环状RNA circFGD4通过miR-532-3p/APC/β-catenin信号通路调控胃癌增殖、迁移及上皮间质转化
发布时间：2021-09-06 08:26
背景:胃癌（Gastric cancer,GC）是全球范围内较为常见的恶性肿瘤之一,也是引起中国乃至世界范围内癌症死亡的主要疾病。尽管胃癌的诊断和综合治疗策略显著提高,但多数进展期胃癌病人经治疗后5年总生存率仅约30%。胃癌病人预后不良的因素与快速增殖能力,淋巴/血源性转移和直接侵袭等恶性生物学行为相关,但引起胃癌发生、发展以及复发、转移等恶性生物学行为的分子机制尚不完全清楚。环状RNA作为一类具有环状结构的非编码RNA,近期在多种肿瘤中报道其可以作为肿瘤的诊断标志物和治疗干预靶点。基于此,我们联合课题组胃癌circRNA芯片结果和GEO数据库中胃癌circRNA芯片结果,筛选并发现了显著差异表达的hsacirc0000390（注:来源于chr12:32760890|32764217,由亲本基因FGD4的8,9,10号外显子反向剪切成环构成,大小为345 bp,命名为circFGD4）作为研究对象。本课题拟探究circFGD4在胃癌中的表达、具有的生物学特性、以及参与调控胃癌的潜在机制,期待通过本研究可以为胃癌诊疗提供新思路和新依据。目的:阐...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
C图1.1CircFGD4特征和表达
重庆医科大学博士研究生学位论文70图3.2F图3.2CircFGD4竞争性结合miR-532-3p调控APC表达。Figure3.2CircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression.A.生信显示miR-532-3p和APC结合关系;B.qRT-PCR显示miR-532-3p调控APC表达;C.WB显示circFGD4竞争性结合miR-532-3p调控APC表达;D.APC野生型和突变型荧光素酶载体的示意图;E.荧光素酶实验显示miR-532-3p和APC结合关系;F.IF显示circFGD4竞争性结合miR-532-3p调控APC表达;*P<0.05,**P<0.01.A.BioinformaticsanalysisshowedthebindingrelationshipbetweenmiR-532-3pandAPC;B.qRT-PCRshowedthatmiR-532-3pregulatedAPCexpression;C.WBanalysisshowedthatcircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression;D.SchematicdiagramofluciferaseconstructionofAPCwild-typeandmutantvectors;E.LuciferaseexperimentsshowedthebindingrelationshipbetweenmiR-532-3pandAPC;F.IFshowedthatcircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression;*P<0.05,**P<0.01.2.3在胃癌中circFGD4竞争性结合miR-532-3p调控β-catenin通路为了验证circFGD4在胃癌中能否调控β-catenin通路，我们构建并TOP/Flash和FOP/Flash报告基因，检测胃癌细胞中是否激活了Wnt/β-catenin通路。在HEK-293T，MGC803和AGS细胞中沉默或过表达转染circFGD4后，TOP/FOP转录活性增强或降低（图3.3A）。进一步实验表明MGC803和AGS细胞转染过表达circFGD4载体逆转了miR-532-3pmimic诱导的TOP/FOP转录活性的增加（图3.3B,3.3C）。敲除circFGD4还可以逆转MGC803和AGS细胞中miR-532-3p
qRT-PCR检测在多种胃癌细胞(MKN28,SGC7901,AGS,MKN45,MGC803和BGC823)及GES-1细胞中circFGD4表达,发现在胃癌细胞中circFGD4表达低于GES-1细胞(图1.2A)。FISH检测发现circFGD4主要定位于胃癌细胞的胞浆(图1.2B)。2.3 CircFGD4与亲本基因FGD4在胃癌中的关系
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of circular RNAs in gastric cancer: Recent advances and prospects[J]. Ke-Wei Wang,Ming Dong. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2019(06)
[2]Circulating micro RNAs and long non-coding RNAs in gastric cancer diagnosis:An update and review[J]. Ya-Kai Huang,Jian-Chun Yu. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
本文编号：3387117
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
C图1.1CircFGD4特征和表达
重庆医科大学博士研究生学位论文70图3.2F图3.2CircFGD4竞争性结合miR-532-3p调控APC表达。Figure3.2CircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression.A.生信显示miR-532-3p和APC结合关系;B.qRT-PCR显示miR-532-3p调控APC表达;C.WB显示circFGD4竞争性结合miR-532-3p调控APC表达;D.APC野生型和突变型荧光素酶载体的示意图;E.荧光素酶实验显示miR-532-3p和APC结合关系;F.IF显示circFGD4竞争性结合miR-532-3p调控APC表达;*P<0.05,**P<0.01.A.BioinformaticsanalysisshowedthebindingrelationshipbetweenmiR-532-3pandAPC;B.qRT-PCRshowedthatmiR-532-3pregulatedAPCexpression;C.WBanalysisshowedthatcircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression;D.SchematicdiagramofluciferaseconstructionofAPCwild-typeandmutantvectors;E.LuciferaseexperimentsshowedthebindingrelationshipbetweenmiR-532-3pandAPC;F.IFshowedthatcircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression;*P<0.05,**P<0.01.2.3在胃癌中circFGD4竞争性结合miR-532-3p调控β-catenin通路为了验证circFGD4在胃癌中能否调控β-catenin通路，我们构建并TOP/Flash和FOP/Flash报告基因，检测胃癌细胞中是否激活了Wnt/β-catenin通路。在HEK-293T，MGC803和AGS细胞中沉默或过表达转染circFGD4后，TOP/FOP转录活性增强或降低（图3.3A）。进一步实验表明MGC803和AGS细胞转染过表达circFGD4载体逆转了miR-532-3pmimic诱导的TOP/FOP转录活性的增加（图3.3B,3.3C）。敲除circFGD4还可以逆转MGC803和AGS细胞中miR-532-3p
qRT-PCR检测在多种胃癌细胞(MKN28,SGC7901,AGS,MKN45,MGC803和BGC823)及GES-1细胞中circFGD4表达,发现在胃癌细胞中circFGD4表达低于GES-1细胞(图1.2A)。FISH检测发现circFGD4主要定位于胃癌细胞的胞浆(图1.2B)。2.3 CircFGD4与亲本基因FGD4在胃癌中的关系
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of circular RNAs in gastric cancer: Recent advances and prospects[J]. Ke-Wei Wang,Ming Dong. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2019(06)
[2]Circulating micro RNAs and long non-coding RNAs in gastric cancer diagnosis:An update and review[J]. Ya-Kai Huang,Jian-Chun Yu. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
本文编号：3387117
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