HIV/AIDS患者自身抗体介导的噬红细胞作用增加结核病易感性的研究
发布时间：2021-08-29 19:59
研究背景:结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,目前仍然是全球十大死因之一。HIV感染作为增加结核病发病风险的重要危险因素,与结核病的发生发展密切相关。长期以来,HIV感染引起的CD4 T细胞耗竭一直被认为是HIV增加结核病发生的主要原因。然而,在伴有正常数量CD4 T细胞的HIV/AIDS患者中,结核病发生风险依然显著增加。除了CD4 T细胞之外,HIV感染可以引起巨噬细胞功能改变。巨噬细胞是机体清除入侵结核菌的关键效应细胞,其功能和命运与结核病的转归密不可分。HIV感染如何损坏巨噬细胞抗结核功能仍需探讨。另一方面,HIV感染可诱导多种自身抗体的产生。20%-40%HIV/AIDS患者血清可检测到红细胞抗体自身抗体,后者可致敏红细胞,加速其在巨噬细胞中的破坏和清除,该过程也被称为噬红细胞作用（erythrophagocytosis）。我们推测,红细胞自身抗体介导巨噬细胞噬红细胞作用,损坏巨噬细胞抗结核免疫,进而增加结核病发病风险。研究目的:1.明确HIV/AIDS患者红细胞自身抗体与结核病发生风险的关系;2.明确红细胞自身抗体介导的噬红细胞作用对巨噬细胞抗结核活性的影响;3.阐明噬...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图Ⅱ.自身免疫性溶血性贫血的发病机制及DAT检测原理
广州医科大学博士学位论文42借助PKH26染料，RBC均可被荧光素均匀、充分的标记，标记效率高达99.5%（图2-1A）。RBC通过与PMA诱导后的THP-1巨噬细胞共孵育6h后，裂解未被吞噬的RBC，流式细胞仪检测巨噬细胞RBC吞噬率。结果显示，在RBC:巨噬细胞比例为10:1和100:1的条件下，巨噬细胞对DAT阳性HIV/AIDS患者来源的RBC吞噬率均高于DAT阴性HIV/AIDS患者和健康对照者，且有统计学差异（均有p<0.0001）；DAT阴性HIV/AIDS患者RBC吞噬率与健康对照者相比，无显著性差异（图2-1B和C）。我们还发现，HIV/AIDS合并TB与否对RBC吞噬率无影响，可能与病例数过少有关（图2-1D）。图2-1DAT阳性HIV/AIDS患者来源的红细胞更易被巨噬细胞吞噬Figure2-1.RBCsfrompatientswithHIVwithapositivedirectantiglobulintest(DAT)resultincreaseerythrophagocytosisbymacrophages.(A)RBCslabeledwithPKH26wereassessedbyconfocalfluorescencemicroscopyandflowcytometry(labelingyield,99.6%).(B)ExvivophagocytosisofPKH26-labeledRBCsfromhealthydonors(n=33)andpatientswithHIVwithnegative(n=36)andpositive(n=11)DATresultsuponincubationwithPMA-differentiatedTHP-1
第二章HIV/AIDS患者红细胞自身抗体介导的噬红细胞作用抑制巨噬细胞抗结核活性43macrophagesfor6hatRBC/macrophage(R/M)ratiosof10:1and100:1revealedbyforwardscatter(FSC)dataandquantifiedbyflowcytometry.(C)and(D)ExvivophagocytosisofRBCsfromtheindicatedsubjectswasstratifiedbyDATresultsandTBstatus,respectively.****p<0.0001.此外，我们纳入的8例DAT均为阴性TB患者，采用同样的方法检测其RBC被巨噬细胞吞噬的情况，结果显示，巨噬细胞对TB患者和健康对照者来源的RBC吞噬率无显著性差异（p>0.05,图2-2）。这些结果提示，在HIV/AIDS患者中，仅RBC自身抗体的出现与RBC吞噬率有关。图2-2巨噬细胞对TB患者和健康对照者来源的RBC吞噬率无差异Figure2-2.Thereisnodifferenceinmacrophage-mediatedphagocytosisofRBCsfrompatientswithTBandhealthycontrols.ExvivophagocytosisofPKH26-labeledRBCsfromhealthydonors(n=8)andpatientswithTB(n=8)uponincubationwithPMA-differentiatedTHP-1macrophagesfor6hatRBC/macrophage(R/M)ratiosof10:1and100:1quantifiedbyflowcytometry.2.2.2HIV/AIDS患者红细胞吞噬率与DAT结果呈正相关DAT结果可依据RBC凝集程度分为-、1+、2+、3+和4+，凝集程度越强，提示致敏RBC表面吸附自身抗体量越多（图2-3A）。11例DAT阳性HIV/AIDS患者中，1+、2+和3+病例数分别为7、3和1例。尽管病例数少，统计结果仍能显示，在RBC:巨噬细胞比例为10:1和100:1的条件下，RBC吞噬率均与DAT结果呈显著正相关（R=0.99,p=0.0012;R=0.99,p=0.0025,图2-3B）。该结果符合预期，即HIV/AIDS患者体内，RBC自身抗体可致敏RBC，引起巨噬细胞对RBC吞噬作用增强。
