黄芩素靶向MD2保护心肌缺血/再灌注损伤的机制研究
发布时间：2021-09-23 05:14
第一章黄芩素通过MD2减轻TBHP诱导的H9C2细胞损伤目的:探讨天然产物黄芩素减轻TBHP诱导的H9C2细胞损伤的机制,探寻黄芩素减轻TBHP诱导的H9C2细胞损伤的靶点,阐明MD2在TBHP诱导的H9C2细胞损伤过程中的作用。方法:体外培养大鼠心肌H9C2细胞,用流式细胞仪检测黄芩素对TBHP诱导的大鼠心肌H9C2细胞凋亡的影响,MTT实验检测黄芩素对H9C2细胞的毒性,流式细胞仪检测黄芩素预处理后TBHP诱导的H9C2细胞内ROS,WST法检测大鼠心肌H9C2细胞内SOD,应用MDA试剂盒检测心肌H9C2细胞内MDA,ELISA法检测TBHP诱导的H9C2细胞炎症因子水平,流式细胞仪和JC-1荧光染色法检测TBHP诱导的H9C2细胞线粒体膜电位变化,细胞免疫荧光法检测TBHP诱导的H9C2细胞细胞色素C释放和NF-κB核转移,western blot检测凋亡和内质网应激相关蛋白的表达。体外H9C2细胞,ELISA法检测LPS诱导的H9C2细胞炎症因子水平。采用表面等离子共振技术（SPR）实验检测了黄芩素是否能与MD2蛋白发生直接结合;采用计算机模拟分子对接技术观察黄芩素与MD2的...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
心肌缺血/再灌注损伤氧化应激和炎症反应作用示意图
护心肌缺血/再灌注损伤的机制研究 蛋白（LPS-Binding protein，LBP）和 CD14 蛋白的辅复合物中的 MD2 直接结合，形成 LPS-MD2-TLR4 物诱导 TLR-4 在细胞膜上的二聚和胞内段构象变化激级联反应，激活下游 MyD88 依赖和 TRIF 依赖的信号子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）等转录因子活症因子、趋化因子和粘附分子基因的转录和表达[11]。
首 先 摸 索 TBHP 刺 激 H9C2 细 胞 凋 亡 的 浓 度 ， 终 浓 度 为50,100,150,200,300 μM TBHP 1 μl 刺激 24 h。收集细胞后经 Annexin-V /PI双染色后用流式细胞仪检测 TBHP 诱导的 H9C2 细胞凋亡（图 3 A）。结果显示 50,100,150 μM TBHP 刺激 H9C2 细胞 24 h 凋亡率较小，200,300 μMTBHP 刺激 H9C2 细胞 24 h 凋亡率明显升高，故选择 200 μM 作为 TBHP 刺激浓度。为了探索黄芩素对 TBHP 诱导的 H9C2 细胞凋亡的影响，先加入黄芩素（终浓度为 2.5,5,10 μM）预处理 2 h，再加入 200 μM TBHP 刺激 24 h。流式细胞仪检测结果显示黄芩素呈剂量依赖性降低 TBHP 诱导的 H9C2 细胞凋亡（图 3 B）。该数据说明黄芩素对 TBHP 诱导的 H9C2 细胞损伤有保护作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]心肌收缩带坏死在心源性猝死中的病理学特征[J]. 葛延昌,黄莉娜,马开军. 法医学杂志. 2015(06)
[2]Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J]. National Center for Cardiovascular Disease,China HU Sheng Shou 1,KONG Ling Zhi 2,GAO Run Lin 1,ZHU Man Lu 1,WANG Wen 1,WANG Yong Jun 3,WU Zhao Su 4,CHEN Wei Wei 1,LIU Ming Bo 1 1.National Center For Cardiovascular Diseases,Beijing 100037,China;2.Ministry of Health of the People’ Republic of China,Beijing 100044,China;3.Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050,China;4.Beijing Anzhen Hospital,Beijing 100029,China. Biomedical and Environmental Sciences. 2012(03)
[3]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna. World Journal of Cardiology. 2011(06)
本文编号：3405106
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
心肌缺血/再灌注损伤氧化应激和炎症反应作用示意图
护心肌缺血/再灌注损伤的机制研究 蛋白（LPS-Binding protein，LBP）和 CD14 蛋白的辅复合物中的 MD2 直接结合，形成 LPS-MD2-TLR4 物诱导 TLR-4 在细胞膜上的二聚和胞内段构象变化激级联反应，激活下游 MyD88 依赖和 TRIF 依赖的信号子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）等转录因子活症因子、趋化因子和粘附分子基因的转录和表达[11]。
首 先 摸 索 TBHP 刺 激 H9C2 细 胞 凋 亡 的 浓 度 ， 终 浓 度 为50,100,150,200,300 μM TBHP 1 μl 刺激 24 h。收集细胞后经 Annexin-V /PI双染色后用流式细胞仪检测 TBHP 诱导的 H9C2 细胞凋亡（图 3 A）。结果显示 50,100,150 μM TBHP 刺激 H9C2 细胞 24 h 凋亡率较小，200,300 μMTBHP 刺激 H9C2 细胞 24 h 凋亡率明显升高，故选择 200 μM 作为 TBHP 刺激浓度。为了探索黄芩素对 TBHP 诱导的 H9C2 细胞凋亡的影响，先加入黄芩素（终浓度为 2.5,5,10 μM）预处理 2 h，再加入 200 μM TBHP 刺激 24 h。流式细胞仪检测结果显示黄芩素呈剂量依赖性降低 TBHP 诱导的 H9C2 细胞凋亡（图 3 B）。该数据说明黄芩素对 TBHP 诱导的 H9C2 细胞损伤有保护作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]心肌收缩带坏死在心源性猝死中的病理学特征[J]. 葛延昌,黄莉娜,马开军. 法医学杂志. 2015(06)
[2]Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J]. National Center for Cardiovascular Disease,China HU Sheng Shou 1,KONG Ling Zhi 2,GAO Run Lin 1,ZHU Man Lu 1,WANG Wen 1,WANG Yong Jun 3,WU Zhao Su 4,CHEN Wei Wei 1,LIU Ming Bo 1 1.National Center For Cardiovascular Diseases,Beijing 100037,China;2.Ministry of Health of the People’ Republic of China,Beijing 100044,China;3.Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050,China;4.Beijing Anzhen Hospital,Beijing 100029,China. Biomedical and Environmental Sciences. 2012(03)
[3]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna. World Journal of Cardiology. 2011(06)
本文编号：3405106
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3405106.html
