DDB1-DCAF2复合物在早期B细胞发育中的功能研究
发布时间：2021-09-07 03:25
小鼠B淋巴细胞有两种来源,出生前,B淋巴细胞由胎肝中的造血干细胞（Hematopoietic stem cell,HSC）发育而来,出生后,骨髓中的HSC则不断发育为B细胞,为外周提供成熟的B细胞,参与体液免疫,维持机体稳态。Prepro-B细胞被认为是最出现的B细胞前体,高表达B220和其他B细胞相关分子。Prepro-B细胞随之发育为pro-B细胞,在pro-B细胞阶段会发生免疫球蛋白重链的V-DJ重排,形成μ链。此时细胞还没有成熟的轻链,有两个替代型轻链λ链和Vpre B,μ链和这两个替代型轻链组装成pre-BCR。此时B细胞发育进入pre-B细胞阶段,在pre-BCR信号刺激下,pre-B细胞进行增殖,同时进行轻链的重排,形成成熟的BCR,在经历阳性选择后发育为immature B细胞、mature B细胞。DDB1,是DNA损伤结合蛋白1的简称,与DDB2形成损伤修复复合体,参与UV引起的DNA损伤修复,后续研究发现DDB1作为一个接头蛋白,参与CRL4E3泛素连接酶的形成,β螺旋B和CUL4的N端结合,β螺旋A和C则形成一个钳子样结构和各种DDB1和CUL4相关因子（DDB...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：133 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1Ddb1fl/fl小鼠和Dcaf2fl/fl小鼠构建策略
浙江大学博士学位论文2材料和方法9图2.1.3.1质粒图谱。Figure2.2.2Thephysicalmapsofseveralplasmids.(a)Themapofp3xFLAG-CMV-7.1.(b)ThemapofpcDNA3.1/myc-HisC.(c)ThemapofpMLP.2.1.3.2菌株大肠杆菌感受态DH5α购买自北京全式金生物公司。2.1.3.3引物合成及序列测定本实验所用引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，DNA序列测定由上海铂尚生物技术有限公司完成。2.1.3.4试剂盒HiScriptIIQRTSuperMixforqPCR，购买于南京诺唯赞生物科技有限公司。ClonExpressIIOneStepCloningKit，购买于南京诺唯赞生物科技有限公司。PCRCleanupKit，购买于Axygen公司。c
浙江大学博士学位论文3实验结果333实验结果3.1DDB1在pro-B阶段高表达DDB1，是一种DNA损伤结合蛋白。最初发现它结合在UV引起的DNA损伤位点46，参与核苷酸切除修复途径（nucleotideexcisionrepair，NER）。随后研究人员发现DDB1可以与CUL4、DDB2相互作用形成E3泛素连接酶复合物，降解着色性干皮症C（XerodermapigmentosumC，XPC）分子，促进损伤修复47。YongCang等人发现DDB1全敲小鼠具有胚胎期致死性，在大脑和晶状体中条件性敲除DDB1后则导致神经和晶状体退化、脑内出血和新生小鼠死亡，他们认为这可能是由于DDB1参与调控分裂细胞的活性和维持基因组稳定性有关，DDB1是干细胞稳态维持的一个重要调控因子48。DDB1在前体细胞LSK中高表达，并且在之后的几种前体细胞如CMP、GMP、pro-B中都维持着较高的表达水平49。为了研究DDB1在B细胞中的可能作用，我们首先检测了DDB1在B细胞各个发育阶段的表达情况（图3.1）。根据不同发育阶段B细胞标志分子表达的不同，流式分选B细胞亚群，通过qPCR和Westernblot分别进行DDB1转录水平和蛋白水平检测。结果显示，与之前的报道一致的是，DDB1在pro-B和pre-B细胞中表达较高，尤其是pro-B阶段，这提示我们DDB1可能参与B淋巴细胞的发育过程。图3.1DDB1在不同发育阶段的B细胞中的表达谱。
本文编号：3388748
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：133 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1Ddb1fl/fl小鼠和Dcaf2fl/fl小鼠构建策略
浙江大学博士学位论文2材料和方法9图2.1.3.1质粒图谱。Figure2.2.2Thephysicalmapsofseveralplasmids.(a)Themapofp3xFLAG-CMV-7.1.(b)ThemapofpcDNA3.1/myc-HisC.(c)ThemapofpMLP.2.1.3.2菌株大肠杆菌感受态DH5α购买自北京全式金生物公司。2.1.3.3引物合成及序列测定本实验所用引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，DNA序列测定由上海铂尚生物技术有限公司完成。2.1.3.4试剂盒HiScriptIIQRTSuperMixforqPCR，购买于南京诺唯赞生物科技有限公司。ClonExpressIIOneStepCloningKit，购买于南京诺唯赞生物科技有限公司。PCRCleanupKit，购买于Axygen公司。c
浙江大学博士学位论文3实验结果333实验结果3.1DDB1在pro-B阶段高表达DDB1，是一种DNA损伤结合蛋白。最初发现它结合在UV引起的DNA损伤位点46，参与核苷酸切除修复途径（nucleotideexcisionrepair，NER）。随后研究人员发现DDB1可以与CUL4、DDB2相互作用形成E3泛素连接酶复合物，降解着色性干皮症C（XerodermapigmentosumC，XPC）分子，促进损伤修复47。YongCang等人发现DDB1全敲小鼠具有胚胎期致死性，在大脑和晶状体中条件性敲除DDB1后则导致神经和晶状体退化、脑内出血和新生小鼠死亡，他们认为这可能是由于DDB1参与调控分裂细胞的活性和维持基因组稳定性有关，DDB1是干细胞稳态维持的一个重要调控因子48。DDB1在前体细胞LSK中高表达，并且在之后的几种前体细胞如CMP、GMP、pro-B中都维持着较高的表达水平49。为了研究DDB1在B细胞中的可能作用，我们首先检测了DDB1在B细胞各个发育阶段的表达情况（图3.1）。根据不同发育阶段B细胞标志分子表达的不同，流式分选B细胞亚群，通过qPCR和Westernblot分别进行DDB1转录水平和蛋白水平检测。结果显示，与之前的报道一致的是，DDB1在pro-B和pre-B细胞中表达较高，尤其是pro-B阶段，这提示我们DDB1可能参与B淋巴细胞的发育过程。图3.1DDB1在不同发育阶段的B细胞中的表达谱。
本文编号：3388748
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