Ang Ⅱ诱导非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的机制研究及20（S）-原人参二醇的干预作用

发布时间：2021-08-28 04:07

　　第一部分AngⅡ诱导非小细胞肺癌细胞上皮间质转化及机制研究目的:转移和侵袭已成为恶性肿瘤的基本特征和重要标志,上皮间质转化（EMT）已被证实可促进肿瘤细胞的局部浸润和癌症的全身散播。肾素-血管紧张素系统（RAS）是体内一个重要的神经-体液调节系统,其中血管紧张素II（Ang II）是其主要的效应分子。近年来发现Ang II在局部组织,特别是肿瘤组织中表达明显,已被证实对肿瘤的发生、发展和转移起到重要作用,但其对肿瘤细胞EMT的作用则鲜有研究。目前RAS在肿瘤中的相关研究主要集中于血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）对肿瘤细胞的影响,而AngⅡ对肿瘤细胞直接影响的研究较少。因此,本研究探讨AngⅡ对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞EMT的影响和相关作用机制,旨在从新的角度完善RAS在肿瘤领域的研究,以期为肿瘤治疗提供新的理论基础和可能的治疗策略。方法:以A549细胞和H460细胞为研究对象开展如下实验:（1）采用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移运动能力;（2）采用Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力;（3）采用Western b... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 绪论
    综述1 肾素-血管紧张素系统与肺癌关系研究进展
        1.1 肾素-血管紧张素系统
        1.2 血管紧张素合成酶与肺癌的关系
        1.3 AngⅡ与肺癌细胞生长有关
        1.4 ACEI和 ARBS对肺癌发生的影响
        1.5 ACEI和 ARBs对肺肿瘤的影响血管生成
        1.6 Ang(1-7)和肺癌
        1.7 展望
    综述2 SIRT1:抑制癌细胞上皮间质转化的潜在靶点
第2章 AngⅡ对非小细胞肺癌EMT的影响
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 细胞株
        2.2.2 实验动物及饲料
        2.2.3 主要试剂与仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞复苏、传代及冻存
        2.3.2 形态学观察
        2.3.3 细胞划痕实验
        2.3.4 Transwell迁移实验
        2.3.5 EMT相关基因RNA水平(qRT-PCR)检测
        2.3.6 Western blot检测
        2.3.7 裸鼠体内A549 细胞尾静脉肺转移实验
        2.3.8 HE染色
        2.3.9 统计方法
    2.4 实验结果
        2.4.1 Ang Ⅱ对 NSCLC细胞迁移能力的影响
        2.4.2 Ang Ⅱ对 NSCLC细胞侵袭能力的影响
        2.4.3 Ang Ⅱ对非小细胞肺癌EMT的影响
        2.4.4 裸鼠尾静脉转移实验检测AngⅡ对A549 细胞体内转移的影响
    2.5 讨论
    2.6 小结
第3章 AngⅡ诱导A549 细胞EMT机制研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 主要试剂与仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞复苏、传代及冻存
        3.3.2 细胞划痕实验
        3.3.3 Transwell迁移实验
        3.3.4 TGF-β1及EMT相关基因mRNA水平(qRT-PCR)检测
        3.3.5 Western Blot检测
        3.3.6 免疫荧光实验
        3.3.7 培养液上清中TGF-β1 含量检测
        3.3.8 统计方法
    3.4 实验结果
        3.4.1 Ang Ⅱ对 A549 细胞中TGF-β1 表达的影响
        3.4.2 TGF-β受体拮抗剂(SB431542)对Ang Ⅱ诱导的A549 细胞EMT及迁移能力的影响
        3.4.3 Ang Ⅱ对A549 细胞中p-Smad2 表达的影响
        3.4.4 Ang Ⅱ对A549 细胞中SIRT1 表达的影响
        3.4.5 SIRT1 抑制剂(EX527)对Ang Ⅱ诱导的A549 细胞EMT及迁移能力的影响
        3.4.6 SB431542 对Ang Ⅱ诱导EMT过程中SIRT1 蛋白表达的影响
    3.5 讨论
    3.6 小结
第4章 PPD抑制Ang Ⅱ诱导A549 细胞EMT
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 细胞株
        4.2.2 实验动物及饲料
        4.2.3 主要试剂与仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞复苏、传代及冻存
        4.3.2 细胞划痕实验
        4.3.3 Transwell实验
        4.3.5 Western Blot检测
        4.3.6 免疫荧光实验
        4.3.7 EMT相关mRNA水平(qRT-PCR)检测
        4.3.8 裸鼠体内A549 细胞尾静脉转移实验
        4.3.9 HE染色
        4.3.10 统计方法
    4.4 实验结果
        4.4.1 PPD对Ang Ⅱ诱导的A549 细胞迁移能力的影响
        4.4.2 PPD对Ang Ⅱ诱导的A549 细胞EMT的影响
        4.4.3 PPD对Ang Ⅱ诱导的A549 细胞裸鼠转移瘤形成的影响
    4.5 讨论
    4.6 小结
第5章 PPD抑制Ang Ⅱ诱导A549 细胞EMT机制研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料
        5.2.1 细胞株
        5.2.2 主要试剂与仪器
            5.2.2.1 药品与试剂
            5.2.2.2 抗体
            5.2.2.3 qRT-PCR引物
            5.2.2.4 主要仪器设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 细胞复苏、传代及冻存
        5.3.2 细胞划痕实验
        5.3.3 Transwell迁移实验
        5.3.4 EMT相关基因RNA水平(QPCR)检测
        5.3.5 Western Blot检测
        5.3.6 SIRT1 过表达质粒的转染
        5.3.7 培养液上清中TGF-β1 含量检测
        5.3.8 统计方法
    5.4 实验结果
        5.4.1 PPD抑制Ang Ⅱ诱导的A549 细胞自分泌TGF-β1
        5.4.2 PPD抑制Ang Ⅱ诱导的A549 细胞SIRT1上调
    5.5 讨论
    5.6 小结
第6章 结论
本论文创新性
参考文献
作者简介及在读期间取得科研成果
致谢



本文编号：3367758