HDAC协调YAP/RON信号通路对smoking诱导胰腺癌肝肺转移及大黄素对其影响的研究

发布时间：2021-09-12 18:13

　　目的:1.观察体内、外实验中smoking复合物NNK、CSE对胰腺癌细胞株的影响,了解其对肝、肺转移和HDAC4抑制剂对EMT和侵袭作用的影响作用。2.了解NNK、CSE对HDAC4的蛋白质水平和Yes-associated Protein（Yap）水平易位至细胞核的作用,以及HDAC4抑制剂对此效应的影响。3.发现NNK、CSE对胰腺癌细胞向小鼠肝、肺转移的影响和HDAC抑制剂对此效应的作用。4.观察大黄素（EMO）对胰腺癌细胞株Bx Pc3,Mia Pa Ca-2的生物学效应及对smoking的促EMT和侵袭作用的影响。5.探讨EMO对HDAC4,YAP,RON在细胞及细胞核中表达的影响和EMO对smoking诱导的胰腺癌肝肺转移的影响作用。方法:用不同剂量的4-（甲基硝基-S-氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）和香烟烟雾复合物提取物（CSE）处理胰腺癌细胞,检测癌细胞存活率,上皮标记物间充质细胞转变（EMT）以及侵袭等情况。在胰腺癌的同系模型中,用NNK和组蛋白脱乙酰酶（HDAC）I/II抑制剂处理小鼠影响的情况下测量包括转移至肺和肝等情况。用一定剂量的EMO处理胰... 

【文章来源】：上海中医药大学上海市

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 HDAC协调YAP/RON信号预防smoking诱导胰腺癌肝肺转移
    1.引言
    2.实验材料
        2.1 实验细胞
        2.2 实验器材
        2.3 实验试剂
        2.4 实验用液体配制
            2.4.1 药品的配制
            2.4.2 细胞培养中主要试剂配方
            2.4.3 Western-Blot实验中常用试剂
    3.实验方法
        3.1 细胞培养
            3.1.1 胰腺癌细胞和CTC的培养与传代
            3.1.2 细胞的复苏
            3.1.3 细胞的冻存
        3.2 细胞增殖检测(MTT Assay)
        3.3 细胞侵袭试验(Invasion Assay)
        3.4 Western-Blot
            3.4.1 smoking和 Saha对胰腺癌细胞株的影响
            3.4.2 细胞收集
            3.4.3 方法
                3.4.3.1 蛋白质免疫印记分析
                3.4.3.2 Bradford法测定蛋白浓度
                3.4.3.3 蛋白质免疫印记凝胶电泳操作步骤
                    3.4.3.3.1 蛋白质SDS-PAGE电泳
                    3.4.3.3.2 蛋白质转膜
                    3.4.3.3.3 抗体杂交
        3.5 细胞核和细胞质的提取(Nuclear and Cytoplasmic Extraction,#78833 Thermo Scientific)
            3.5.1 需要额外材料
            3.5.2 细胞培养制备
            3.5.3 细胞质、细胞核的提取
        3.6 免疫沉淀 Immunoprecipitation(IP)
            3.6.1 试剂
            3.6.2 其他试剂及器械材料
            3.6.3 Western印迹法所需关于免疫沉淀材料
            3.6.4 Catch and Release步骤
    4.动物实验
        4.1 UN-KPC-961细胞培养和收集
            4.1.1 UN-KPC-961的培养和传代
            4.1.2 UN-KPC-961的复苏
            4.1.3 UN-KPC-961细胞的收集
        4.2 动物模型的制备
            4.2.1 动物分组
            4.2.2 NNK注射
            4.2.3 Saha注射
            4.2.4 造模
            4.2.5 给药处理
            4.2.6 分笼及药物注射情况
            4.2.7 标本采集
    5.统计方法
    6.结果
        6.1 细胞实验结果
            6.1.1 smoking对 HDAC4 的影响
            6.1.2 Smoking和Lmk-235对肿瘤细胞存活率和侵袭力的影响
            6.1.3 smoking和 Saha对肿瘤细胞的影响
                6.1.3.1 smoking和 Saha对 Mia Pa Ca-2 的影响
                6.1.3.2 smoking和 Saha对 Bx Pc3 的影响
            6.1.4 smoking和 Saha对 CTC的影响
            6.1.5 smoking和Saha对肿瘤细胞核的影响
                6.1.5.1 smoking和 Saha对 Mia Pa Ca-2 细胞核的影响
                6.1.5.2 smoking和 Saha对 Bx Pc3 细胞核的影响
            6.1.6 smoking和 Saha对 CTC细胞核的影响
            6.1.7 Smoking和Saha对肿瘤细胞和CTC细胞核HDAC4/Yap蛋白复合物的影响
                6.1.7.1 Smoking和Saha对肿瘤细胞HDAC4/Yap蛋白复合物的影响
                6.1.7.2 smoking和 Saha对 CTC细胞核HDAC4/YAP蛋白复合物的影响
            6.1.8 smoking和 Saha对 EMT的影响
                6.1.8.1 smoking和 Saha在 Mia Pa Ca-2 中对EMT的影响
                6.1.8.2 smoking和 Saha在 Bx Pc3 中对EMT的影响
        6.2 动物实验结果
    7.结论
    8.讨论
    9.参考文献
第二部分 大黄素对HDAC协调YAP/RON信号通路预防smoking诱导胰腺癌肝肺转移影响的研究
    1.引言
    2.实验材料
        2.1 实验细胞
        2.2 实验器材
        2.3 实验试剂
        2.4 实验用液体配制
            2.4.1 药品的配制
            2.4.2 细胞培养中主要试剂配方
            2.4.3 Western-Blot实验中常用试剂
    3.实验方法
        3.1 细胞培养
            3.1.1 细胞培养和传代
            3.1.2 细胞的复苏
            3.1.3 细胞的冻存
        3.2 细胞增殖的检测(MTT Assay)
        3.3 Emodin对胰腺癌细胞形态学的影响
        3.4 细胞侵袭试验(Invasion Assay)
        3.5 细胞核和细胞质的提取(Nuclear and Cytoplasmic Extraction#78833 Thermo Scientific)
            3.5.1 需要额外材料
            3.5.2 细胞培养制备
            3.5.3 细胞质、细胞核的提取
        3.6 Western-Blot
            3.6.1 smoking和 Emodin对胰腺癌细胞的影响
            3.6.2 细胞收集
            3.6.3 方法
                3.6.3.1 蛋白质免疫印记分析
                3.6.3.2 Bradford法测定蛋白浓度
                3.6.3.3 蛋白质免疫印记凝胶电泳操作步骤
                    3.6.3.3.1 蛋白质SDS-PAGE电泳
                    3.6.3.3.2 蛋白质转膜
                    3.6.3.3.3 抗体杂交
    4.动物实验
        4.1 UN-KPC-961细胞培养和收集
            4.1.1 UN-KPC-961的培养和传代
            4.1.2 UN-KPC-961细胞的复苏
            4.1.3 UN-KPC-961细胞的收集
        4.2 动物模型的制备
            4.2.1 动物分组
            4.2.2 药物注射
            4.2.3 Emodin给药
            4.2.4 动物造模
            4.2.5 NNK和Emodin维持用药
            4.2.6 分笼及药物注射
            4.2.7 标本采集
    5.统计方法
    6.结果
        6.1 实验结果
            6.1.1 细胞实验结果
            6.1.2 动物实验结果
    7.结论
    8.讨论
    9.参考文献
创新点
致谢
附录一 胰腺癌生物学诊断治疗进展
    参考文献
附录二