本文编号：3371286
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图Ⅱ.自身免疫性溶血性贫血的发病机制及DAT检测原理
广州医科大学博士学位论文42借助PKH26染料，RBC均可被荧光素均匀、充分的标记，标记效率高达99.5%（图2-1A）。RBC通过与PMA诱导后的THP-1巨噬细胞共孵育6h后，裂解未被吞噬的RBC，流式细胞仪检测巨噬细胞RBC吞噬率。结果显示，在RBC:巨噬细胞比例为10:1和100:1的条件下，巨噬细胞对DAT阳性HIV/AIDS患者来源的RBC吞噬率均高于DAT阴性HIV/AIDS患者和健康对照者，且有统计学差异（均有p<0.0001）；DAT阴性HIV/AIDS患者RBC吞噬率与健康对照者相比，无显著性差异（图2-1B和C）。我们还发现，HIV/AIDS合并TB与否对RBC吞噬率无影响，可能与病例数过少有关（图2-1D）。图2-1DAT阳性HIV/AIDS患者来源的红细胞更易被巨噬细胞吞噬Figure2-1.RBCsfrompatientswithHIVwithapositivedirectantiglobulintest(DAT)resultincreaseerythrophagocytosisbymacrophages.(A)RBCslabeledwithPKH26wereassessedbyconfocalfluorescencemicroscopyandflowcytometry(labelingyield,99.6%).(B)ExvivophagocytosisofPKH26-labeledRBCsfromhealthydonors(n=33)andpatientswithHIVwithnegative(n=36)andpositive(n=11)DATresultsuponincubationwithPMA-differentiatedTHP-1
第二章HIV/AIDS患者红细胞自身抗体介导的噬红细胞作用抑制巨噬细胞抗结核活性43macrophagesfor6hatRBC/macrophage(R/M)ratiosof10:1and100:1revealedbyforwardscatter(FSC)dataandquantifiedbyflowcytometry.(C)and(D)ExvivophagocytosisofRBCsfromtheindicatedsubjectswasstratifiedbyDATresultsandTBstatus,respectively.****p<0.0001.此外，我们纳入的8例DAT均为阴性TB患者，采用同样的方法检测其RBC被巨噬细胞吞噬的情况，结果显示，巨噬细胞对TB患者和健康对照者来源的RBC吞噬率无显著性差异（p>0.05,图2-2）。这些结果提示，在HIV/AIDS患者中，仅RBC自身抗体的出现与RBC吞噬率有关。图2-2巨噬细胞对TB患者和健康对照者来源的RBC吞噬率无差异Figure2-2.Thereisnodifferenceinmacrophage-mediatedphagocytosisofRBCsfrompatientswithTBandhealthycontrols.ExvivophagocytosisofPKH26-labeledRBCsfromhealthydonors(n=8)andpatientswithTB(n=8)uponincubationwithPMA-differentiatedTHP-1macrophagesfor6hatRBC/macrophage(R/M)ratiosof10:1and100:1quantifiedbyflowcytometry.2.2.2HIV/AIDS患者红细胞吞噬率与DAT结果呈正相关DAT结果可依据RBC凝集程度分为-、1+、2+、3+和4+，凝集程度越强，提示致敏RBC表面吸附自身抗体量越多（图2-3A）。11例DAT阳性HIV/AIDS患者中，1+、2+和3+病例数分别为7、3和1例。尽管病例数少，统计结果仍能显示，在RBC:巨噬细胞比例为10:1和100:1的条件下，RBC吞噬率均与DAT结果呈显著正相关（R=0.99,p=0.0012;R=0.99,p=0.0025,图2-3B）。该结果符合预期，即HIV/AIDS患者体内，RBC自身抗体可致敏RBC，引起巨噬细胞对RBC吞噬作用增强。
本文编号：3371286
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