腺癌患者,收集其外周血及肿瘤组织,流式细胞技术分析患者外周血、肿瘤浸润性、癌旁组织中T细胞LAG3与PD-1共表达的特点,并根据临床分期和分子分型进行分层分析其二者的共表达特点;2.通过CFSE染色、BrdU掺入及ELISA法分别检测LAG3与PD-1不同表达对T细胞增值与分泌功能的影响;3.免疫组化法分析乳腺癌组织、癌旁组织中LAG3与PD-1的主要配体MHCⅡ类分子、FGL1和PD-L1的表达情况,并比较它们在不同临床分期与分子分型乳腺癌中的差异性;4.通过EMT6和E0771小鼠乳腺癌建模,分别进行LAG3、PD-1的单一或联合单克隆抗体阻断治疗,观察小鼠肿瘤的生长情况,从而反向验证LAG3与PD-1共表达对乳腺癌发展的影响。结果:1.经过知情同意、纳入和排除标准筛选后,共入组乳腺癌患者112例,其中收集外周血标本82例,癌组织及癌旁组织标本47例...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
参与T细胞耗竭相关抑制性分子及其受体[31]
重庆医科大学博士研究生学位论文22可见离心管中液体至下而上分成五层：最下层是红细胞层，第二次层是微白膜层的粒细胞，第三层是分离液，第四层是白膜层，也就是我们需要的富含外周血单核细胞（PBMC）的细胞层，最上层为血浆层，富含血小板；如图1所示；图2.密度梯度离心后的分层情况Figure2.Layeredsolutionsituationafterthedensitygradientcentrifugation(5)将最上面的血浆层轻柔吸弃，再用吸管沿管壁周轻轻吸取第二层的单个核细胞，并移入另一支15ml的试管中；(6)加入5倍以上体积的Hank’s液，充分混匀，1800r/min离心10min，吸弃上清液；(7)重复使用3ml的Hank’s液洗涤一次，1400r/min离心10min，吸弃上清液；(8)再次加入1-2ml的Hank’s液重悬，用移液管吸取20μl进行浓度定量，从计数板边缘缓慢滴入；(9)在显微镜下用10x物镜观察计数板四个大方格中的细胞数（压线细胞我们采取记上不记下，计左不计右策略）：细胞数/L=（4大格细胞数之和/4）x107；(10)对获取的PBMC加入4%PBS-B漂洗、离心重悬，行计数浓度调整至106个/ml，为下一步进行流式细胞技术的表型分析备用。1.2.4外周血T淋巴细胞LAG3与PD-1表型鉴定在获取乳腺癌患者和对照组的PBMC后，通过流式抗体标记后行LAG3与
重庆医科大学博士研究生学位论文28≥50[n,(%)]37(45.1)20(42.5)8(44.4)肿瘤最大直径(cm)＜2[n,(%)]48(58.5)26(55.3)N/A0.723**≥2[n,(%)]34(41.5)21(44.7)N/A临床分期Ⅰ期[n,(%)]23(28.0)15(31.9)N/A0.538**Ⅱ期[n,(%)]42(51.2)21(44.7)N/AⅢ期[n,(%)]13(15.9)11(23.4)N/AⅣ期[n,(%)]4(4.9)N/A***N/A分子分型ER+或PR+[n,(%)]39(47.6)21(44.7)N/AHER2+[n,(%)]21(25.6)12(25.5)N/A0.929**TN[n,(%)]22(26.8)14(29.8)N/A注：数量：n（例）；y:year（岁）；N/A：NotApplicable（不适用）；*：t-检验；**：卡方检验；***：IV期病人未行手术切除，也就未获得其组织标本。2.2不同临床分期与分子分型乳腺癌患者PBL中LAG3+PD-1+T细胞比例没有显著差异性图3.流式细胞技术分析外周血中LAG3与PD-1双阳性表达T细胞的百分比Figure3.FlowcytometryanalysisofthepercentageofLAG3andPD-1doublepositiveTcellsinperipheralblood.Representativeflowcytometryimages.我们通过流式细胞技术分析发现，乳腺癌患者和健康自愿者的外周血T细胞中LAG3与PD-1双阳性T细胞（Tcells,TC）的比例均非常低，无论在不同临床
【参考文献】：
期刊论文
[1]PD-L1/PD-1在三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 张蝶,高雅茹,刘丽,袁夏,贾婷婷,王之颖,曾海荣,王旭慧,王玮,袁易. 肿瘤学杂志. 2019(11)
[2]PD-1和PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用机制及临床意义[J]. 乌日罕,呼群,马强,赵甡慧. 现代肿瘤医学. 2019(09)
[3]PD-1、CTLA-4和MMP9在伴或不伴淋巴结转移乳腺癌患者外泌体中的表达[J]. 王爱红,赵菊梅,王明全. 现代免疫学. 2019(02)
[4]SHP2 inhibition triggers anti-tumor immunity and synergizes with PD-1 blockade[J]. Mingxia Zhao,Wenjie Guo,Yuanyuan Wu,Chenxi Yang,Liang Zhong,Guoliang Deng,Yuyu Zhu,Wen Liu,Yanhong Gu,Yin Lu,Lingdong Kong,Xiangbao Meng,Qiang Xu,Yang Sun. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(02)
[5]非小细胞肺癌组织中PD-1/PD-L1的表达及临床意义[J]. 吴菡,吴健,石永利,刘文杰. 临床肿瘤学杂志. 2019(03)
[6]PD-1/PD-L1在治疗三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 林炳静,徐寒梅,孙晴波,胡加亮. 药物生物技术. 2019(01)
[7]免疫治疗相关蛋白PD-1/PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 陶海云,屈中玉,吴艳林,蔡政. 癌症进展. 2019(02)
[8]乳腺癌中p53、PD-1和PD-L1的表达及相关性分析[J]. 程敏,史玉洁,孔令非. 临床与实验病理学杂志. 2018(12)
[9]PD-1/PD-L1在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及意义[J]. 李莹莹,董丽儒,李宇阳,熊艳杰,宋旭东. 广东医学. 2018(11)