【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China in 2013:an analysis based on urbanization level[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Tingting Zuo,Changfa Xia,Zhixun Yang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2017(01)
[2]Update on the management of pancreatic cancer:Surgery is not enough[J]. Daniel Ansari,Adam Gustafsson,Roland Andersson.  World Journal of Gastroenterology. 2015(11)
[3]Anti-proliferation effects of Twist gene silencing in gastric cancer SGC7901 cells[J]. Hui Zhang,Jian Gong,Di Kong,Hong-Yi Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(10)
[4]胰腺癌中医临床治疗研究概况[J]. 方靖,阮善明,沈敏鹤.  中医学报. 2015(03)
[5]Epithelial-mesenchymal transition-activating transcription factors-multifunctional regulators in cancer[J]. Minal Garg.  World Journal of Stem Cells. 2013(04)
[6]联合手术、术中后区域化疗、中药治疗胰腺癌临床研究[J]. 李荣,李称才,何涛,李文强,王振龙,陈博艺.  中国医药科学. 2013(11)
[7]Lung carcinoma signaling pathways activated by smoking[J]. Jing Wen 1,2,3,Jian-Hua Fu 2,3,Wei Zhang 1 and Ming Guo 1 1 Department of Pathology,The University of Texas MD Anderson Cancer Center,Houston,TX 77030-4009,USA;2 State Key Laboratory of Oncology in South China,3 Department of Thoracic Oncology,Sun Yat-sen University Cancer Center,Guangzhou,Guangdong 510060,P.R.China..  癌症. 2011(08)
[8]大黄素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响[J]. 刘岸,邓姿峰,胡金喜,韩邵伟,黄莉莉,柯品妤,林胜璋.  中草药. 2011(04)
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本文编号：3394702