CT55在结肠炎相关肿瘤中的作用机制研究

发布时间：2021-09-21 23:25

　　结直肠癌（CRC）作为一种常见的消化道恶性肿瘤,在全球范围内具有较高的发生率。近年来,我国结直肠癌发病率也呈现出不断上升的趋势。研究表明,CRC的发病大多与环境因素有关,仅有20-30%的CRC病例与家族遗传相关。在炎症性肠病背景下发生的结直肠癌则称为结肠炎相关结直肠癌（CAC）,CAC作为CRC的一种亚型,也是近年来的研究热点之一。在先前对癌睾丸抗原（CT抗原）的研究中,研究者发现CT抗原在多种肿瘤包括结直肠癌的免疫治疗中扮演着重要的角色。CT55作为潜在的CT抗原,研究报道其在结直肠癌中显著表达,然而,对于它在CAC中的功能和作用机制却仍然未知。本论文中,我们借助体内及体外实验,首次探索了CT55在CAC中的功能和作用机制。先前已有大量文献报道CT抗原能在多种肿瘤组织中表达,在结直肠癌相关的研究中,人们发现大量CT抗原如MAGE和SSX家族成员在结直肠癌中显著表达。在本课题中,我们首先对收集到的12对临床结直肠癌病人的癌组织以及邻近非癌组织样品进行荧光定量PCR分析,发现CT55在6对癌组织样品中表达显著上升。同时,为了验证CT55肿瘤抗原的表达特性,我们检测了CT55在小鼠各个正... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 结直肠癌研究现状
        1.1.1 结直肠癌的癌变因素
        1.1.2 结直肠癌的治疗
        1.1.3 结肠炎相关的结直肠癌
        1.1.4 结肠炎相关结直肠癌信号转导机制
    1.2 CT55 研究现状
        1.2.1 肿瘤睾丸抗原
        1.2.2 CT55 的发现
        1.2.3 CT55 的研究现状
    1.3 NF-κB信号通路
        1.3.1 NF-κB信号成员及其调控
        1.3.2 经典和非经典NF-κB通路
        1.3.3 NF-κB和癌症
    1.4 Cas9 基因编辑技术
        1.4.1 基因编辑技术简介
        1.4.2 Cas9 基因编辑技术原理
    1.5 小鼠结肠癌模型
2 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 肠癌组织样品
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验细胞和菌株
        2.1.4 质粒构建
        2.1.5 主要抗体
        2.1.6 试剂和耗材
        2.1.7 仪器和设备
    2.2 方法
        2.2.1 克隆构建
        2.2.2 多克隆抗体制备
        2.2.3 RNA提取、反转录及荧光定量PCR
        2.2.4 Ct55 敲除小鼠的获得
        2.2.5 小鼠AOM/DSS诱导的肠癌模型
        2.2.6 小鼠DSS诱导的肠炎模型
        2.2.7 组织学染色
        2.2.8 细胞培养和转染
        2.2.9 Cas9 制备CT55 敲除细胞系
        2.2.10 细胞生长曲线测定实验
        2.2.11 细胞克隆形成实验
        2.2.12 裸鼠成瘤实验
        2.2.13 KEGG通路和基因富集分析
        2.2.14 荧光素酶报告基因实验
        2.2.15 免疫荧光实验
        2.2.16 免疫共沉淀实验
        2.2.17 蛋白质免疫印迹实验
        2.2.18 基因组提取
        2.2.19 生物学软件
        2.2.20 统计学分析
3 实验结果与讨论
    3.1 前言
    3.2 结果与分析
        3.2.1 CT55 多克隆抗体制备
        3.2.2 CT55 在肠癌中表达升高
        3.2.3 Ct55 敲除小鼠制备
        3.2.4 敲除Ct55 可减轻AOM/DSS诱导的结肠炎相关肿瘤的发生
        3.2.5 Ct55 敲除小鼠肿瘤形成中炎症反应减轻
        3.2.6 Ct55 敲除抑制小鼠CAC肿瘤细胞的增殖
        3.2.7 CT55 缺失抑制结直肠癌细胞的致瘤特征
        3.2.8 CT55对CAC的影响依赖于NF-κB信号通路
        3.2.9 CT55 促进TNF-α诱导的NF-κB的激活
        3.2.10 CT55和IKK相互作用
        3.2.11 CT55 调节IκBα的蛋白稳定性和p65 的核定位
        3.2.12 CT55对NF-κB的调控依赖于IKK
    3.3 讨论与展望
参考文献
缩略词表
攻读博士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Association of type 2 diabetes mellitus and the risk of colorectal cancer: A meta-analysis and systematic review[J]. Salman Yousuf Guraya.  World Journal of Gastroenterology. 2015(19)
[2]p38α MAPK pathway:A key factor in colorectal cancer therapy and chemoresistance[J]. Valentina Grossi,Alessia Peserico,Tugsan Tezil,Cristiano Simone.  World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
[3]Advances and new perspectives in the treatment of metastatic colon cancer[J]. Gonzalo Recondo Jr,Enrique Díaz-Cantón,Máximo de la Vega,Martin Greco,Gonzalo Recondo Sr,Matias E Valsecchi.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2014(07)
[4]Expression of nuclear factor-kappa B and target genes in gastric precancerous lesions and adenocarcinoma:Association with Helicobactor pylori cagA （+） infection[J]. Gui-Fang Yang Chang-Sheng Deng Yong-Yan Xiong Ling-Ling Gong Bi-Cheng Wang Jun Luo Department of Pathology,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei Province,ChinaDepartment of Gastroenterology,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(04)



本文编号：3402696