[10]PD-1/PD-L1在三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 宋林霞,吕水萍,马虎. 医学研究杂志. 2018(06)
本文编号：3367369
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
参与T细胞耗竭相关抑制性分子及其受体[31]
重庆医科大学博士研究生学位论文22可见离心管中液体至下而上分成五层：最下层是红细胞层，第二次层是微白膜层的粒细胞，第三层是分离液，第四层是白膜层，也就是我们需要的富含外周血单核细胞（PBMC）的细胞层，最上层为血浆层，富含血小板；如图1所示；图2.密度梯度离心后的分层情况Figure2.Layeredsolutionsituationafterthedensitygradientcentrifugation(5)将最上面的血浆层轻柔吸弃，再用吸管沿管壁周轻轻吸取第二层的单个核细胞，并移入另一支15ml的试管中；(6)加入5倍以上体积的Hank’s液，充分混匀，1800r/min离心10min，吸弃上清液；(7)重复使用3ml的Hank’s液洗涤一次，1400r/min离心10min，吸弃上清液；(8)再次加入1-2ml的Hank’s液重悬，用移液管吸取20μl进行浓度定量，从计数板边缘缓慢滴入；(9)在显微镜下用10x物镜观察计数板四个大方格中的细胞数（压线细胞我们采取记上不记下，计左不计右策略）：细胞数/L=（4大格细胞数之和/4）x107；(10)对获取的PBMC加入4%PBS-B漂洗、离心重悬，行计数浓度调整至106个/ml，为下一步进行流式细胞技术的表型分析备用。1.2.4外周血T淋巴细胞LAG3与PD-1表型鉴定在获取乳腺癌患者和对照组的PBMC后，通过流式抗体标记后行LAG3与
重庆医科大学博士研究生学位论文28≥50[n,(%)]37(45.1)20(42.5)8(44.4)肿瘤最大直径(cm)＜2[n,(%)]48(58.5)26(55.3)N/A0.723**≥2[n,(%)]34(41.5)21(44.7)N/A临床分期Ⅰ期[n,(%)]23(28.0)15(31.9)N/A0.538**Ⅱ期[n,(%)]42(51.2)21(44.7)N/AⅢ期[n,(%)]13(15.9)11(23.4)N/AⅣ期[n,(%)]4(4.9)N/A***N/A分子分型ER+或PR+[n,(%)]39(47.6)21(44.7)N/AHER2+[n,(%)]21(25.6)12(25.5)N/A0.929**TN[n,(%)]22(26.8)14(29.8)N/A注：数量：n（例）；y:year（岁）；N/A：NotApplicable（不适用）；*：t-检验；**：卡方检验；***：IV期病人未行手术切除，也就未获得其组织标本。2.2不同临床分期与分子分型乳腺癌患者PBL中LAG3+PD-1+T细胞比例没有显著差异性图3.流式细胞技术分析外周血中LAG3与PD-1双阳性表达T细胞的百分比Figure3.FlowcytometryanalysisofthepercentageofLAG3andPD-1doublepositiveTcellsinperipheralblood.Representativeflowcytometryimages.我们通过流式细胞技术分析发现，乳腺癌患者和健康自愿者的外周血T细胞中LAG3与PD-1双阳性T细胞（Tcells,TC）的比例均非常低，无论在不同临床
【参考文献】：
期刊论文
[1]PD-L1/PD-1在三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 张蝶,高雅茹,刘丽,袁夏,贾婷婷,王之颖,曾海荣,王旭慧,王玮,袁易. 肿瘤学杂志. 2019(11)
[2]PD-1和PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用机制及临床意义[J]. 乌日罕,呼群,马强,赵甡慧. 现代肿瘤医学. 2019(09)
[3]PD-1、CTLA-4和MMP9在伴或不伴淋巴结转移乳腺癌患者外泌体中的表达[J]. 王爱红,赵菊梅,王明全. 现代免疫学. 2019(02)
[4]SHP2 inhibition triggers anti-tumor immunity and synergizes with PD-1 blockade[J]. Mingxia Zhao,Wenjie Guo,Yuanyuan Wu,Chenxi Yang,Liang Zhong,Guoliang Deng,Yuyu Zhu,Wen Liu,Yanhong Gu,Yin Lu,Lingdong Kong,Xiangbao Meng,Qiang Xu,Yang Sun. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(02)
[5]非小细胞肺癌组织中PD-1/PD-L1的表达及临床意义[J]. 吴菡,吴健,石永利,刘文杰. 临床肿瘤学杂志. 2019(03)
[6]PD-1/PD-L1在治疗三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 林炳静,徐寒梅,孙晴波,胡加亮. 药物生物技术. 2019(01)
[7]免疫治疗相关蛋白PD-1/PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 陶海云,屈中玉,吴艳林,蔡政. 癌症进展. 2019(02)
[8]乳腺癌中p53、PD-1和PD-L1的表达及相关性分析[J]. 程敏,史玉洁,孔令非. 临床与实验病理学杂志. 2018(12)
[9]PD-1/PD-L1在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及意义[J]. 李莹莹,董丽儒,李宇阳,熊艳杰,宋旭东. 广东医学. 2018(11)
[10]PD-1/PD-L1在三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 宋林霞,吕水萍,马虎. 医学研究杂志. 2018(06)
本文编号：3367369
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